胶体金免疫层析法快速检测水样品中的镉离子

目的研制检测水样品中镉离子残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条。方法采用免疫竞争法,将抗Cd2+-EDTA单克隆抗体-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,并将人工合成的Cd-iEDTA-BSA检测抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面,作为检测线(T线),3～5min后,根据颜色直观显示检测结果。对试纸条进行灵敏度、特异性和稳定性验证,并检测添标水样。结果制备的试纸条对镉离子的最低检测限为100ng/ml;除了与Hg2+-EDTA有交叉反应外,与Fe3+、Pb2+、Cu2+等类似物无交叉反应;试纸条在常温下放置8周稳定性良好;检测添标水样的结果与ICP-AES的检测结果一致。结论胶体金免疫层析法操作便捷,稳定可靠,可作为水样中重金属镉离子残留现场检测和监控的有效手段。     

布病胶体金免疫层析检测方法的建立

目的建立诊断布病的胶体金免疫层析方法。方法以B.abortus 544A全菌免疫BALB/c小鼠,以杂交瘤细胞技术制备单抗,纯化后以胶体金标记,选择最佳反应模式组装试纸条,并对其进行鉴定。结果已筛选4B8、1G9、1C9和1E24株稳定分泌单抗的细胞株,以其单抗互相配对组合的试纸条均能检出B.abortus 544A菌。其中以1G9为包被抗体、4B8为金标抗体的试纸检测效果最佳,与以B.abortus 544A菌多抗为包被抗体、4B8单抗为金标抗体的试纸对比,检测结果一致,且不与其他菌发生交叉反应。对PCR检测为阳性的70份牛血清样品,两种试纸条检测结果的符合率均为100%。结论所建立的诊断布病的胶体金免疫层析法快速、简便、准确,有望用于布病的诊断。     

犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条的制备

目的制备犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,用于标记抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体2D12制作金标垫,兔抗细粒棘球绦虫Ediag A864多克隆抗体标记检测线(T线),羊抗鼠Ig标记质控线(C线),制备胶体金试纸条,并进行特异性、敏感性、重复性及稳定性试验。用优化的胶体金检测试纸条对96份犬粪样品(36份参照阳性样,60份临床样品)进行检测。结果制备的犬细粒棘球绦虫感染胶体金检测试纸条与犬蛔虫阳性粪及犬贾第虫阳性粪样品均无交叉反应;粪便稀释度为1∶4时仍可检出正确结果;3次检测参照阳性样本均为阳性;于不同温度(室温、4及37℃)下保存不同时间(1、2、3、4个月)的试纸条均可检出正确结果。96份犬粪便样品中,36份参照阳性样品检出率为97.2%(35/36),60份临床样品均为阴性。结论制备的试纸条具有良好的特异性及稳定性,可应用于临床样品检测及大规模流行病学调查。     

三聚氰胺快速检测试纸条评价

胶体金试纸条因其方法简便、快速,已经广泛应用于日常检测和实验研究中.为了解国产三聚氰胺试纸条的有效性和可靠性,选择了一种市售试纸条,从灵敏度、特异性、准确度、耐变性、批间变异等多个角度对其进行了技术评价.结果发现用胶体金法测定牛奶中的三聚氰胺,检测限为0.05 mg/L,特异性、耐变性较好,批件差异较小,不同基质对检测结果无影响.此试纸条满足食品中有毒有害物质快速检测的要求,可作商品化快速检测试纸条使用.     

氧化剂对血痕的金标快速检测法影响的研究

金标快速检测法是一种能够对血痕中血液是否为人血进行快速种属认定的检测方法,但血痕中氧化剂的存在会使人血中的血红蛋白(Hb)氧化成高铁血红蛋白(MetHb),失去载氧活性,从而导致胶体金检测试纸条(FOB)种属检测不能检测出人血的存在。本文探究氧化剂的反应机理和血红蛋白被氧化的机理,并通过实验,获得导致胶体金检测试纸条失效的氧化剂最低剂量。     

人心肌脂肪酸结合蛋白胶体金快速检测试剂条的研制

建立一种以胶体金为基础的心肌脂肪酸结合蛋白质(H-FAB)免疫层析快速检测方法。方法以双抗体夹心的原理研制胶体金免疫层析试纸条,并对其特异性、灵敏度以及临床应用进行评价。最低检出限为10 ng·m L-1;10 min内即可观察结果;检测急性心肌梗塞(AMI)患者46例、正常人群85例,试纸条的敏感度为86.96%,特异度为97.65%,约登指数为0.8461,kappa值为0.8633,表明试纸条与临床确定的结果几乎一致。该方法方便、快捷,能有效的检测H-FAB,胶体金免疫层析试纸的研制为心肌梗塞的快速诊断与筛查奠定了基础。     

胶体金技术测定黄瓜中甲霜灵残留

比较了胶体金试纸法与气相色谱法在检测黄瓜甲霜灵残留中的应用。结果表明,胶体金试纸检测为阴性的样品,经气相色谱检测结果为未检出,阳性样品经气相色谱检测结果与胶体金试纸相一致。与气相色谱法比较,胶体金试纸法检测甲霜灵具有操作简便、直观、快速、省时的特点,其特异性、较高的敏感性,可作为黄瓜中甲霜灵残留现场检测的手段应用。     

ELISA法与胶体金试纸条检测HBsAg差异分析

目的探究胶体金试纸条与ELISA法检测HBsAg临床应用价值。方法分别用胶体金试纸条与ELISA法检测360份标本中的HBsAg,并对阳性率进行比较,然后将强阳性的10份标本作倍比稀释,观察2种检测方法灵敏度的差异。结果2种方法的阳性率之间无显著差异,ELISA法灵敏度较胶体金试纸条灵敏度高。结论2种方法皆是检测HBsAg的良好方法,胶体金试纸条法操作简便、快速适用于急诊及健康人群的筛查,ELISA法适用于常规检测。     

胶体金试纸条法快速检测纺织品中总铅和总镉含量

建立了一种基于铅、镉单克隆抗体的胶体金试纸条方法,用于快速检测纺织品中总铅、总镉含量,通过加标实验及对实际试样进行测试,探讨了试纸条的灵敏度、准确性和稳定性.结果表明:制备胶体金试纸条时,铅、镉单克隆抗体较佳用量分别为50,45μL;试纸条对纺织品中总铅及总镉含量的检出限分别达5.0 mg/kg和0.625 mg/kg...     

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的原核表达及其胶体金免疫层析检测方法的建立

目的原核表达艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH),并建立GDH胶体金免疫层析检测方法。方法以艰难梭菌(ATCC BAA-1382)全基因组为模板,PCR法扩增GDH基因,并克隆至载体pET-30a(+),将重组质粒转染至E. coli BL21(DE3),诱导表达重组GDH,并优化IPTG终浓度(0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mmol/L)、诱导时间(0、2、4、6 h)及诱导温度(31、34、37℃),表达产物采用Ni-NTA purificationSystem进行纯化。用纯化蛋白免疫家兔,以获得的多克隆抗体作为金标抗体,制备胶体金试纸条,并验证其灵敏性、特异性、精密性及稳定性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒p ET-30a-GDH构建正确。最适诱导表达条件为:于37℃,IPTG终浓度为0. 8 mmol/L诱导4 h。获得的免疫血清效价达1∶51 200,制备的胶体金试纸条灵敏性为60 ng/mL,与其他肠道菌无交叉反应,批内、批间结果无差异,且具有良好的稳定性。结论原核表达了重组GDH,成功建立了GDH胶体金试纸条检测方法,且灵敏性、特异性、精密性及稳定性均良好,具有临床应用价值。     

胶体金免疫层析法快速检测水果中三氯杀螨醇残留

[目的]建立了快速检测水果中三氯杀螨醇残留的胶体金免疫层析方法。[方法]在对固相载体进行优化的基础上,基于竞争抑制模式建立胶体金免疫层析方法。[结果]该方法对水果中三氯杀螨醇的检出限为1.0 mg/kg,满足国家标准对水果中三氯杀螨醇最大残留限量的要求,且特异性良好。[结论]该方法具有快速、简便、经济实用等特点,适用于水果中三氯杀螨醇残留的现场筛查和检测。     

纳米金修饰电极的电化学研究

将由柠檬酸三钠与氯金酸制备的纳米金颗粒利用自组装方法修饰于金电极表面形成纳米金修饰电极,运用N5粒度测定仪、透射电子显微镜（TEM）和原子力显微镜（AFM）对纳米颗粒及其修饰电极进行了表征。利用循环伏安法（CV）与交流阻抗法（EIS）研究了纳米金修饰电极的电化学性质。     

Dyeing of silk cloth with colloidal gold

Silk cloth was dyed successfully by dipping it in a gold hydrosol which was prepared in the presence of a cationic surfactant, stearyltrimethylammonium chloride (SC). The color of thus dyed silk cloths is due to colloidal gold particles adsorbed on silk fibers and varies from reddish purple to dark purple according to the periods of dipping time and the amounts of SC in the gold hydrosol used. The mechanism for the adsorption of colloidal gold on the silk fibers is proposed.     

The Ultrafiltration of Very Dilute Colloidal Gold Suspensions

The ultrafiltration behaviour of very dilute colloidal suspensions has been investigated in terms of transmembrane pressure and pH in a batch cell with and without stirring using PM30 and SKIP membranes.For small (10 nm) colloidal gold particles the unstirred flux was higher than the stirred. An increase in concentration polarization due to the lack of stirring shields the electrostatic repulsion between particles, resulting in aggregation of particles that are retained at the membrane surface. This loosely packed layer can be responsible for the higher flux in the unstirred condition. For large (50 nm) gold particles, greater flux was achieved in stirred condition due to the decrease in concentration polarization.While the SKIP membranes showed a complete retention for larger colloidal gold particles, for smaller particles the retention was complete after around 1 minute. The PM30 membrane completely retained colloidal gold particles of both sizes.Lower flux with higher flux decline was obtained for the smaller colloidal gold particles compared to the larger ones. The cross section micrographs show that the larger sol forms a less densely packed deposit layer on the membrane surface. Changing the pH of the colloidal gold suspension resulted in a substantial change to the flux and retention. However the level of local ionic concentration at the membrane surface appears to be of utmost importance as it affects the degree of colloidal aggregation and packing of the deposit layer, thus influencing flux and retention.Analysis of the filtration data coupled with electron microscopy showed that cake filtration was the dominant mechanism during the course of ultrafiltration as well as microfiltration of very dilute colloidal gold suspensions.     

重组抗体的N-端氨基酸序列测定

目的建立具有焦谷氨酸封闭N-端的重组抗体N-端氨基酸序列分析方法。方法利用高温稳定的焦谷氨酸肽酶,在重组人源抗狂犬病病毒单抗样品高温变性条件下,去除其N-端焦谷氨酸封闭。经还原SDS-PAGE和电印迹后,进行N-端氨基酸序列测定,并与电印迹后在PVDF膜上去封闭处理效果进行比较。结果用该方法去封闭后的抗体样品N-端焦谷氨酸去除效果较好,可顺利进行N-端氨基酸序列测定;而电印迹后在PVDF膜上去封闭处理,N-端焦谷氨酸不能充分去除,无法进行N-端氨基酸序列测定。结论该方法适于具有焦谷氨酸封闭N-端的单抗的N-端氨基酸序列分析。     

胶体金免疫层析法检测小分子物质

在过去的6年里，胶体金及免疫层析试剂越来越多的被用于快速检测上。这一简单免疫层析试剂给很多不同分析物提供了简便而又快速的方法，它的出现给很多工业带来了冲击。最近，胶体金免疫层析法检测小分子物质的报道日益增多，特别是对兽药和农药的检测。文章主要讲述了用于检测小分子物质的胶体金检测试纸的制备原理、检测原理、应用和进展。     

胶体金免疫层析法测定巴旦木中的黄曲霉毒素B1

采用胶体金免疫层析法快速检测巴旦木中的黄曲霉毒素B1。巴旦木样品粉碎后,经提取,以胶体金免疫层析法对其进行黄曲霉毒素B1测定,并与酶联免疫吸附法进行比较。结果表明,当巴旦木中黄曲霉毒素含量超过国家限量标准（5μg／kg）,胶体金免疫层析法检测结果为阳性,说明该方法能够满足干果样品中黄曲霉毒素B1快速检测的要求。     

噬菌体随机肽库技术筛选抗CCR5单克隆抗体的识别表位

目的利用噬菌体随机肽库技术筛选趋化因子受体5(CCchemokine receptor 5,CCR5)单克隆抗体的识别表位。方法用抗CCR5单克隆抗体筛选噬菌体随机12肽库,采用双抗体夹心ELISA法鉴定噬菌体阳性克隆,挑取阳性克隆测定DNA序列,推导其氨基酸序列并进行同源性分析。结果从噬菌体随机12肽库中筛选出30株可与抗CCR5单抗特异结合的噬菌体克隆,其中多数克隆呈现核心序列HY-TC-SS-XX-P/FYS-X,该序列与CCR5的一级序列ECL2具有一定的同源性。结论 HY-TC-SS-XX-P/FYS-X序列是抗CCR5单抗的识别表位。     

从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5单克隆抗体识别的抗原表位

目的从噬菌体表面展示肽库中筛选边缘无浆体膜表面蛋白5(Membrane surface protein5,MSP5)单克隆抗体识别的抗原表位。方法用MSP5单克隆抗体1D8作为靶标,对噬菌体展示随机12肽库进行筛选,通过ELISA和竞争抑制ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并提取阳性克隆的单链DNA,进行测序分析。结果从表面展示随机肽序列的噬菌体文库中筛选到与MSP5单抗1D8特异结合的噬菌体克隆,其一致序列为LING。竞争抑制试验表明,含特异序列的克隆能与MSP5重组蛋白抗原竞争。结论初步确定MSP5单克隆抗体1D8的抗原表位为线性表位,为进一步研究其在边缘无浆体诊断及新型疫苗研制中的作用奠定了基础。