FIA型微生物探针动态响应过程（Ⅱ）正交配点法的应用

在已建立的Ｌ－谷氨酸检测体系的基础上，为克服电极不稳定性给测量带来的误差，根据全混流型生物反应器的特点，建立了适用于固定化细胞柱的数学模型，采用正交配点法对数学模型进行了估算，并以Ｌ－谷氨酸微生物传感器为例，提出了浓度测量值的计算方法。     

谷氨酸生物传感器的研制

采用海藻酸钙凝胶包埋法及海藻酸钙凝胶包埋与戊二醛化学交联相结合的固定化方法，制备了固定化谷氨酸脱羧酸膜，与ＣＯ２气敏电极偶联制成谷氨酸生物传感器。经测试，对谷氨酸的线性响应范围为（１．０×１０＾－２－２．０×１０＾－４）ｍｏｌ／Ｌ，斜率为５５．７ｍＶ，检测下限为２．３×１０＾０４ｍｏｌ／Ｌ，稳态响应时间为（９－１５）ｍｉｎ。     

苹果酸生产中残留富马酸转成天门冬氨酸的研究

建立了固定化细胞分离Ｌ－苹果酸生产中残留富马酸并将其转化成Ｌ－天门冬氨酸的新方法。对生成Ｌ－天门冬氨酸的工艺条件进行优化，结果表明，当Ｌ－苹果酸反应液ｐＨ调至８￣９，Ｌ－天门冬氨酸添加量为６￣８ｇ／Ｌ，碳酸铵加量为１５￣２０ｇ／Ｌ，Ｍｇ＾２＋、Ｍｎ＾２＋、Ｃａ＾２＋等二价阳离子加量为１ｍｍｏｌ／Ｌ时，固定化细胞可将Ｌ－苹果酸反应液中残留的２０％左右的富马酸几乎全部转化成Ｌ－天门冬氨酸，且Ｌ－苹果酸     

用二氧化碳电极测定霉菌537蛋白酶的活性

在霉菌５３７蛋白酶的作用下，酪蛋白发生水解，生成酪氨酸和谷氨酸等组成该蛋白的氨基酸。加入Ｌ－谷氨酸脱羧酶使谷氨酸发生脱羧反应，会释放出ＣＯ２，后者可用ＣＯ２电极进行测定，从而间接地算出５３７蛋白酶的活性。在蛋白酶活性为２０００￣１００００单位范围内，电位变化值与活性呈现良好的线性关系。     

固定化谷氨酸脱羧酶的稳定性研究

用羧甲基化的以Ｎ,Ｎ’－甲叉双丙烯酰胺交联的烯丙基葡聚糖（简称ＣＭ－ＣＡＤＢ）凝胶酶载体用树脂为新型载体,将谷氨酸脱羧酶固定在ＣＭ－ＣＡＤＢ树脂上。研究了固定化谷氨酸脱羧酶和自由酶与ｐＨ、温度的依存性,使用热稳定性和寿命。经测定谷氨酸脱羧酶经过固定化后,最适ｐＨ向碱性方向偏移０２个单位,ｐＨ为５２,最适温度为４８℃。固定化酶使用热稳定性比自由酶下降了５℃,但固定化酶的使用寿命得到显著改善,经测定固定化谷氨酸脱羧酶在４℃保存时,半衰期为１２７天。     

固定化黄色短杆菌生产L—苹果酸新工艺及动力学研究

研究了固定化黄色短杆菌ＭＡ－３在富马酸盐体系中转化生成Ｌ－苹果酸的新工艺，研究结果表明当富马酸铵盐浓度为１．８ｍｏｌ／Ｌ，体系ｐＨ为７．０￣８．０，反应温度为３７℃时，Ｌ－苹果酸的得率达２１６ｇ／Ｌ。对固定化黄色短杆菌的动力学研究结果为Ｖｍａｘ＝７６ｍｍｏｌ／［Ｌ·ｈ·ｇ（固定化湿细胞）］，Ｋｍ＝４．７６×１０＾－２ｍｏｌ／Ｌ，Ｃｐｍ＝１．６９ｍｏｌ／Ｌ。     

谷氨酸脱羧酶活性测定研究

酶活性测定是进行酶研究的关键,运用ＭＩＡ－３型微机化多功能离子分析仪,与ＣＯ２气敏电极相匹配,确定了谷氨酸脱羧酶活性测定体系。研究了不同的缓冲体系对酶活性测定的影响,确定了ｐＨ为４４,０１０ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４－００５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲溶液作为反应缓冲体系。测定了谷氨酸脱羧酶的最适ｐＨ（５０）和最适温度（５５℃）,确定了ＧＤＣ活性测定体系为：ｐＨ为４４,０１０ｍｏｌ／ＬＮａ２ＨＰＯ４－００５ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸缓冲溶液,反应温度为３７℃,溶液中底物浓度为１２ｍｍｏｌ／Ｌ。经测定谷氨酸脱羧酶活性为１７６ｍｍｏｌ／Ｌ·ｍｉｎ,相对平均偏差小于１％。     

1,2,4—三甲苯在Al／Ni＋Cr柱化蒙脱土类催化剂上的转化

考察了Ａｌ／Ｎｉ＋Ｃｒ交联蒙脱土催化上组成、交联剂用量、反应温度等因素对１，２，４－三甲苯转化的影响，结果表明三元柱化蒙脱土类催化剂的催化活性均大于一元柱化蒙脱土催化剂（Ａｌ－ＣＬＭ）或二元柱化蒙土催化剂（Ａｌ／Ｃｒ－ＣＬＭ）或（Ａｌ／Ｎｉ－ＣＬＭ）催化剂的组成；Ａｌ／土＝２．８７０３．７５ｍｍｏｌ／ｓ；柱化液中镍、铬用量；Ｎｉ：Ｃｒ＝１：３（摩尔比），催化剂的粒度４０－６０目，反应温度４００℃。     

固定化细胞降解含表面活性剂废水的研究

以生物降解法处理阴离子表面活性剂（直链十二烷基苯磺酸钠，即ＬＡＳ）废水。通过将ＴＰ－１号菌种固定在海藻酸钠载体上，采用正交试验法，以固定化细胞对ＬＡＳ的降解率和降解寿命为试验指标，确定了适宜的固定化条件，并与游离细胞对ＬＡＳ的降解效果做了对比试验。结果表明，固定化细胞对ＬＡＳ的降解程数明显增加。     

微生物醋酸传感器的研制

从食醋发酵液中分离、筛选经醋酸能力强的微生物，将其固定化制备微生物膜再与氧电极结合制成微生物醋酸传感器，实验研究表明，该传感器响应醛酸浓度线性范围约为２－３０ｍｇ．Ｌ＾－１；响应时间为２－５ｍｉｎ；２５ｄ内测定４００余次，灵敏度基本不变；取食醋发酵车间空气样品进行回收率测定，结果为９７．５－１０５．０％。     

天冬氨酸转氨酶反应过程及其在L—苯丙氨酸制备中的…

利用具有高活性天冬氨酸围氨酸（Ｅ．Ｃ２．６．１．１）的大肠杆菌变异株细胞对转氨反应的过程进行了研究。测得游离大肠杆菌细胞及勘经细胞为酶源参与的转氨反应的表观米氏常数分别为０．３９０ｍｏｌ／Ｌ和０．４６７ｍｏｌ／Ｌ。同时，发现辅助因子５－磷酸哟哆醛溶液预处理细胞对酶具有明显的激活作用。比较了不同的金属离子对酶的激活和抑制作用。此外，利用固定化细胞，在批式反应器和柱塞流反应器上对Ｌ－苯丙酸的制备－－     

填充床式生化反应器连续生产L—丙氨酸

在酶法合成Ｌ－丙氨酸过程中，产物Ｌ－丙氨酸对酶有抑制作用。本文选用ＰＦＲ型填充床式反应器，中ｋ－卡拉胶为包埋材料，包埋Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｄａｃｕｎｈａｅ ＤＱ－ｐ１，在低物中ｌｏｎｌ／Ｌ Ｌ－天冬氨酸，反应条件３７℃、ｐＨ６．０时，连续生产Ｌ－丙氨酸。在转化率达到９５％时，计算出固定化细胞和反应器的效率分别为０．０１５ｇ Ｌ－丙氨酸／ｇ固定化细胞·ｈ、０．０１３ｇＬ－丙氨酸／ｍｌ反应器·ｈ。     

新型 L-乳酸盐酶电极的研制

本文研制一种新型乳酸盐酶生物传感器，此传感器以复合酶ＮＡＤ＋与ＬＤＨ共固定在经ＣＮＢｒ活化的琼脂糖上作为敏感膜。用厚为０３ｍｍ的粒状琼脂糖制成的敏感膜电极，其响应性能最佳。此乳酸盐酶电极测试的最优条件是：在ｐＨ８５的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中进行，温度２５℃，此缓冲液中含１５ｍｍｏｌ·Ｌ－１Ｖｋ３电子介体。此电极的线性反应范围为００４～２１μｍｏｌ·Ｌ－１，每μｍｏｌ·Ｌ－１乳酸盐的敏感度为１３７ｎＡ，工作寿命为１９天。已将此电极用于检测血清中乳酸盐含量，得到满意的结果。     

负载贵金属的层柱分子筛比表面积研究

采用两种矿产钙质蒙脱土为原料制备了两种层柱分子筛（Ａｌ－ＣＬＭ和Ａｌ－ＣＬＢ）。首先考察了焙烧温度对其比表面积的影响，结果发现在３００～５００℃范围内，随着焙烧温度的提高，层柱分子筛的比表面积逐渐增大，６００℃以后比表面积迅速下降；对负载贵金属Ｐｔ或Ｐｄ后其比表面积变化情况的研究表明，不论是Ａｌ－ＣＬＭ还是Ａｌ－ＣＬＢ，负载金属后比表面积均下降，且负载Ｐｔ后比表面积下降均比负载Ｐｄ后比表面积下降得多；在Ｐｔ／Ａｌ－ＣＬＭ比表面积因浸渍液的不同而引起的比表面积变化的研究中，发现用酸性较强的浸渍液（Ｈ２ＰｔＣｌ６·６Ｈ２Ｏ）比用酸性较弱的浸渍液（Ｐｔ（ＮＨ３）４Ｃｌ２）所引起的比表面积下降得多，最后在Ｐｔ（Ｐｄ）／Ａｌ－ＣＬＭ和Ｐｔ（Ｐｄ）／Ａｌ－ＣＬＢ的苯加氢反应中发现苯转化率随着比表面积的增大而上升。     

突变株U—616葡萄糖异构酶及其固定化研究

树状黄杆菌ＮＲＲＬ１１０２２的诱变株Ｕ－６１６所产葡萄糖异构酶在６０℃～８０℃范围有较高活性，最适ｐＨ为７．５～８．５。对其固定化异构酶的理化性质进行了实验性探索。实验结果表明：固定化酶保留了８３％的游离酶的活力，在５５℃～８５℃范围有较高活性，最适ｐＨ为７．０～８．０；在６０℃，底物ｐＨ值为８．０及含有１．０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ钴、镁离子时，固定化异构酶的酶活达到最高。此异构酶及其固定化酶均对金属离子耐受性较强，Ｃｏ２＋和Ｍｇ２＋有激活作用，对Ｃａ２＋不敏感，热稳定性较好。树状黄杆菌变株Ｕ－６１６所产葡萄糖异构酶及其固定化异构酶具有较大的工业应用价值。     

负载贵金属的层柱分子筛抗硫中毒性能研究

以苯为模型化合物研究了负载贵金属的层柱分子筛（ＰＬＣ）催化剂在苯加氢反应中的抗硫性能。考察了在Ａｌ－ＣＬＭ和Ａｌ－ＣＬＢ上负载Ｐｔ或Ｐｄ的单金属催化剂和负载双金属Ｐｔ和Ｐｄ催化剂的抗硫性能，不同的Ｐｔ／Ｐｄ比对催化剂抗硫性能的影响。结果表明，Ｐｔ（Ｐｄ）／ＰＬＣ的抗硫性能远远低于Ｐｔ（Ｐｄ）／γ－Ａｌ２Ｏ３催化剂的抗硫性能；Ｐｔ／ＰＬＣ抗硫性能优于Ｐｄ／ＰＬＣ的抗硫性能；Ｐｔ（Ｐｄ）／Ａｌ－ＣＬＭ的抗硫性能优于Ｐｔ（Ｐｄ）／Ａｌ－ＣＬＢ催化剂的抗硫性能；Ｐｔ－Ｐｄ／ＰＬＣ的抗硫性能较单金属催化剂的抗硫性能得到明显改善，且Ｐｔ／Ｐｄ比对其抗硫性能有重要影响，当含Ｐｔ的质量分数为０．３％，含Ｐｄ的质量分数为０．９％时，Ｐｔ－Ｐｄ／Ａｌ－ＣＬＭ催化剂的抗硫性能最佳。     

负载贵金属的层柱分子筛比表面积研究

采用两种矿产钙质蒙脱土为原料制备了两种层柱分子筛。首先考察了焙烧温度对其比表面积的影响。结果发现在３００－５００℃范围内，随着焙烧或Ｐｄ后比表面变化情况的研究表明，不论是Ａｌ－ＣＬＭ还是Ａｌ－ＣＬＢ，负载金属后比表面积均下降，且负载Ｐｔ后比表面积下降均比负载Ｐ ｄ后比表面积下降得多；在Ｐｔ／Ａｌ－ＣＬＭ比表面积因当渍液的不同而引起的比表面积变化的研究中，发现用酸性较强的浸渍液比用酸性较弱的浸渍注所     

基于柱前衍生化高效液相色谱法评价骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型

培养Ｃ２Ｃ１２成肌细胞并分化成骨骼肌细胞,取细胞培养液通过柱前衍生化,将葡萄糖与１－苯 基－３－甲基－５－吡唑啉酮（ＰＭＰ）络合,使用Ｕｎｉｓｐｈｅｒｅ　Ａｑｕａ　Ｃ１８色谱柱（２．０ｍｍ×１５０ｍｍ,粒径３．５ μｍ）分离衍生化产物,流动相为Ｖ（１０ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸铵（ｐＨ＝５．３０））∶Ｖ（乙腈溶液）＝７８∶２２,流速 为１．０ｍＬ／ｍｉｎ,检测波长为２４５ｎｍ,进样量为２０μＬ,柱温３０℃．葡萄糖质量浓度在１００～５００ ｍｇ／Ｌ范围内具有良好的线性,相关系数０．９９８　５;精密度、重复性良好,平均回收率１００．２６％,ＲＳＤ 值为１．０２％．地塞米松孵育处理的骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对葡萄糖的摄取量与对照组相比显 著减少．结果显示：柱前衍生化高效液相色谱法可用于评价骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型,为后续胰 岛素抵抗机制探讨及药物筛选打下基础．     

洛美沙星离子选择电极的制备与应用

研制了聚苯胺－ ＰＶＣ 膜全固态洛美沙星离子选择电极。该电极在（１ ×１０ － ２ ～３５ ×１０ － ５） ｍｏｌ／Ｌ 浓度范围内对洛美沙星呈能斯特响应, 斜率为２９２ ｍ Ｖ／ｐＬＦ, 检测下限为１３ ×１０ － ５ ｍｏｌ／Ｌ; 用于药物样品中洛美沙星含量测定结果满意, 方法简便快速。     

加电固定化膜式反应器生产L—丙氨酸

选用突变株菌，利用加电固定化细胞膜式反应器生产Ｌ－丙氨酸，旨在消除产物Ｌ－丙氨酸对Ｌ－天冬氨酸－β－脱羧酶的竞争性抑制。研究结果表明，加静电优于通电流；随着静电压的加大，表观米氏常数Ｋｍ‘变小，说明该反应器的使用一定程度地解除了产物的抑制；