鸭蛋卵清蛋白多肽的酶解条件优化及生物活性

通过正交试验探究了鸭蛋卵清蛋白的酶解条件，以水解度为指标确定了最佳酶解条件：选用木瓜蛋白酶，加酶量为4.5×104 U/（g·min），酶解时间5.5 h，酶解温度55 ℃，酶解pH 6.40，最佳条件下的水解度为27.91%。采用高效液相色谱法确定了鸭蛋卵清蛋白酶解产物（Hydrolysate of albumin in duck egg，HD）的相对分子质量分布范围：0w<300占33.71%，300w<450占29.21%，450w<12 500占5.05%，M/_w>12 500占11.12%。再对其生物活性进行探究，在HD的免疫活性实验中，250 μg/mL的HD能显著提高RAW 264.7细胞中NO、细胞因子TNF-α和IL-6的分泌量（P<0.05），1 000 μg/mL的HD对AAPH诱导的红细胞溶血抑制率为（53.95±1.82）%，具有显著性（P<0.05），对DPPH、ABTS+·自由基清除率分别为（31.92±0.54）%、（86.46±2.12）%，ORAC值为0.357 4 μmol/mg，表明HD也具有很好的体外抗氧化活性。     

微波辅助提取猕猴桃果渣总黄酮及其抗氧化活性

以猕猴桃酿酒发酵后的果渣为原料,采用响应面法优化猕猴桃果渣总黄酮的微波辅助提取工艺,并测定其对DPPH·和ABTS+·的清除率,评价最佳工艺条件提取的总黄酮的抗氧化活性。结果表明,猕猴桃果渣总黄酮提取的最佳工艺条件为乙醇浓度50%、提取温度66℃、提取时间16 min,在此条件下,总黄酮得率为3.02%。猕猴桃果渣总黄酮提取物对DPPH·、ABTS+·具有不同程度的清除作用,当总黄酮提取物浓度为30.16 μg/mL时,对DPPH·清除率为83.08%,当总黄酮提取物浓度为12.08 μg/mL时,对ABTS+·清除率为97.36%,表明猕猴桃果渣总黄酮具有较好的抗氧化活性。     

典型甜菊糖苷的抗氧化和抗炎活性

本文以6种代表性甜菊糖苷及其肠道代谢物甜菊醇以及甜菊醇的重排异构体异甜菊醇为对象,研究了上述甜菊化合物的抗氧化性及其对鼠巨噬细胞Raw264.7的细胞毒性和抗炎活性。结果表明,所试甜菊糖苷在100 μg/mL内对鼠巨噬细胞的Raw264.7均无细胞毒性,也不会诱导炎症反应;其中异甜菊醇抗炎效果最优,100 μg/mL时相对于脂多糖刺激后产生的NO含量降低了约30.7%。所试甜菊糖苷对DPPH·和·OH两种自由基的清除率最高分别为24.8%和13.8%,其对DPPH·的清除能力具有结构相关性,但对·OH清除率均低,无结构相关性;而甜菊酚对DPPH·和ABTS+·清除率分别为92.1%和29.6%,即甜菊提取物的自由基清除率主要由甜菊酚产生。     

红枣色素与枣多糖的协同抗氧化作用

探讨红枣色素与枣多糖的协同抗氧化作用,采用DPPH·、ABTS+·、·OH、O₂-·清除能力和还原力评价红枣色素、枣多糖的抗氧化活性,并通过等辐射分析法研究红枣色素与枣多糖的协同抗氧化作用。结果表明,红枣色素、枣多糖的抗氧化活性随浓度升高而增强,呈一定量效关系,且红枣色素与枣多糖复配后的抗氧化活性优于红枣色素、枣多糖单独使用。红枣色素与枣多糖复配后的效应点均落在相加线及95%可信限的左侧,试验IC_50mix值均小于理论IC_50add值(p<0.05),相互作用指数γ值均小于1,其清除DPPH·、ABTS+·、·OH、O₂-·能力和还原力的协同率分别为53.53%±2.14%、61.64%±2.26%、85.73%±3.69%、65.34%±3.28%、87.04%±4.31%,表明红枣色素与枣多糖具有明显的协同抗氧化作用。     

3种己糖糖基化修饰对豌豆蛋白结构和抗氧化活性的影响

目的 探究3种己糖糖基化修饰对豌豆蛋白结构和抗氧化活性的影响。。方法 通过自由氨基含量测定、内源荧光及表面疏水性变化、ABTS+·清除能力、DPPH·清除率、Fe2+螯合能力和超氧阴离子自由基清除能力分析研究豌豆蛋白糖基化产物的结构和 抗氧化活性。结果 经糖基化处理后,豌豆蛋白的自由氨基含量降低,空间结构发生改变,其中以半乳糖制备的豌豆蛋白糖基化产物（Pea protein-galactose conjugated compound,PP-gal）糖基化程度最大。就抗氧化性而言,PP-gal具有更好的ABTS+·清除能力、DPPH·清除率、Fe2+螯合能力和超氧阴离子自由基清除能力,即抗氧化活性最强。结论 本研究可为具有良好抗氧化活性的豌豆蛋白制备提供参考。     

高钙菜黄酮的分级分离各级分的抗氧化活性

以抗坏血酸和叔丁基羟基茴香醚做阳性对照,采用二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂-·)、还原力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐阳离子自由基(ABTS+·)和总抗体外抗氧化模型,主成分分析综合评价高钙菜总黄酮各级分(乙酸乙酯相、正丁醇相、氯仿相和水相)的抗氧化活性。结果显示,在各体外抗氧化活性指标的测定中,各萃取相的抗氧化活性均随着黄酮浓度增加呈现上升趋势,其中ABTS+·的清除能力最强,高达99.72%±0.10%,与抗坏血酸清除能力相近。乙酸乙酯相的·OH清除率、O₂-·清除率、总抗氧化FRAP值、还原力及ABTS+·清除率要显著优于其它各萃取相,氯仿相的DPPH·清除率显著优于其它萃取相。主成分分析综合评价显示,乙酸乙酯相抗氧化活性最佳。显色反应结合红外光谱分析,初步判定乙酸乙酯相和正丁醇相可能为黄酮醇类。高钙菜总黄酮具有较强的抗氧化活性,可作为良好的健康食品原料开发及利用。     

桑叶黄酮的双水相萃取及其抗氧化活性研究

为提高乙醇-水提取物中桑叶黄酮纯度,该研究利用乙醇-无机盐双水相萃取技术对桑叶黄酮粗提物（mulberry flavone extract,MFE）进行分离纯化。通过单因素试验和Box-Behnken响应面试验对萃取工艺条件进行优化,以·OH、ABTS+·、DPPH·和 O2-·清除率为指标,比较萃取前后的桑叶黄酮（mulberry leaves flavone 1、2,MLF1、MLF2）的抗氧化活性变化。结果表明,双水相萃取体系最佳工艺条件为乙醇质量分数36%、硫酸铵质量分数17%、MFE添加量 5 mg/mL;上述条件下相比 R=1.84±0.17,分配系数 K=11.82±0.34,萃取率 Y=（95.74±0.58）%。体外抗氧化活性试验结果显示：除O2-·清除能力略低于芦丁外,MLF2对·OH、ABTS+·、DPPH·清除率均高于芦丁,且MLF2的抗氧化活性指标均高于MLF1。综上所述,双水相萃取法可用于萃取桑叶黄酮,其抗氧化活性可有效增强。     

玉米蛋白粉的预处理方法的比较及其酶解液的脱色工艺研究

玉米酶水解物是通过用商业酶水解玉米蛋白粉而制备。玉米蛋白粉的蛋白酶切位点被包被,酶解效率低,且酶解液呈棕黄色,以及不利于后续多肽的分离纯化影响感官效果。本研究对玉米蛋白粉预处理方法比较,确定了用加热和α淀粉酶对玉米蛋白粉进行预处理,提高酶解效率。用活性炭对玉米酶解液进行脱色处理,以脱色率和蛋白损失率为指标,确定最优脱色条件：脱色pH为5、脱色温度为40 ℃、活性炭用量为2%。并通过对脱色玉米肽抗氧化活性的考察,发现活性炭脱色后,玉米肽对DPPH清除率、ABTS清除率、ORAC清除率均有不同程度的下降,脱色前对DPPH的清除率为93.11%,对ABTS的清除率为1318.97 μmol TE/g,对ORAC的清除率为1192.39 μmol TE/g,脱色后对DPPH的清除率为33.19%,对ABTS的清除率为858.36 μmol TE/g,对ORAC的清除率为582.62 μmol TE/g,仍然保留较好的抗氧化活性。对脱色玉米肽进行ADH激活率和水解氨基酸测定发现,其对ADH的激活率为48.74%,并仍含有高含量的亮氨酸和丙氨酸,说明脱色玉米肽仍具有醒酒活性。     

黄茶多糖的分离纯化及其抗氧化活性研究

该文对黄茶进行分离纯化,并对其抗氧化活性进行研究。对黄茶进行热水浸提、70%乙醇醇沉得到黄茶70部位的粗多糖（YT70）,利用阴离子交换柱对YT70进行分离纯化得到YT70-1,进一步对YT70-1进行DPPH·、ABTS+·、·OH的清除试验以及总还原力能力测定试验。结果表明YT70的糖含量为43.3%,YT70-1的单糖组成为甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖及岩藻糖。YT70-1对DPPH·、ABTS+·和·OH的清除率与质量浓度呈量效关系,且总还原能力与浓度成正比。在浓度为20 mg/mL时,YT70-1对DPPH·、ABTS+·和·OH的清除率分别为48.7%、77.01%和39.67%,还原力为0.415。YT70-1对ABTS+·的IC50值为3.87 mg/mL。因此YT70-1具有一定的体外抗氧化活性,能够清除DPPH·、ABTS+·和·OH,并且清除能力随多糖浓度的增大而增加。     

电子束辐照对核桃青皮醌类物质提取及活性的影响

为探究电子束辐照对核桃青皮中醌类物质提取效果及活性的影响,以及不同萃取相（石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯）核桃青皮提取物的抑菌活性和抗氧化活性。通过响应面法研究最优提取条件,利用牛津杯法测定不同萃取相对蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性,通过测定DPPH·、ABTS＋·和·OH清除率评价不同萃取相的抗氧化活性。结果表明：电子束辐照预处理可提升核桃青皮中胡桃醌的得率,适宜的辐照剂量为30 kGy,超声提取参数为乙醇浓度65% ,料液比1∶40（g/mL）,超声时间170 min,醌类物质得率达到8.35 mg/g;青皮提取物的不同萃取相具有一定的抗氧化活性和抑菌活性,其中乙酸乙酯相萃取物的抗氧化活性最强,对DPPH·、ABTS＋·、·OH的清除率分别达95.8% ,70.7% 和27.7% ,同时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌活性也较强,抑菌圈直径分别达到（13.81±0.42）mm,（11.70±0.32）mm和（12.86±0.85）mm。 电子束辐照耦合超声辅助提取可增强核桃青皮醌类物质的提取效果,并提升活性物的抑菌与抗氧化活性,在天然产物提取中具有广阔的应用前景。     

栽培菊苣籽总黄酮的细胞毒性及清除羟自由基活性成分的识别

采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT)法评价栽培菊苣籽总黄酮对小鼠巨噬细胞RAW264.7的毒性。从总抗氧化能力、清除2,2’-联氮-双-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐自由基(2,2’-azino-bis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)diammonium salt cation radical,ABTS+·)能力、清除O_2~-·能力以及抑制Fe~(2+)诱发的卵黄脂蛋白脂质过氧化能力4个方面评价栽培菊苣籽总黄酮的抗氧化活性,并与常见的抗氧化剂VC和叔丁基对苯二酚(tertbutylhydroquinone,TBHQ)作比较。之后采用高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)法对栽培菊苣籽总黄酮中清除·OH的活性成分进行了识别。MTT实验结果显示,菊苣籽总黄酮质量浓度为1 mg/mL时,对RAW264.7细胞具有一定的毒性,而当其质量浓度适当减小后,则基本无毒性。抗氧化实验结果表明:栽培菊苣籽总黄酮的总抗氧化活性和清除ABTS~+·的能力弱于VC和TBHQ,但在低质量浓度时,其总抗氧化活性与TBHQ非常接近;在清除O_2~-·方面,活性由强到弱为VC菊苣籽总黄酮TBHQ;在抑制卵黄脂蛋白脂质过氧化实验中,栽培菊苣籽总黄酮强于VC,但弱于TBHQ。HPLC法结果显示,绿原酸比洋蓟素具有更高的清除·OH的活性,且二者对·OH的清除率分别为66.42%和46.00%。     

海南无刺蜂蜂蜜中多酚类物质成分分析及其抗氧化、抗炎活性评价

以海南无刺蜂蜂蜜及其多酚类提取物为研究对象,分别测定分析无刺蜂蜂蜜的理化成分和多酚物质,研究其抗氧化和抗炎活性。通过液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱分析多酚类成分,并采用福林-酚法和硝酸铝比色法测定多酚类提取物总酚酸和总黄酮含量。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、2,2’-联氮-双-（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate) radical,ABTS＋·）清除实验和铁离子还原力实验评价多酚类提取物的体外抗氧化活性,并采用细菌脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）诱导的RAW 264.7细胞体外炎症模型,探究多酚类提取物的抗炎活性。结果显示,无刺蜂蜂蜜水分质量分数为（26.3±0.1）%,pH 3.7±0.2,蛋白质含量为（628.2±9.0）mg/kg,淀粉酶值为（19.6±0.2）mL/（g·h）,总糖质量分数为（46.7±6.0）%,包括果糖（21.0±3.7）%、葡萄糖（24.9±2.2）%、蔗糖（0.8±0.1）%;多酚类提取物的总酚酸和总黄酮含量分别为（96.6±0.4）μg CAE/g和（16.1±0.3）μg QE/g;多酚类提取物的DPPH自由基和ABTS＋?清除能力IC50值分别为（435.1±0.4）、（423.0±0.3）μg/mL,铁离子还原力为（0.6±0.02）μmol Trolox/g;在体外抗炎实验中,多酚类提取物能显著抑制由LPS诱导的RAW 264.7细胞NO的释放,并显著抑制促炎症基因iNOS、IL-1β、IL-6和MCP-1的表达,显著增强抗氧化基因HO-1的表达,并呈剂量相关性。综上所述,海南无刺蜂蜂蜜营养成分丰富,富含酚酸和黄酮类物质,且具有很强的抗氧化和抗炎能力,具有良好的开发利用价值。     

番茄果胶和半纤维素抗氧化活性分析

为了探究番茄细胞壁中不同类型果胶和半纤维素的抗氧化活性,利用水、EDTA、Na₂CO₃、4% KOH和24% KOH溶液分步提取,得到水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(CSP)、共价结合型果胶(SSP)、松散结合型半纤维素(LH)和紧密结合型半纤维素(TH)五种组分,对各组分进行了氧自由基吸收能力(ORAC)、DPPH自由基(DPPH·)清除能力、ABTS自由基(ABTS+·)清除能力和铁离子还原能力(FRAP)的分析。结果表明,番茄WSP含量显著高于CSP和SSP,为1.05 mg GalUA/g FW,TH含量显著高于LH(p<0.05),为0.09 mg Glu/g FW。番茄不同类型果胶和半纤维素均具有一定的抗氧化活性。其中,CSP的ORAC、DPPH·清除能力和ABTS+·清除能力较强,综合抗氧化活性较高。在5 mg/mL时,CSP的ORAC值相当于76.4 μmol/L Trolox,DPPH·和ABTS+·的清除率分别达到61.0%和99.8%。而SSP、LH和TH具有较强的FRAP。相关性分析表明各组分与抗氧化活性密切相关。研究结果为番茄的综合加工利用和作为功能性食品添加成分的开发提供了理论根据。     

Production and characterisation of duck albumen hydrolysate using enzymatic process

Influences of different ultrasound treatments combined with heat pretreatment on enzymatic hydrolysis, emulsifying properties and antioxidant activities of hydrolysates from duck egg albumen were studied. Heat pretreatment at 95 °C for 30 min inhibited both serine and cysteine protease inhibitors effectively. Ultrasonication of heated duck albumen at 60% amplitude for 10 min yielded the highest surface hydrophobicity. Coincidentally, aforementioned pretreatment rendered the hydrolysate with highest degree of hydrolysis (DH) than other pretreatments when Alcalase was used. The resulting hydrolysate showed the highest antioxidant activities including DPPH radical and ABTS radical cation scavenging activities and ferric reducing antioxidant power as well as emulsifying properties when hydrolysis time of 90 min was used. The hydrolysate possessed the peptides with molecular weight of 219–255 Da with the highest ABTS radical scavenging activity. Thus, heat pretreatment, followed by ultrasonication of duck albumen under appropriate condition could increase DH, antioxidant activities and emulsifying properties of duck albumen hydrolysate.     

麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS）阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合PeptideRanker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20 个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY（765.3 Da）抗氧化活性最高（ORAC 3.01 μmol TE/μmol）、ABTS阳离子自由基清除率95.58%）。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。     

生物解离大豆蛋白酶解物体外模拟消化抗氧化活性变化

挤压膨化大豆在生物解离过程中,通过酶解（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）产生的大豆蛋白酶解物（soybean protein hydrolysate,SPH）有良好的抗氧化活性,因此,需要探索模拟胃肠道（gastrointestinal,GI）消化对蛋白酶解物抗氧化活性的影响。分别以蛋白酶（碱性蛋白酶、风味蛋白酶）酶解得到的SPH和经过模拟GI消化后的产物作为研究对象,采用水解度、氨基酸组成、分子质量分布、氧化自由基吸收能力（oxidative radical absorption capacity,ORAC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力及2,2’-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt,ABTS）阳离子自由基清除能力对样品抗氧化活性进行分析。结果显示：相对于风味蛋白酶酶解,采用碱性蛋白酶进行酶解时抗氧化活性更高;但是经过模拟GI消化后,风味蛋白酶酶解得到的SPH抗氧化活性更高,ORAC为69.15 μmol/mg、DPPH自由基清除能力为27.29%、ABTS阳离子自由基清除能力为56.21%,肽的相对含量更高,为75.86%,并且肽中具有抗氧化活性的氨基酸含量更高,分子质量小于1 kDa的肽相对含量最高,为17.35%。     

毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的研究

目的：明确毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7免疫功能的调节作用。方法：分别以质量浓度25、50、100、200、400μg/mL的毛蕊花糖对RAW264.7巨噬细胞进行培养,以10μg/mL的脂多糖(LPS)为阳性对照组、不加任何样品的培养基为空白对照组。通过噻唑蓝(MTT)实验、吞噬中性红实验、NO释放量测定及酶联免疫吸附法测定细胞因子(IL-6、IL-1β、IFN-α、IFN-γ)的分泌量,评价毛蕊花糖的免疫调节作用。结果：质量浓度为25～400μg/mL的毛蕊花糖对巨噬细胞RAW264.7作用24h后,可显著提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且毛蕊花糖溶液质量浓度为200μg/mL时效果最好。结论：毛蕊花糖对小鼠腹腔巨噬细胞系RAW264.7具有免疫调节活性,是一种良好的免疫增强剂。     

长裙竹荪多肽抗氧化及免疫调节作用

分离纯化长裙竹荪子实体多肽,对其抗氧化和免疫调节活性进行研究。采用磷酸盐缓冲液提取,分子排阻色谱分离,反相高效液相色谱纯化获得长裙竹荪子实体多肽。通过自由基清除作用,评估其抗氧化活性。通过测定巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性、细胞因子分泌能力,评价长裙竹荪多肽的免疫调节作用。结果显示:长裙竹荪多肽得率为0.59%,该多肽具有优良的自由基清除活性,能提高巨噬细胞吞噬能力,显著(P<0.05)促进其细胞因子的分泌,特别是能够迅速促进信息递质NO的分泌和Toll样受体的表达。因此,长裙竹荪多肽可作为一个潜在的免疫调节药物而开发利用。     

两种泽兰酸性多糖的结构和生物活性

从泽兰中提取多糖组分，并评价其体外抗氧化活性和细胞免疫调节活性。通过DEAE-52纤维素柱层析和SephadexG-100柱层析从泽兰粗多糖中分离得到2 个纯多糖，分别命名为LHPS1和LHPS5。采用物理化学方法和免疫学方法对LHPS1和LHPS5的结构和生物活性进行了研究。结果表明，LHPS1（1.13×105 Da）和LHPS5（7.40×104 Da）是由多种单糖和半乳糖醛酸组成的酸性多糖。总还原能力和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除率测定结果表明，LHPS1和LHPS5具有显著的体外抗氧化活性。免疫实验分析结果表明，LHPS1和LHPS5能激活RAW264.7细胞促进肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α的产生，并促进脾淋巴细胞增殖。荧光免疫激活转运实验结果显示LHPS1和LHPS5能够通过激活RAW264.7细胞中的核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）调节免疫应答。此外，抑制剂中和实验结果显示两种多糖可能通过结合细胞表面甘露糖受体激活巨噬细胞。LHPS1和LHPS5具有一定的体外抗氧化活性和细胞免疫调节活性，可用作抗氧化补充剂或免疫调节剂。