伤寒Vi多糖与不同载体蛋白制备的结合物的特性分析

目的比较以白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)和重组铜绿假单胞菌外毒素A(recombinant Pseudomonas aeruginosa exotoxin A,r EPA)为载体蛋白,分别与伤寒Vi多糖(typhoid Vi polysaccharide,STVi)偶联的结合物的理化特性、抗原性及免疫效应。方法分别以DT、r EPA为载体蛋白,以己二酰肼(adipyl dihydrazide,ADH)为连接剂,使Vi多糖与载体蛋白共价偶联制备多糖蛋白结合物STVi-DT和STVi-r EPA,检测其理化特性指标、抗原性,再将其于0、14、28 d免疫NIH小鼠,经眼眶采血,分离血清,采用间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平,分析其免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性。结果 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性指标相似。STVi-DT针对STVi、DT抗血清均具有明显抗原性,而针对r EPA抗血清无抗原性,STVi-r EPA针对STVi、r EPA抗血清均具有明显抗原性,而针对DT抗血清无抗原性。Vi多糖和Vi多糖蛋白结合物均具有动物免疫原性,STVi蛋白结合物较STVi具有更强的免疫原性,STVi-DT的动物免疫原性试验结果略优于STVi-r EPA;免疫2剂STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT明显升高,且STViDT组明显高于STVi-r EPA组(P0.05),具有较强的免疫记忆效应;免疫STVi-DT和STVi-r EPA后,小鼠血清GMT随免疫剂次增加和时间延长持续升高,直至稳定在一定水平,免疫持久性较好。结论 STVi-DT、STVi-r EPA理化特性相似,均具有显著的免疫原性、免疫记忆效应及免疫持久性,而STVi-DT免疫原性、免疫记忆效应更强。     

22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化及其多糖蛋白结合物的免疫原性

目的用不同活化剂进行22F型肺炎球菌荚膜多糖(type 22F streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide)的活化,并探讨其多糖蛋白结合物的免疫原性。方法分别用溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)和1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)作为22F型肺炎球菌荚膜多糖的活化剂,1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)作为链接剂,制备22F型肺炎荚膜多糖衍生物(3批Pn22FpsADH1和3批Pn22Fps-ADH2);在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的作用下,将衍生物与破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)共价结合,经凝胶过滤柱层析纯化,得到22F型肺炎链球菌荚膜多糖蛋白结合物(3批Pn22Fps-TT1和3批Pn22Fps-TT2);并对其生化指标、血清学特异性、免疫原性及异常毒性进行检测。结果衍生物Pn22Fps-ADH2的衍生率及回收率均略高于Pn22Fps-ADH1;结合物Pn22Fps-TT2的生化指标检测结果相对Pn22Fps-TT1较好;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均可与22F型肺炎球菌诊断血清特异性结合;结合物Pn22Fps-TT1和Pn22Fps-TT2均具有良好的免疫原性;无异常毒性。结论 CNBr和CDAP均可作为22F型肺炎球菌荚膜多糖活化剂,经活化和结合反应,其抗原位点得到较好保留,但CDAP作为结合疫苗多糖的活化试剂效果更佳。     

改进的蒽酮法检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中多糖浓度

目的改进检测肺炎链球菌荚膜多糖结合物中多糖浓度的蒽酮法。方法分别对蒽酮法中蒽酮的浓度和处理温度进行优化,并对改进的方法进行验证和重复性检测。结果适宜的蒽酮浓度为0·3g/300ml,处理温度为40℃,在检测肺炎链球菌多糖结合物原液中的多糖浓度时,标准曲线回归系数高,方法稳定,重现性好。结论改进的蒽酮法可以有效、准确、稳定地检测肺炎链球菌结合物多糖原液中的多糖浓度。     

肺炎链球菌多糖结合物中游离蛋白含量测定方法的建立

目的建立肺炎链球菌多糖结合物中游离蛋白含量的测定方法。方法采用Lowry法与凝胶色谱法相结合的方法检测结合物中游离蛋白浓度,再计算出结合物中游离蛋白含量,并对建立的方法进行准确性和精密性验证。结果采用本方法测定3个浓度肺炎链球菌多糖结合物中游离蛋白含量的平均回收率分别为98.6%、98.5%和97.0%;检测同一批肺炎链球菌多糖结合物的试验间变异系数CV值为3.0%。结论该方法简便、易行,准确性和精密性较好,可准确检测出肺炎链球菌多糖结合物中游离蛋白的含量。     

打破传统 转变观念 搞好提高原油采收率的整体设计

提高原油采收率是油田开发的核心问题之一,也是不同阶段开发方案的基本内容。但原油采收率无论是影响因素,还是计算方法都存在着不确定性。以往传统的研究基本上是阶段性或战术上的研究,在观念上缺乏系统性、整体性的考虑。从整体论、系统论出发,提出了提高原油采收率整体设计的概念,并提出了提高采收率的新思路,即"从容开发、主动操作;整体设计、系统控制;以人为本、促进转化;仿真模拟、综合应用",该思路体现了提高原油采收率要有一个宽松的环境,以及要全要素、全过程、多方法整体系统地提高原油采收率。同时给出了编写提高采收率整体设计方案的设计方法、设计流程、过程控制等。     

冻干A、C、W_(135)、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗的稳定性

目的观察冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存的稳定性。方法将冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗放置在2～8℃条件下30个月,定期取样,观察其物理外观,进行鉴别试验,并测定多糖含量、分子大小、水分含量、异常毒性等质量控制指标,评价疫苗质量的稳定性。结果冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗于2～8℃30个月保存,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准。结论冻干A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖疫苗在2～8℃保存,其质量稳定。     

肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量检测方法的建立

目的建立肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法。方法采用不同条件预处理样品,将结合多糖与游离多糖分离,用改良蒽酮法测定结合物中总糖与游离多糖的浓度,计算出结合物中游离多糖的含量,并对检测方法进行验证。结果采用5mol/L氯化钠溶液、85%乙醇溶液及-20℃冻存72h预处理样品,结合多糖与游离多糖的分离率及实验的有效性均最高。采用本方法测定肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量,结合多糖与游离多糖分离率的变异系数CV值为1.7%,实验有效性变异系数CV值为5.6%;检测3个浓度供试品的平均回收率分别为98.6%、98.5%和97.0%;检测1批多糖结合疫苗中游离多糖含量的CV值为4.2%。结论已建立肺炎链球菌18C型多糖结合物中游离多糖含量的检测方法,该方法可靠性强,准确性高,精密性良好。     

北堡陆地二维地震的进展

北堡陆地部分位于南堡凹陷西部,二维地震资料品质较差,除与复杂的地表条件有关外,主要受该区独特的地下地质条件影响:(1)强反射界面多,第三系产生的多次波是导致地震资料品质差的主要原因;(2)上、下第三系火山岩发育,屏蔽作用强;(3)主要目的层东营组岩性组合差、反射界面少。因此,须改进传统的地震方法,降低随机噪音,提高信噪比。实践表明:在北堡的陆地部分,将最大纵向偏移距调整为4500m,覆盖次数增加到90次,在井深9m处激发,以5个线性检波组合方式检波能够收到较好的效果。     

冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗的稳定性

目的观察冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下的稳定性。方法将冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗放置在2~8℃条件下,定期取样,检查其物理外观,检测多糖含量、水分含量和分子大小,并进行鉴别试验以及异常毒性和免疫原性试验,考察其稳定性。结果冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗于2~8℃保存30个月,各项质量控制指标仍符合该疫苗企业注册标准。结论冻干A、C群脑膜炎球菌多糖结合疫苗在2~8℃条件下,其质量稳定。