转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质联合定值研究及不确定度分析

对研制的3个含量水平（A、B和C）的转基因大豆GTS 40-3-2基体标准物质进行了多家实验室联合定值,并进行了相应的不确定度的分析.具体研究过程为提取转基因大豆GTS 40-3-2中的基因组DNA,并采用定量PCR方法进行标准物质的多家实验室联合定值,最后对定值的不确定度进行评估.     

Taqman MGB探针冻融稳定性研究

Taqman MGB探针的稳定性是实时荧光定量PCR准确定量的关键因素之一.然而在实验过程中,常常因为运输、实验室保存或使用条件的变化,造成探针的反复冻融,影响实验结果.采用高效液相色谱技术定量研究了反复冻融的MGB探针的稳定性;并比较分析了冻融探针对qPCR的影响程度.结果表明:MGB探针可以耐受30次以内的反复冻融...     

阴沟肠杆菌定量标准物质的研制

采用真空冷冻干燥法和滤膜法定值技术,研制了球状的阴沟肠杆菌定量标准物质。经保护剂配方及冻干程序参数优化后,阴沟肠杆菌的平均存活率达51%,形状均匀一致、外观光滑无塌陷,能完全复水速溶。通过结晶紫中性胆盐琼脂培养基平板计数法考察均匀性和稳定性,证明该标准物质均匀性良好,-80 ℃至少可稳定保存6个月。该标准物质由6家实验室采用滤膜法联合定值,经不确定度评定,标称值为（2.0±0.1）log10 (cfu/瓶),相对扩展不确定度为10%(k=2)。标准物质中阴沟肠杆菌活菌数含量水平为10² cfu/瓶,可以直接溶解使用,无需稀释,使用方便,同时减少了测量不确定度来源。     

流式分析技术快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7

建立一种基于流式分析技术的快速定量检测牛乳中大肠杆菌O157:H7的方法。用偶联有异硫氰酸荧光素的大肠杆菌O157单克隆抗体对大肠杆菌O157:H7进行特异性标记,通过优化抗体反应条件,建立流式检测方法,然后对磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffer saline,PBS）和人工污染牛乳样品中不同浓度的大肠杆菌O157:H7进行定量检测。本研究建立的流式检测方法的在PBS中的检测范围为2.57×103～1.12×108?CFU/mL,灵敏度达到2.57×103?CFU/mL。将所建立的流式检测方法应用于牛乳样品检测,当人工污染牛乳样品中大肠杆菌O157:H7的浓度在2.31×104～1.48×108?CFU/mL之间时,流式检测方法与平板计数方法检测结果基本一致,方法的灵敏度为2.31×104?CFU/mL,检测时间为35?min。该方法能快速、定量地检测出牛乳样品中的大肠杆菌O157:H7,在食源性致病菌的快速筛查和监控中具有重要的应用价值。     

转基因玉米MON810基体标准物质Q-PCR量值协同实验研究

针对3种不同转基因含量水平的转基因玉米MON810基体标准物质,组织7家实验室对其量值采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法进行了协同实验研究,并对Q-PCR得到的参考值进行了不确定度分析.经过加权平均,转基因玉米MON810 A、B、C3个水平的基体标准物质转基因含量的Q-PCR方法参考值分别为0.51％±0.10...     

数字PCR方法准确测量质粒DNA拷贝浓度

中国计量科学研究院（NIM）利用数字PCR技术针对国际比对样品质粒DNA,通过设计2对特异性的引物和探针、优化PCR扩增体系、排除PCR mastermix中的DNA污染,成功建立了定量该质粒DNA的数字PCR方法。比较了采用单重PCR和双重PCR方法定量结果之间的差异,最终实现了对比对样品的定量和不确定度评定。对线性质粒样品的测量结果及其扩展不确定度（k=2）为(8.06±0.55)×10³ copies/mg,该结果在比对参考值不确定度范围内,且与参考值非常接近。     

核酸定量测量技术研究进展

生物学新的发展趋势是从定性科学转变为定量科学.核酸含量的定量测量技术对于食品安全(如转基因作物的核酸定量)、临床诊断(如病毒负荷量和用药指导)、法证科学(如死亡时间推断)、分子生物学基础科学研究(如细胞因子mRNA表达水平)等具有重要意义. 精确定量核酸含量或拷贝数是现代分析化学和分子生物学研究面临的重要挑战之一.计量是"实现单位统一、量值准确可靠的活动".建立核酸含量的精确测量方法,实现核酸定量结果的准确和溯源,是生物计量研究的重点之一.     

转基因植物Real-time PCR方法检出限和定量限的研究

目前Real-timePCR(Rt-PCR)方法在转基因植物定量检测中应用最为广泛。有关该方法的检出限和定量限的计算并没有达成统一。本文采用统计模型对三种转基因植物进行实时荧光定量PCR方法检出限和定量限的研究。实验结果表明:转基因玉米NK603检出限5拷贝,定量限14拷贝;转基因棉花Mon15985检出限5拷贝,定量限12拷贝;转基因油菜Oxy235检出限4拷贝,定量限9拷贝。是利用统计学方法对转基因植物荧光定量PCR方法检出限和定量限研究的一个积极尝试,可用于其他转基因植物检测中检出限和定量限的确定。     

转基因水稻克螟稻标准物质的初制备

建立了转基因水稻克螟稻基体标准物质的初制备体系.按照0.5％、1％、2％、5％的质量比分别加入阳性粉末和阴性粉末,配制成4个水平的基体标准物质.实验结果表明,所选的阳性粉末和阴性粉末的水分分别为3.288％和4.039％,粒径均小于200 μm.从标识“金粉”的检测结果也可以看出,4个水平的基体标准物质均具有较好的均匀...     

粘质沙雷氏菌测量方法研究

粘质沙雷氏菌是生物防护评价的指示菌。对粘质沙雷氏菌营养琼脂平板涂布法进行了方法验证和协同实验验证以及不确定度分析。结果显示,该方法重复性和复现性均较好,室内重复性相对标准偏差为8.93%,室间相对标准偏差为14.95%。经统计分析,营养琼脂平板涂布法相对扩展不确定度为12.60%（k=2）,适用于粘质沙雷氏菌定量测量。