转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质联合定值研究及不确定度分析

对研制的3个含量水平（A、B和C）的转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质进行了多家实验室联合定值,并进行了相应的不确定度的分析.具体研究过程为提取转基因大豆GTS 40-3-2中的基因组DNA,并采用定量PCR方法进行标准物质的多家实验室联合定值,最后对定值的不确定度进行评估.     

阴沟肠杆菌定量标准物质的研制

采用真空冷冻干燥法和滤膜法定值技术,研制了球状的阴沟肠杆菌定量标准物质。经保护剂配方及冻干程序参数优化后,阴沟肠杆菌的平均存活率达51%,形状均匀一致、外观光滑无塌陷,能完全复水速溶。通过结晶紫中性胆盐琼脂培养基平板计数法考察均匀性和稳定性,证明该标准物质均匀性良好,-80 ℃至少可稳定保存6个月。该标准物质由6家实验室采用滤膜法联合定值,经不确定度评定,标称值为（2.0±0.1）log10 (cfu/瓶),相对扩展不确定度为10%(k=2)。标准物质中阴沟肠杆菌活菌数含量水平为10² cfu/瓶,可以直接溶解使用,无需稀释,使用方便,同时减少了测量不确定度来源。     

液相色谱-质谱联用测定蛋粉中胆固醇含量

建立了液相色谱-大气压化学电离-同位素稀释质谱法测定蛋粉中的胆固醇含量的方法。本方法采用选择离子模式检测,用括弧法对蛋粉胆固醇进行定量计算。通过胆固醇一级标准物质保证测量过程的溯源性,通过采用添加胆固醇同位素标记物作为内标减少了样品前处理过程和液相色谱-质谱测定时物质响应所产生的误差,提高了测量结果的准确性。本方法具有较高的测量准确度和精密度,可作为复杂基体胆固醇测定的高准确度测定方法。     

转基因玉米MON810基体标准物质Q-PCR量值协同实验研究

针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质,组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法进行了协同实验研究,并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析.经过加权平均,转基因玉米MON810 A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q-PCR方法参考值分别为0.51％±0.10...     

转基因大米中氨基酸含量的超高效液相色谱定量

建立了一种6-氨基喹啉基--羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生,超高效液相色谱(UPLC)对大米中17种氨基酸进行快速定量的方法。优化了6 M盐酸和0.2%苯酚的加入量、水解时间等大米水解条件,采用1.7μm粒径的AccQ·Tag ULTRA C18色谱柱分离,260 nm检测,可在9.5 min内实现17种氨基酸衍生物的分离。结果表明,17种氨基酸的标准工作曲线的线性回归相关系数(r)均大于0.999,加标回收率在85.9%~102%之间,日内相对标准偏差(RSD)(n=5)2.64%~4.59%,日间相对标准偏差(n=3)1.43%~5.06%,方法简单、准确、快速、重复性和再现性良好。将该方法用于大米中氨基酸含量的分析,比较了4对转基因大米及其非转亲本之间氨基酸含量的差异,T检验结果表明,所取样分析的转基因大米及其亲本之间在氨基酸含量上没有显著性差异。     

数字PCR方法准确测量质粒DNA拷贝浓度

中国计量科学研究院（NIM）利用数字PCR技术针对国际比对样品质粒DNA,通过设计2对特异性的引物和探针、优化PCR扩增体系、排除PCR mastermix中的DNA污染,成功建立了定量该质粒DNA的数字PCR方法。比较了采用单重PCR和双重PCR方法定量结果之间的差异,最终实现了对比对样品的定量和不确定度评定。对线性质粒样品的测量结果及其扩展不确定度（k=2）为(8.06±0.55)×10³ copies/mg,该结果在比对参考值不确定度范围内,且与参考值非常接近。     

核酸定量测量技术研究进展

生物学新的发展趋势是从定性科学转变为定量科学.核酸含量的定量测量技术对于食品安全(如转基因作物的核酸定量)、临床诊断(如病毒负荷量和用药指导)、法证科学(如死亡时间推断)、分子生物学基础科学研究(如细胞因子mRNA表达水平)等具有重要意义. 精确定量核酸含量或拷贝数是现代分析化学和分子生物学研究面临的重要挑战之一.计量是"实现单位统一、量值准确可靠的活动".建立核酸含量的精确测量方法,实现核酸定量结果的准确和溯源,是生物计量研究的重点之一.     

纤维素酶法提取茶多糖

为了保持茶多糖的活性，采用低温水提、酶提二次结合法提取茶多糖，第一次在50℃、茶叶与水的质量比为1：15、水提取30min，多糖的提取率为2．33％，粗多糖（干重）的提取率为6．82％；过滤后，滤渣用pH4．6的柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液加纤维素酶提取，经正交试验确定酶提最佳工艺参数为55℃、茶叶与水的质量比为1：14、酶用量2．2μL/g（以茶叶质量计），反应时间为120min，其多糖的提取率为0．64％，粗多糖（干重）的提取率为1．11％，分别占二次总提取量的21．5％和14．0％，而在相同条件下无酶提取，提取率仅为0．39％和0．56％，相对水提法，酶法的多糖提取率分别增加63．3％和98．9％，多糖总提取率达2．97％，粗多糖（干重）的总提取率为7．93％，采用酶法提取的茶多糖具有较强抑制α-淀粉酶活力的能力。     

粘质沙雷氏菌测量方法研究

粘质沙雷氏菌是生物防护评价的指示菌。对粘质沙雷氏菌营养琼脂平板涂布法进行了方法验证和协同实验验证以及不确定度分析。结果显示,该方法重复性和复现性均较好,室内重复性相对标准偏差为8.93%,室间相对标准偏差为14.95%。经统计分析,营养琼脂平板涂布法相对扩展不确定度为12.60%（k=2）,适用于粘质沙雷氏菌定量测量。