转基因玉米TC1507基体标准物质协同实验及不确定度评定

7家实验室共同采用实时荧光定量PCR方法,对转基因玉米TC1507基体标准物质A、B、C3种含量水平的量值,进行了协同实验研究,并对得到的参考值进行了不确定度分析.实时荧光定量PCR方法协同实验结果表明,转基因玉米TC1507基体标准物质转基因含量的参考值分别为0.41％±0.22％、1.1％±0.4％、4.5％±1....     

转基因大豆Mon89788基体标准物质协同实验研究

对研制的3个含量水平的转基因大豆Mon89788基体标准物质进行多家实验室的验证研究.研究过程包括转基因大豆中基因组DNA的提取和转基因组分的定量PCR方法确认,标准物质的多家实验室协同实验,以及测量的不确定度评估.多家测定分析结果表明,转基因大豆Mon89788 3种不同外源基因/内源基因含量水平的标准物质参考值和扩...     

转基因玉米NK603基体标准物质协同定值实验

对转基因玉米 NK603基体标准物质荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证,结果表明该方法适合于标准物质量值协同实验。选择7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米NK603基体标准物质量值进行了协同实验,通过分析比较各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数,进一步证明该方法室间重复性较好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度,3个水平基体标准物质的量值和扩展不确定度分别为0.57%±0.11%、1.21%±0.30%和4.92%±1.80%（k=2）。     

转基因玉米T25基体标准物质协同实验研究

对转基因玉米T25转化体特异性荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证,选择了7家实验室采用经过验证的方法对3个水平的转基因玉米T25基体标准物质进行协同实验研究。通过比较分析各参与实验室的实验条件、标准曲线的参数,进一步证明该方法室间重复性好。经统计学分析各参与实验室的数据等精度,因此计算各实验室的总平均值做为标准物质的标准值。3个水平的基体标准物质的标准值和扩展不确定度（k=2）分别为1.17%±0.22%、2.17%±0.38%和9.81%±2.30%。     

转基因玉米质粒分子国家标准样品的构建

本文研制转基因玉米常见的4个品系:BT11、MON810、NK603和T25质粒分子国家标准样品.研究重点包括目标序列和内标准基因序列的选择和扩增、标准样品定值和分析等.均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米4个品系标准样品均匀稳定.采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法定值标准样品.多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度.所研制的转基因玉米质粒分子标准样品获得了国家标准样品证书,适用于转基因产品的定量和定性测定.     

国际

正法国议会决定禁种转基因玉米法国参议院(上院)5月5日通过法案,决定禁止在法国种植转基因玉米,此前国民议会(下院)也已通过该法案。今年3月15日,法国农业部曾宣布,由于播种期临近,决定禁止在法国国内种植MON810(转基因玉米)。目前,在欧盟地区,除法国外,奥地利、保加利亚、波兰、德国、卢森堡、希腊、匈牙利和意大利也禁止种植转基因玉米。BSI发布顾客服务标准英国标准协会(BSI)近期     

转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质联合定值研究及不确定度分析

对研制的3个含量水平（A、B和C）的转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质进行了多家实验室联合定值,并进行了相应的不确定度的分析.具体研究过程为提取转基因大豆GTS 40-3-2中的基因组DNA,并采用定量PCR方法进行标准物质的多家实验室联合定值,最后对定值的不确定度进行评估.     

转基因玉米pUC57-BT11质粒标准分子的构建与适用性研究

构建了含有转化体特异性片段（BT11-93bp）和玉米的内标准基因片段（zSSIIb-151bp）的质粒分子pUC57-BT11,经酶切和测序验证后,对其特异性进行检查。采用测序和荧光定量PCR法对该质粒分子进行定值,结果为1.01±0.01(k=2)。通过质粒分子和基因组DNA产生的内源和外源基因比较,发现两者标准曲线斜率无显著差异,线性相关系数均≥0.99。利用pUC57-BT11质粒分子对已知含量的转基因基体标准物质进行转基因含量测定,结果发现采用pUC57-BT11质粒分子对标准物质的测定结果与其标准值一致,表明pUC57-BT11质粒分子可作为转基因玉米BT11转化体特异性的定性和定量检测用标准物质。     

转基因棉花Mon15 985 质粒标准物质多家验证实验研究及不确定度分析

对转基因棉花Mon15985实时荧光定量PCR方法进行了方法确认,组织多家实验室进行协同实验验证,对该标准物质参考值进行测定。经统计分析,得出Mon15985质粒分子的参考值为1.02,扩展不确定度为0.04（k=2）。质粒分子与转基因棉花Mon15985的基因组DNA相比,无论是扩增斜率还是线性相关性,均具有可替代性,该棉花转基因Mon15985质粒标准物质,可作为分析检测标准提供相关部门使用。     

转基因玉米MON89034、MON810、MIR162双重数字PCR定量方法的建立

针对进出口贸易中涉及较多的转基因玉米MON89034、MON810、MIR162品系,研究一套双重数字PCR(dPCR)定量检测方法,包括引物探针的序列设计和浓度,DNA模板浓度,PCR反应过程的时间、温度等。该方法的定量限为0.1%,转基因定量检测范围覆盖0.1%～100%,线性系数为0.999,精密度优于10%。该检测方法中,每个微反应体系都含有两套引物探针,分别用FAM和VIC荧光通道进行检测,能实现内外源基因的同时检测,避免同一样品因取样不一致造成的定量差异。该方法可以同时应用到市面上最常用微滴dPCR平台和3D芯片dPCR平台,且两种方法定量结果一致性好。     

转基因水稻TT51-1标准物质的研制

将筛选后的转基因水稻TT51-1和非转基因水稻明恢63种子分别冷冻研磨成粉末,采用重量法配置了5个不同水平的标准物质。经检验该标准物质的均匀性良好,可在4℃保存条件下存储1年。标准物质采用重量法的质量分数作为标准值,数字PCR测定拷贝数分数作为参考值,通过转基因水稻与非转基因水稻种子粉末提取效率比值校准的数字PCR定值结果与重量法质量分数定值结果之间具有等效一致性,该标准物质可用于转基因水稻TT51-1的定量PCR检测及其特异性检测方法的评价。     

无机成分基体标准物质常用定值技术及其应用

实际检测工作中,样品种类繁多、基体复杂、成分各异,而且含量水平差别很大,因此需要使用基体、成分、含量尽可能地与待测样品接近的标准物质进行质量控制。这就需要研制大量不同基体的标准物质,以满足实际检测工作的需要。基体标准物质通常是指标准物质的候选物取自天然基体（或模拟合成）,并按照标准物质的要求进行制备．     

转基因水稻克螟稻标准物质的初制备

建立了转基因水稻克螟稻基体标准物质的初制备体系.按照0.5％、1％、2％、5％的质量比分别加入阳性粉末和阴性粉末,配制成4个水平的基体标准物质.实验结果表明,所选的阳性粉末和阴性粉末的水分分别为3.288％和4.039％,粒径均小于200 μm.从标识“金粉”的检测结果也可以看出,4个水平的基体标准物质均具有较好的均匀...     

转基因水稻标准物质的研制

从水分含量、粒度大小、基因纯度等方面研究了候选材料的性质及其对转基因标准物质特性量值的影响.采用重量法进行了转基因水稻种子粉标准物质制备,建立了通过纳米银标记和电感耦合等离子体质谱技术相结合的均匀性检测技术方法.进行了转基因水稻种子粉标准物质的制备和均匀性、稳定性检验,并确定了最小取样量,分析了重量法配制值和荧光定量PCR测定值的一致性.该转基因水稻标准物质可应用于实验室质量控制、水稻转基因成分的定量检测等领域.     

数字PCR法定量低浓度水平短链DNA标准物质的研究

该文研制一种低浓度水平的短链DNA标准物质,用于低浓度水平ctDNA检测过程的量值溯源,重点对低浓度水平的短链基因标准物质的定值方法进行研究。首先选取TP53基因的一段300 bp长度的序列作为标准物质的目标序列,以数字PCR方法为研究方法,优化引物探针设计,通过考察PCR扩增的效率可以达到98.6%,满足数字PCR方法扩增的要求;然后采用转基因玉米NK603质粒分子国家标准物质验证数字PCR方法定值的准确度和精密度;其次考察数字PCR方法定量低浓度短链DNA标准物质TP53的重复性和重现性分别为2.99%和5.23%;最后采用数字PCR方法 8家单位联合定值确定标准物质TP53的终浓度为(613.85±9.12)copies/μL(k=2),实现了对低浓度水平短链DNA标准物质的定值。     

呈味核苷酸含量基体标准物质研究

以市售鸡精为基体,研制呈味核苷酸含量基体标准物质。优化鸡精中核苷酸提取条件,建立有机溶剂法提取核苷酸的技术手段。以核苷酸国家一级标准物质为标准,采用高效液相色谱外标法、离子色谱外标法两种技术对鸡精基体中呈味核苷酸特性量值进行确定,检验标准物质的均匀性和稳定性,结果表明其均匀性良好,且一年内标准物质的特性量值没有显著差异。同时建立基于离子色谱和高效液相色谱两种外标法对标准物质特性量值进行确定的不确定度评定模型,对研制的标准物质进行不确定度评定,为复杂基体中核苷酸含量标准物质的研制提供了借鉴,为呈味核苷酸检测的相关国家标准制定提供技术参考。     

3-硝基-1,2,4-三唑-5-酮标准物质的制备

介绍了3-硝基-1,2,4-三唑-5-酮(NTO)标准物质的制备方法。以工业品NTO为基体,经热过滤除去机械杂质、重结晶、低沸点溶剂煮洗、真空干燥等步骤,制备出均匀、稳定的NTO标准物质。使用液相色谱测试主体成分含量,对制备的标准物质进行了均匀性初检,并进行均匀性、稳定性评价研究。研究结果表明,NTO标准物质纯度达到99.91%,均匀性良好,稳定性在一年以上,达到了标准物质的技术指标要求。     

转基因油菜T45质粒分子标准物质协同实验研究

对转基因油菜T45荧光定量PCR方法的关键参数进行了方法验证,结果表明该方法适合于标准物质协同实验.选择6家实验室采用经过验证的方法对转基因油菜T45质粒分子标准物质进行了协同实验研究.通过比较分析转基因油菜T45基因DNA与质粒分子DNA两者产生的标准曲线的斜率(扩增效率)、线性拟合度和截距,发现转基因油菜T45基因...     

奶粉检测用混合溶液标准物质

依据GB 5413.21-2010研制了以水质为基体、含有九种元素的奶粉检测用混合溶液标准物质。用方差分析法检验标准物质的均匀性;以美国NIST标样和中国计量科学研究院(NIM)的一级标准物质作为标准,采用等离子发射光谱法对标准物质中九种元素的含量进行直接比对定值,经统计方法给出九种元素含量的标准值和不确定度。一年的稳定性监测结果表明,该标准物质具有良好的稳定性。     

猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质的研制

研制一套4种浓度水平的猪尿冻干粉中盐酸克伦特罗标准物质,以健康安全的猪尿作为空白基体,利用添加的方法,经过均匀性和稳定性检验,由8家实验室采用液相色谱-串联质谱法对该套标准物质进行协同定值,并进行不确定度评估。结果表明该套标准物质均匀性良好,在4℃条件下保存稳定性在1年以上,标准物质中CLB的含量及不确定度分别为:0.65±0.15,1.28±0.44,3.78±0.46,11.5±1.8ng/mL(k=2)。该标准物质可应用于猪尿中盐酸克伦特罗检测过程的方法验证和检测结果质量控制等。