感染性疾病RNA病毒性病原体生物信息学检测方法的建立

目的以艾滋病病毒(HIV)为研究对象,建立感染性疾病RNA病毒性病原体的生物信息学检测方法。方法应用DNase-非序列依赖的单引物扩增技术,将艾滋病患者血清过滤后,经DNase处理去除血清中的内源DNA,提取血清病毒RNA,反转录合成病毒RNA的双链cDNA,TaqⅠ酶切双链cDNA,加接头分子,并以接头分子为引物非特异扩增病原基因;PCR产物克隆后,酶切鉴定并测序,经GenBankBLAST软件进行序列分析。结果非序列依赖的单引物扩增HIV患者血清中外源基因得到多个DNA片段;重组克隆质粒经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,可见插入片段存在;将所有PCR产物测序,序列与已知病原基因序列一致。结论应用DNase处理及非序列依赖的单引物扩增方法可以检测RNA病毒性病原体。     

疗效型美容化妆品

过去几年,被认为是“皮肤康复”(Skin-repair)的产品,在市场上出现了很少,难于知道这是否意味着使受冷空气损伤的皮肤(如皲裂、裂缝和开裂)痊愈,还是皮肤迅速地翻转使受损细胞脱落后的皮肤更迅速地正常化,或是使暴露在紫外光下受损的DNA和RNA康复。我总感到这种市场商人想使我们相信后一种说法,即是酶促进了RNA和DNA的康复。如果你对有关这个课题的研究有更多的兴趣,可参阅Journal of CellScience 1987年第六期增刊。其中公布了有关DNA康复的分子生物的完整的结论,并     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶的底物特异性及降解产物的特性

目的研究蚯蚓组织中一种新型脱氧核糖核酸酶(EWD)的底物特异性及降解产物的特性。方法采用ZOR-BAX-Oligo柱-HPLC、琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法等技术,分析EWD对环状质粒DNA、线状λ-DNA、大肠杆菌基因组的降解作用,及对真核鲱精DNA、单链DNA等的降解中间产物和终产物的特性,并观察其对RNA的降解作用。结果EWD对这几种DNA均有降解作用,降解产物为较均一的、小于18bp的寡核苷酸。但EWD对RNA无降解作用。结论EWD为脱氧核糖核酸内切酶类。     

拉米夫定的合成进展

拉米夫定是新一代的嘧啶核苷类抗病毒药物,可通过降低乙型肝炎病毒(HBV)依赖RNA的DNA多聚酶生物活性,明显抑制HBV-DNA的合成,具有作用强、安全、不良反应少等特点,是治疗不同类型的乙型病毒性肝炎的新选择。一般的化学合成方法存在异构体拆分困难,如果在合成过程中引入薄荷醇作为手性拆分试剂,可直接得到旋光性的拉米夫定,适合工业化生产。对光学纯拉米夫定的合成及前景进行了综述。     

脱氧核酶的应用研究进展

核酸新功能的发现进一步加深了人们对DNA的认识.脱氧核酶具有RNA切割作用、DNA切割作用、金属螯合作用、过氧化物酶活性、DNA激酶活性以及DNA连接酶活性等多种催化功能.通过对功能核酸的研究,开辟了脱氧核酶在实际应用方面的新方向.     

氨基树脂固定化S-腺苷甲硫氨酸合成酶的研究

以氨基树脂为载体对S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶进行固定化,优化了酶的固定化条件并对固定化酶的性质进行了研究。优化的固定化条件为:戊二醛体积分数5%、SAM合成酶添加量20mg·g-1、固定化时间5h。所制备的固定化SAM合成酶的酶活力为476.8U·g-1,酶活力回收率为74.5%。与游离SAM合成酶相比,固定化SAM合成酶的稳定性大幅提高,在50℃孵育5h酶活力仍保留61.2%,而游离SAM合成酶则完全失活;在pH值为6.0~6.5、8.0~9.5的缓冲溶液中,固定化SAM合成酶也更加稳定;固定化SAM合成酶连续催化反应10批次,酶活力保留86.3%;固定化SAM合成酶在4℃储存30d,酶活力保留81.4%。固定化SAM合成酶米氏常数KATPm=0.14mmol·L-1,KLm-Met=0.28mmol·L-1。     

直接服用核酸对健康无益

脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)对生命的重要性不言而喻。但国际上一些生物学专家和营养学专家指出,直接服用核酸对改善健康并没有用处,过多服用还可能有害。现代生物学指出,正常人不存在核酸匮乏的问题,人体所需要的 DNA 和 RNA 等核酸都由自身合成。人每天都会从饮食中摄取大量核酸,它们并不是必需的营养物质。世界卫生组织在2000年底发布的《建立世界范围的人类营养     

基于酶辅助循环放大和银纳米簇技术构建荧光传感器用于MicroRNA的检测

基于双链特异性核酸酶(Duplex-specific nuclease,DSN)选择性切割DNA单链和DNA保护的银纳米簇的特性,建立了一种新型的荧光传感器用于MicroRNA(MiR-21)的高灵敏检测。当MiR-21存在时,与Cp杂交形成DNA/RNA双链结构,此时在DSN的水解下,释放出探针DNA部分片段和完整的MiR-21。释放出来的MiR-21可再次发生与Cp杂交、DSN酶切等反应,如此反复,可实现一条MiR-21分子与多条探针杂交、酶切的循环过程。经磁分离,上清液中的探针DNA部分片段与Ag+结合并在硼氢化钠(Na BH4)的还原下产生银簇,检测到较强的荧光信号。相反,当MiR-21不存在时,DSN对单链探针无酶切作用,不能水解Cp,经磁分离,上清液中检测不到荧光信号。在最佳条件下,该传感器检测MiR-21的线性范围为50 fmol/L~10 pmol/L,检测限达6 fmol/L,而且具有较好的选择性,有望用于临床实际样本中微量MiR-21的检测。     

核糖核酸的人工合成

<正> 1979年8月日本第99次药学会年会上,大阪大学药学部池原教授等发表了一个报告。据称已人工合成了甲酰蛋氨酸转运核糖核酸(formylmethioninetRNA),它具有77个核糖核酸(RNA),并以固定的顺序排列着的。用人工合这样长链的RNA尚属创举。遗传因子(遗传信息)和脱氧核糖核酸(DNA)等的合成,都由于随着最近遗传信息工学的进展而陆续获得成功,而其中以RNA的合成特别困难,因RNA     

漆酚的生物合成

<正> 在生物体内(活体),化合物是通过一系列化学反应而被合成和分解的,每一个反应都由一种酶所催化和调节、这些过程在生物化学上统称为代谢过程,它主要包括分解代谢(降解作用)和合成代谢(合成作用)两个部分,这是生命活动过程的化学基础。所有的生物都具有相同的代谢途径,以合成并利用某些必要的化合物,诸如糖类、氨基酸类,普通的脂肪酸类、核酸类以及由它们形成的聚合物(多糖类、蛋白质类、脂类、RNA 及 DNA 类)等     

紫外分光光度法测定核酸含量的影响因素分析

选择寡聚核苷酸、鲑鱼精单链DNA、小牛胸腺双链DNA标准物质为样本,系统研究了溶液pH、苯酚、丙酮、蛋白质、多糖等对紫外分光光度法测量结果的影响情况,另外考察了核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)的相互影响情况。研究发现基于分光光度法的核酸定量分析,易受溶液pH、苯酚、丙酮、蛋白质、多糖等的影响,另外,DNA和RNA之间也会相互干扰。因此,紫外分光光度法测定核酸含量时,特别是该方法用于核酸标准物质特性量值确定时,需要样品高度纯化,pH确定的条件下才能保证测量结果的准确可靠。     

磺酰脲类除草剂对虞美人的抗性分子机理

乙酰乳酸合成酶(ALS)，也叫乙酰羟基酸合成酶，它是高等植物、细菌和酵母中支链氨基酸异亮氨酸、缬氨酸和亮氨酸第一阶段生物合成途径中的一种酶。它催化二二分子丙酮酸可缩合成乙酰乳酸和CO2．或者催化一分子丙酮酸与α-丁酮酸缩合成乙酰羟基丁酸和CO2，这个酶被其三个产物反馈抑制。     

大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株的构建与表达

目的构建大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株,提高邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的产量。方法利用依赖于DpnⅠ酶的PCR方法突变表达载体pET-22b(+)-Trp Operon上的关键位点,PCR扩增Trp OperonM基因,构建pET-22b(+)-Trp OperonM重组表达质粒,经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。制备粗酶液,经比色法测定邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性。结果 PCR扩增产物可见约7000bp的Trp OperonM条带;所构建的重组表达质粒经酶切及测序鉴定正确;邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性比大肠杆菌BL21(DE3)空菌分别提高了4.5倍和5.2倍。结论已成功构建了大肠杆菌色氨酸操纵子基因突变株BL21(DE3)/pET-22b(+)-Trp OperonM,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性均有提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定了基础。     

肝细胞RNA在小鼠体内的抗突变作用

以 C_(57)BL/6J 小鼠为模型,皮下注射人肝或牛肝 RNA,4小时以后腹腔注射 MMC,,同时皮下埋植 5-溴尿嘧啶,再经24小时后取骨髓细胞进行姐妹染色单体交换及染色体畸变数检测;同时取 C_(57)BL/6J 雄性小鼠皮下注射人肝 RNA,4小时后腹腔注射 MMS,17天后,检测非程序 DNA 合成反应。结果表明肝 RNA 对 MMC 诱发的小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换和染色体畸变数,对 MMS 诱发非程序 DNA合成反应均具有明显的抑制作用。以上结果提示人肝及牛肝 RNA 对 MMC 或 MMS 所诱发的基因突变具有防护作用。     

基于核酸外切酶Exo I的DNA折纸结构纯化方法

基于核酸外切酶(Exo I)选择性降解单链DNA的性质，为增加DNA折纸结构纯化方法的多样性，开发了一种快速除去剩余DNA单链、纯化DNA折纸结构的新方法。以三角形和矩形DNA折纸结构为研究对象，对缓冲液环境、酶用量、反应温度、反应时间等实验条件进行了优化，采用琼脂糖凝胶电泳方法与原子力显微技术对产物进行分析与表征。结果表明，该方法可以达到快速除去DNA单链、纯化DNA折纸结构的目的，Exo I酶处理不影响DNA折纸结构的完整性及后续的应用开发。     

新颖除草剂嗪吡嘧磺隆(metazosulfuron)

<正>磺酰脲类除草剂可以有效抑制乙酰胆碱合成酶(ALS,己知亦为乙酰羟酸合酶),此酶为植物体内氨基酸支链生物合成关键酶。由于ALS仅存在于细菌和植物中,故对哺乳动物安全。该类除草剂的应用已超过30年,依然为农业生产中一类重要的除草剂类别。在日本,磺酰脲类除草剂已广泛应用于稻田,但有几种杂草对其出现了抗性并在日本全国扩展。为此,Manabu等人研究开发了一种新颖除草剂,可选择性防除稻田杂草,包括磺酰脲抗性生物型。     

小鼠神经生长因子基因治疗型DNA质粒的质量控制

目的对小鼠神经生长因子(NGF)基因治疗型DNA质粒进行质量控制。方法用酶切鉴定法和PCR法进行DNA质粒的结构确认,鸡胚背根神经节法和免疫印迹测定DNA质粒表达产物的生物学活性,分光光度法测定浓度,琼脂糖凝胶电泳法和DNA-NPR-HPLC法测定纯度,气相色谱法测定乙醇和异丙醇残留量,琼脂糖凝胶电泳法测定RNA残留量,其余检测项目按《中国药典》三部(2005版)规定进行。结果用上述方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《预防用DNA疫苗临床前研究技术指导原则》和《中国药典》三部(2005版)的要求。结论所采用的质控方法和质量标准能够保证该DNA质粒的安全、有效,可用于治疗型DNA质粒的质控。     

生物合成二酮哌嗪类化合物的环二肽合酶研究进展

环二肽合酶(CDPSs)是新发现的一类与非核糖体肽合成酶(NRPSs)不同的合成非核糖体肽的酶。该类酶以氨酰-tRNA(aa-tRNA)作为底物合成具有广泛生物活性的化合物——二酮哌嗪类化合物,CDPSs的催化机制比较特殊,只能利用20种天然氨基酸形成的氨酰-tRNA作底物,在后修饰酶的作用下形成环二肽类化合物。CDPSs的晶体结构与Ⅰ型氨基酸-tRNA合成酶(aa-tRSs)的催化结构域类似,但催化机制不同。CDPSs蛋白非常小,但与NRPSs一样,能催化完整的环二肽类化合物的合成。     

以淀粉为原料双酶法生产海藻糖的研究进展

双酶法生产海藻糖是指以淀粉为原料,在低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶两种酶的协同作用下,将一定链长的直链淀粉转化成海藻糖的技术。双酶法作为最早实现工业酶转化生产海藻糖的方法,起源于日本,具有原料便宜易得、工艺较成熟、不需要高能量化合物等优点。文章重点介绍了双酶法在国外(尤其是日本)及国内的发展及应用。随着生物基因工程技术的发展,越来越多性能优异的低聚麦芽糖基海藻糖合成酶和低聚麦芽糖基海藻糖水解酶被提取、优化和构建,为双酶法工艺的进一步完善和工业化提供了可能。     

过氧化氢酶过表达对α粒子致肺癌细胞模型DNA氧化损伤和表型的影响

目的探讨过氧化氢酶(catalase,CAT)过表达对α粒子辐射致肺癌细胞模型BERP35T1内DNA氧化损伤水平和恶性表型的影响。方法构建p EGFP-CAT真核表达质粒,经PCR、双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将该重组表达质粒及空载体转染至BERP35T1细胞中,经G418筛选出具有抗性的细胞株。Real-time PCR和Western blot法检测BERP35T1细胞中CAT基因m RNA转录和CAT蛋白表达水平;免疫细胞化学法、MTT法、细胞划痕愈合试验和锚着独立生长试验分别检测CAT过表达对BERP35T1细胞DNA氧化损伤水平(8-OHd G水平)、增殖(细胞存活率)、迁移能力(细胞迁移距离)和锚着独立性(软琼脂克隆形成率)的影响。结果重组表达质粒p EGFP-CAT经PCR、酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,获得了CAT稳定表达的BERP35T1细胞株BERP35T1-CAT-7。空白对照BERP35T1、BERP35T1-p EGFP和BERP35T1-CAT-7细胞中CAT基因m RNA转录水平分别为0.90±0.23、1.00±0.12和2.91±0.41,CAT蛋白相对表达水平分别为0.97±0.11、1.00±0.00和5.72±1.28,8-OHd G表达水平分别为1.65×10-2、1.60×10-2和8.95×10-3,细胞存活率分别为(95.33±4.26)%、(100.00±8.29)%和(61.63±3.08)%,细胞迁移距离分别为(150.68±9.98)μm、(115.02±30.73)μm和(44.25±10.53)μm,细胞软琼脂克隆形成率分别为(2.50±0.02)‰、(2.10±0.02)‰和(0.70±0.02)‰。结论 CAT过表达可能通过降低DNA氧化损伤水平,抑制BERP35T1细胞的增殖、转移和锚着独立生长能力等恶性表型。