基于聚邻苯二胺/石墨烯修饰电极的肠道病毒71型（EV71）电化学免疫传感器

采用改性的Hummers法制备石墨烯氧化物（GO）,并将其滴涂在玻碳电极（GCE）表面。通过电化学还原将GO还原为石墨烯,并进一步采用电化学聚合法在石墨烯表面形成聚邻苯二胺（PoPD）膜,从而制备了PoPD/石墨烯修饰GCE。将EV71抗体固定在修饰电极表面,制备新型的电化学免疫传感器。当发生免疫反应时,由于EV71抗原与抗体生成的免疫复合物阻碍了电子的传递,PoPD的氧化峰电流下降。当抗原的浓度在0.1-80ng/mL范围内,PoPD氧化峰电流的降低值与抗原的浓度成正比。该免疫传感器对EV71的检测限为0.08ng/mL（信噪比为3）。     

免标记型免疫传感器的构建及其对毛织品微痕迹的检测

为检测毛织品微痕迹,设计了一种针对羊毛角蛋白的免标记型免疫传感器。通过层层自组装技术构建免疫传感器,用3-巯基丙酸(MPA)在电极表面形成单分子层,活化羧基端后与抗体结合,利用免疫反应检测羊毛角蛋白。选用5种抗原分析了免疫传感器的特异性,利用不同浓度的羊毛角蛋白溶液分析了免疫传感器的敏感性。结果显示:免疫传感器对于羊毛角蛋白具有选择性,并且在检测羊毛角蛋白时表现出了优异的灵敏度。免疫传感器的线性检测范围为0.10～100.00μg/mL,最低检测限可以达到11.53 ng/mL。研究结果表明,该免疫传感器可以用于毛织品微痕迹的鉴定分析和定量计算,并且对其具有极高的检测灵敏性。毛织品的电化学免疫检测体系的建立,为毛织品的超灵敏检测提供了一种新的思路,拓展了毛织品文物的分析方法。     

聚苯乙烯和聚乙烯醇作粘结剂的新型碳糊电极用于构建电化学免疫传感器的研究

利用掺杂聚乙烯醇的聚苯乙烯作粘结剂,制备成新型碳糊电极,该电极具有制作简单、导电性能良好和改进的表面吸附性能,可用于构建基于表面吸附固定生物组分的电化学免疫传感器.用转铁蛋白-转铁蛋白抗体作模式分析物,辣根过氧化物酶(HRP)作为酶标,建议的免疫传感器测定人转铁蛋白的线性关系是0.50～70.0ug/mL(相关系数为0.983),免疫传感器在使用后可通过简单的打磨抛光更新,表现出良好的重复使用性.     

食品中磺胺类药物化学发光酶联免疫检测试剂盒的初步研究

在常规酶联免疫法的基础上,将磺胺类母核与牛血清白蛋白合成免疫抗原后免疫小鼠制得磺胺类单克隆抗体,并进一步优化抗体工作浓度、反应时间等实验参数,建立了一种简便、快速、精确的磺胺类残留一步式化学发光酶联免疫检测方法.结果表明该方法最佳检测范围为1.0～81.0 ng/mL,检测IC50达3.047 ng/mL,对猪肉的最低检测限为0.74 ng/g,可检出国际规定的SAs残留标准底限值以下的残留量.与常规ELISA方法相比,检测限和灵敏度基本一致,但反应时间缩短了60 min.证明采用一步式化学发光酶联免疫检测磺胺类残留可以大幅度缩减检测时间,符合快速检测的要求.     

基于硫堇电聚合膜的甲胎蛋白免疫传感器

将硫堇电聚合到铂电极表面形成聚硫堇膜,通过戊二醛自组装蛋白质,在酶标抗体与相应的抗原发生免疫反应时催化底物氧化聚硫堇。根据聚硫堇膜电极的还原电流表达抗原的量,制得高灵敏度的甲胎蛋白免疫传感器。通过循环伏安法及差示脉冲伏安法考察了电极表面的电化学行为,并对免疫传感器的性能进行了详细研究。在优化的实验条件下,伏安法检测甲胎蛋白的线性范围为5.00～200 ng.mL-1,线性相关系数0.998 7,检测限3.70 ng.mL-1。     

聚苯乙烯和聚乙烯醇作粘结剂的新型碳糊电极 用于构建电化学免疫传感器的研究

利用掺杂聚乙烯醇的聚苯乙烯作粘结剂,制备成新型碳糊电极,该电极具有制作简单、导电性能良好和改进的表面吸附性能,可用于构建基于表面吸附固定生物组分的电化学免疫传感器。用转铁蛋白-转铁蛋白抗体作模式分析物,辣根过氧化物酶(HRP)作为酶标,建议的免疫传感器测定人转铁蛋白的线性关系是0.50～70.0μg/mL(相关系数为0.983),免疫传感器在使用后可通过简单的打磨抛光更新,表现出良好的重复使用性。     

酶联免疫分析法研究进展

酶联免疫分析法广泛应用于临床检测、生化分析等领域。本文以各种标记酶为线索　,综述了近年来酶联免疫分析法的研究进展,包括辣根过氧化物酶,碱性磷酸酯酶,青霉素　酶等标记酶和各种测定方法如荧光法、发光法、电化学分析法等,及其在分析测试中的应用　。引用参考文献５４篇。     

血清中总cTnI、全长cTnI与cTnI-C复合物联合检测方法的建立及其临床应用

通过时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluorescence immunoassay,TRFIA)建立血清中全长cTnI、总cTnI、cTnI-C复合物的联合检测方法并进行方法学评估,并采用总cTnI、cTnI-C复合物及全长cTnI/总cTnI比值分析心肌损伤程度、发病时长及疗效。结果表明:Total-cTnI-TRFIA(检测总cTnI)灵敏度为0.030 ng/mL,检测范围为0.030～40.000 ng/mL,回收率为106.62%,与临床检测方法相关性最高(R~2=0.9225),阳性检出率为100.00%;Full-cTnI-TRFIA(检测全长cTnI)灵敏度为0.007 ng/mL,检测范围为0.007～40.000 ng/mL,回收率为102.23%,与临床检测方法相关性最低(R~2=0.6238),阳性检出率为90.90%;cTnI-C-TRFIA(检测cTnI-C)灵敏度为0.011 ng/mL,检测范围为0.011～40.000 ng/mL,回收率为92.15%,与临床检测方法相关性居中(R~2=0.8868),阳性检出率为98.70%。三种方法批内和批间的变异系数均小于10.00%。对3名心肌损伤患者进行连续检测,结果表明:总cTnI和cTnI-C复合物的浓度可以准确反映患者心肌损伤的程度;全长cTnI占比可以更好地提示发病时间,对预后的提示更早。联合检测血清全长cTnI与总cTnI并计算全长cTnI占比具有更好的临床诊疗前瞻性,有助于心肌损伤的诊断与疗效评估。     

液晶传感竞争免疫法检测天蚕素B

制备了一种基于液晶取向变化的非标记液晶型免疫传感器,并结合竞争免疫反应原理,将其用于天蚕素B检测.首先采用硅烷化试剂3-氨丙基三乙氧基硅烷/二甲基十八烷基[3-(三甲氧基硅基)丙基]氯化铵(APTES/DMOAP)混合自组装构建可诱导液晶分子呈均一垂直排列的基底敏感膜,再通过戊二醛交联法将天蚕素B固定到基底表面,当天蚕素B抗体与天蚕素B特异性结合后扰乱了液晶分子的取向,使液晶膜的颜色和亮度发生变化,并通过计算偏光显微镜成像灰度强度,可在0.01~0.1ng/mL范围内定量化分析天蚕素B浓度.结果表明,固定化天蚕素B浓度为150ng/mL,天蚕素B抗体浓度为500ng/mL时,天蚕素B检测限可达0.01ng/mL.本方法具有灵敏度高、特异性好、非标记和操作简单等优点.     

金纳米粒子修饰酶脂质体生物传感器检测Hg~(2+)和Cu~(2+)浓度的研究

以金纳米粒子(AuNPs)自组装技术为基础,利用葡萄糖氧化酶脂质体(GLM)反应器修饰玻碳电极,构建了葡萄糖氧化酶电化学生物传感器,用于快速高效检测重金属残留。对所制备的金纳米粒子和酶脂质体的表观形态进行了表征,采用循环伏安法考察金纳米修饰葡萄糖氧化酶脂质体电极的电化学性能。结果表明:经金纳米粒子修饰的酶脂质体电极氧化峰电流明显增大;以重金属离子为例,在Hg~(2+)和Cu~(2+)浓度分别为10~(-6)～10~(-2)mmol/L和10~(-8)～10~(-4)mmol/L范围内,离子浓度与抑制率均具有良好的线性关系,最低检出限分别为4.38 ng/m L和86.3 ng/m L(S/N=3),拟合方程分别为I=0.042 3lg C+0.583 6和I=0.066lg C+0.632 3。金纳米粒子修饰酶脂质体生物传感器,可有效提高电化学生物传感器的灵敏度;修饰了金纳米粒子的酶脂质体生物传感器可以简便快速、高效灵敏检测重金属离子,为电化学方法应用于重金属离子的检测提供了新依据。     

基于上转换免疫层析技术的真菌毒素检测

针对目前检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的常用方法在检出时间或者灵敏度上都存在不足的问题,研究制备出了羧基修饰的核壳结构上转换荧光纳米颗粒,并与DON单克隆抗体偶联,应用于试纸对DON进行定量检测.对麦片中DON含量的最低检测限为0.7 ng/mL.半抑制浓度为9 ng/mL,检测范围为0.7~50.0 ng/mL,回归率在90%~156,.本研究基于上转换免疫层析技术成功建立了一种快速灵敏的检测DON的方法,可为其他包括毒素类的兽药残留检测提供借鉴.     

人参皂苷Rb1单克隆抗体的制备与鉴定

用人参皂苷Rb1分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)反应合成了交联抗原GRb1-BSA(GRb1与BSA的结合比为10∶1)和GRb1-OVA(GRb1与OVA的结合比为8∶1)。以GRb1-BSA为免疫原,分5次免疫3只BALB/C小鼠,取免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合,Hat筛选,有限稀释法克隆。建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。采用ELISA(酶联免疫吸附测定)间接法和竞争法检测抗体的特异性。结果获得了一只小鼠分泌抗体效价达1∶16000,并获得两株分泌GRb1的单克隆抗体的细胞系,分别命名为1F7和1G3,单抗检测显示在0.01~1μg/mL呈线性关系,GRb1的检测范围达50~350 ng/mL,两株单抗针对相同的抗原决定簇,制备的单克隆抗体可用于GRb1含量的检测和分离。     

以ODA为底物固体电极伏安法测定辣根过氧化物酶及其标记物的研究

以玻碳电极为工作电极研究了邻联茴香胺 ( ODA)为底物微分脉冲伏安法测定辣根过氧化物酶 ( HRP)及其标记物的方法。 HRP能够催化 H2 O2 氧化 ODA,其反应产物在玻碳电极上 - 0 .31 V ( vs.Ag/Ag Cl)左右被还原产生一个灵敏的还原峰 ,还原峰电流随着酶浓度的增大而增大 ,借助此还原电流可以测定 HRP,并可用于以 HRP为标记物的酶免疫分析。对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究 ,在最佳实验条件下测定游离 HRP的线性范围是 4.0× 1 0 - 10 ～ 6.0× 1 0 - 8g· m L- 1,检测限为3.3× 1 0 - 10 g· m L- 1;测定游离的酶标记物 ( Ig G- HRP) ,稀释范围为 1∶ 2 0 0 0～1∶ 1 0 0 0 0 0 0 ,最大稀释比为 1∶ 1 0 0 0 0 0 0。     

CdTe量子点的合成及作为离子荧光探针的应用

以巯基乙酸为修饰剂,在水相中制备稳定的CdTe量子点,利用单因素法和正交试验设计研究了pH值、反应时间、反应温度、反应物浓度比等合成条件对CdTe量子点荧光光谱性质的影响。以CdTe量子点为荧光探针,探讨了Hg2＋离子与量子点的荧光猝灭作用：在pH6.24的KH2PO4-Na2HPO4缓冲溶液中,Hg2＋离子浓度在10～150 ng/mL范围与量子点荧光猝灭强度呈现良好的线性关系,相关系数r=0.994 5,检出限8.7 ng/mL,CdTe纳米荧光探针可用于Hg2＋等的测定。     

Sensitive determination of DNA based on resonance light scattering enhancement of azocarmine G and CTAB

A new method for the determination of DNA was developed with azocarmine G（AG） in the presence of cetyltrimethylammonium bromide（CTAB） by the resonance light scattering （RLS） technique. The synthetic samples were determined with satisfactory results, and the reaction mechanism was also studied. The results show that under the optimum conditions, the weak RLS signal of AG can be enhanced by DNA, which results from the formation of a new ternary complex AG-CTAB-DNA with large size. Moreover, the enhanced RLS intensity at 552 nm is directly proportional to the concentration of DNA in the range of 0 - 1.0 μg/mL for fish sperm DNA （fsDNA） and 0 - 1.5μg/mL for calf thymus DNA （ctDNA）. Based on this, a new assay of DNA can be established. The detection limits （3σ） are 2. 1 ng/mL for fsDNA and 2.2 ng/mL for ctDNA, respectively.     

分散液液微萃取一分光光度法测定水中痕量汞

以四氯化碳为萃取剂,丙酮为分散剂,硫代米式酮（Thio．Michler,Sketone,TMK）为汞的螯合剂,建立了水中痕量汞分散液液微萃取一分光光度法测定的新方法．对分散液一液微萃取条件和分光光度法测定的最佳实验参数进行优化,包括溶液的pH值,萃取剂与分散剂的种类与用量,螯合剂硫代米式酮的用量,萃取时间等．在最佳实验条件下,汞的浓度在110～420ng／mL范围内与吸光度呈良好线性关系,相关系数r=0．9981,富集倍数为30,检出限为55ng／mL,相对标准偏差（RSD）为4．2％（／7,=8）,回收率为92％～108％．实验结果表明,该方法简便,快速,回收率高,成本低、富集效率高且对环境友好,适用于水中痕量金属汞的测定．     

液相色谱串联质谱法测定加工食品中丙烯酰胺的含量

建立了高效液相色谱串联质谱法测定加工食品中丙烯酰胺的方案;对多种类型的加工食品基质采用提取净化措施,利用高效液相色谱质谱对目标物质进行分离定性,结合同位素内标定量法对样本中丙烯酰胺进行定量分析。通过优化色谱条件和质谱参数,丙烯酰胺上机质量浓度在3~2 000 ng/mL具有良好的线性相关性,相关系数R≥0.999,检出限为3 μg/kg,定量限为10 μg/kg。对不同基质样本进行考察,方法表现出良好的稳定性和准确性,具有良好的回收率,适用于加工类食品中丙烯酰胺的定性定量分析。     

GO-SiO2-CMC修饰玻碳电极制备生物传感器对VB6的痕量检测研究

成功制备了氧化石墨烯（GO）和SiO₂/CMC的复合膜（GO-SiO₂-CMC）,将其修饰固体玻碳电极后构成电化学传感器用于维生素B6（VB6）的痕量检测。利用扫描电子显微镜和电化学技术分别研究该复合膜的微观形貌和电化学性能。结果表明,修饰电极对VB6表现出较强的电化学敏感性,对VB6的检测具有较高的灵敏度（31.5μAmM-1cm-2）、较低的检测限（10-7M）和较小的表面阻抗值（252Ω）。GO-SiO₂-CMC对VB6的检测,提供了一种新型的简单高效的VB6检测技术。