甲鱼蛋蛋白水解物的体外消化及对抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响

抗氧化及抑制α-葡萄糖苷酶活性是糖尿病防治的有效策略。用木瓜蛋白酶水解甲鱼蛋蛋白,采用超滤法分离小分子质量水解物组分(<2.5 ku);采用体外模拟胃及胃肠道消化模型,探究分子质量<2.5 ku组分的体外消化特性及抗氧化与α-葡萄糖苷酶抑制活性的变化。结果表明:制备的甲鱼蛋分子质量<2.5 ku组分具有良好的色泽(黄绿色),水溶液无色透明。经胃消化,分子质量<2.5 u组分的色谱峰变化不大,表明其在胃中的稳定性较好。而经胃肠道消化,原来的色谱峰降低,有些峰甚至消失,形成了新的色谱峰,肽含量显著升高,表明分子质量<2.5 ku组分中的部分活性肽被胃肠道消化产生更短的肽。分子质量<2.5 ku组分的原液及其胃消化产物和胃肠消化产物的DPPH自由基清除率的IC50值(mg/mL)分别是13.61,6.79,3.56;ABTS自由基清除率的IC50值(mg/mL)分别是18.21,179.40,>300;α-葡萄糖苷酶抑制率的IC50值(mg/mL)分别是17.96,10.81,<1。甲鱼蛋<2.5 ku组分具有潜在的降血糖作用,经胃肠消化后产物仍具有较强甚至更好的降血糖潜力。     

苦荞蛋白模拟消化产物抗氧化活性及组成研究

目的:通过体外模拟部分胃、肠道消化过程,考察苦荞蛋白经胃、肠道消化后生成肽的组成和抗氧化活性;揭示苦荞蛋白质体内消化与抗氧化活性的关系.方法:采用胃蛋白酶、胰蛋白酶,模拟人体胃、肠道消化过程酶解苦荞蛋白质,确定产生最强的抗氧化肽的时间;经凝胶分离,确定抗氧化肽分子质量范围.结果:苦荞蛋白质经模拟消化过程10 h产生最高抗氧化活性多肽,凝胶分离出5个组分,其中分子质量为900 Da的肽具有最强的抗氧化活性.     

麦胚清蛋白抗氧化肽的筛选及对细胞氧化损伤的保护作用

本研究运用超滤与凝胶层析等分离纯化技术逐级分离麦胚清蛋白中性蛋白酶酶解产物,以氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity,ORAC）与2,2’-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonicacid),ABTS）阳离子自由基清除率为评价指标,筛选具有较高抗氧化活性的产物组分,并以该组分为研究对象,利用液相色谱-串联质谱结合PeptideRanker数据库活性预测技术筛选出具有高抗氧化活性的小肽,并通过高糖诱导血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）及H2O2诱导HepG2细胞与VSMCs建立细胞氧化应激模型,评价小肽对细胞氧化损伤的保护作用。结果表明,经超滤与层析筛选出分子质量较小的V组分抗氧化活性最高,液相色谱-串联质谱鉴定出该组分主要由20 个小肽组成,PeptideRanker预测与抗氧化实验验证发现肽序列LNYPPY（765.3 Da）抗氧化活性最高（ORAC 3.01 μmol TE/μmol）、ABTS阳离子自由基清除率95.58%）。肽序列LNYPPY对H2O2诱导的HepG2细胞和VSMCs氧化损伤具有很好的保护作用,但对高糖诱导的VSMCs异常增殖以及活性氧水平上升无明显影响。综上,肽LNYPPY具有良好的体外抗氧化活性,且对H2O2诱导的细胞氧化损伤具有保护作用,研究可为麦胚清蛋白的开发利用提供重要的理论参考。     

玉米醇溶蛋白肽的超滤膜分级及产物的体外生物活性

为探究分子质量对玉米醇溶蛋白肽体外生物活性的影响,以玉米醇溶蛋白为原料,采用碱性蛋白酶Alcalase酶解制备玉米醇溶蛋白肽,采用截留分子质量为5、3 ku和1 ku的超滤膜对玉米醇溶蛋白肽进行顺次分级分离,获得分子质量大于5 ku、3~5 ku、1~3 ku和小于1 ku 4个组分,通过测定各组分的抗氧化活性和乙醇脱氢酶激活活性,表征超滤膜分级对玉米醇溶蛋白肽体外生物活性的影响。结果表明：用碱性蛋白酶Alcalase酶解玉米醇溶蛋白2 h时,清除DPPH自由基的玉米醇溶蛋白肽组分分子质量分布在1~5 ku范围内;螯合亚铁离子、清除羟自由基和激活乙醇脱氢酶的玉米醇溶蛋白肽组分的分子质量集中在小于1 ku;而玉米醇溶蛋白肽的超氧阴离子自由基清除活性和还原力受其分子质量大小影响较小。综上,分子质量对玉米醇溶蛋白肽的生物活性影响较大,可以选用超滤膜对玉米醇溶蛋白肽活性组分进行分级和富集。     

克氏原螯虾虾头模拟胃肠道消化产物中ACE抑制肽的分离纯化与鉴定

为了从克氏原螯虾虾头模拟胃肠道消化产物中制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽,以克氏原螯虾虾头为原料,采用体外模拟肠胃道消化的方法对其进行酶解,以体外ACE抑制率为指标,通过超滤、凝胶色谱、离子色谱、反向高效液相色谱相结合的方法对克氏原螯虾虾头模拟胃肠道消化产物进行分离纯化与筛选,以期获得纯度较高的ACE抑制肽,并利用电喷雾静电场离子阱串联质谱对其氨基酸序列进行测定,结果表明,克氏原螯虾虾头模拟胃肠道消化产物中ACE抑制肽主要分布在分子质量低于3 000 u的超滤组分中;经过分离纯化鉴定得到1个新型ACE抑制肽,其分子质量为225 u,肽序列为Pro-Val,半数抑制浓度IC50值为0. 11 mg/m L,与模拟消化产物相比,ACE抑制肽的IC50值纯化了16. 72倍。     

小米米糠蛋白水解物及其膜分离组分的降血压相关活性研究

植物源蛋白肽具有较好的抗氧化和降血压活性,研究采用蛋白酶Alcalase水解小米米糠分离蛋白(MBPI)获得小米米糠蛋白水解物(MBPH),经膜分离技术得到成4种不同分子质量大小的多肽组分。通过氧自由基吸附能力(ORAC)、血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性、肾素(renin)抑制活性和体内降血压活性,评价了小米米糠蛋白水解物及其不同分子质量组分抗氧化及降血压活性,鉴定了1 ku组分多肽的氨基酸序列。结果显示,低分子质量小米米糠蛋白水解物具有更好的氧自由基吸附能力和降血压活性,1 ku组分的ORAC值为1 455.41μmol TE/mg,ACE抑制率分为73.667%,肾素抑制率为74%,且在灌胃6 h后降低SHRs的收缩压约37.8 mm Hg;1 ku组分中鉴定出7个小肽序列VALVR、VLER、VVRP、WVGK、FGPK、VLLF和LFGK。研究认为小米米糠蛋白水解物,尤其是1 ku肽组分可能作为功能性成分用于降血压相关的功能食品和保健品的开发。     

葛仙米藻胆蛋白的体外消化特性

研究葛仙米藻胆蛋白在体外模拟胃液和肠液的消化产物性质,重点测定不同消化时间产物的可溶性蛋白质、游离氨基含量变化及其抗氧化作用,并利用HPLC法测定消化产物分子质量变化情况。结果表明：在胃液和肠液消化作用下蛋白质含量均呈现下降趋势,而游离氨基含量呈现上升趋势,消化产物较初始产物对ABTS+·和脂质过氧化具有更强的抑制作用,但对·OH的清除能力却有所下降;偏相关分析结果表明,与葛仙米藻胆蛋白消化产物的抗氧化作用紧密相关的是消化产物中的分子质量为6ku和0.2ku的肽类。     

汉麻籽抗氧化肽的制备与氨基酸序列分析

为开发具有较好抗氧化活性的植物源蛋白肽,采用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶法水解汉麻籽粕获得汉麻籽蛋白水解物,经膜分离技术得到4种不同分子质量的多肽组分。通过DPPH自由基清除率、总还原力的测定,评价不同多肽组分的抗氧化活性,并对抗氧化活性最强的多肽组分进行氨基酸序列分析。结果显示：低分子质量的汉麻籽多肽组分具有更好的抗氧化活性,其中HP-Ⅳ组分（分子质量＜1 kDa）的抗氧化活性最强;HP-Ⅳ组分中丰度较高的6个肽段的分子质量分别为 364.84、539.77、630.30、662.33、718.90、827.41 Da,氨基酸序列分别为NRDDMRER、ANQLDQFSR、NPEDEFEQLRREGGRG、NHNNQLDLTPR、TVNSYNLPILRF、VSLLDTSNVNNQLDDNPRRFY。汉麻籽蛋白水解物,尤其是分子质量小于1 kDa的多肽组分可作为功能性成分用于抗氧化相关功能食品和保健品的开发。     

大鼠肠囊外翻法分析核桃肽吸收特性及抗氧化肽筛选鉴定

本研究通过大鼠肠囊外翻法探讨了<3 kDa核桃蛋白肽模拟胃肠消化产物的吸收特性,以抗氧化能力(DPPH自由基清除率、ABTS⁺自由基清除率、Fe²⁺螯合率)和活性肽吸收率为指标筛选核桃肽在肠道吸收的最优条件,并应用模拟分子对接技术和Nano-HPLC-MS/MS技术对吸收肽组分进行筛选和鉴定,得到能够以完整形式被吸收并发挥抗氧化活性的新型核桃源肽。结果表明:当核桃肽消化产物吸收浓度为6 mg/mL,吸收时间为2 h时,其抗氧化活性最高且在小肠吸收率最高:进一步通过Nano-HPLC-MS/MS鉴定结果表明0.5～1 kDa活性肽数量最多,其中位于C端/N端氨基酸主要集中在Pro、Thr、Leu,鉴定出33条活性肽能够以完整形式被吸收,穿过肠道屏障;最后通过分子对接技术与DPP-Ⅳ相结合,获得三条结合能最低的活性肽NLRFPL、NPDDEFRPQ、KGHLFPN,其结合能分别为-8.8、-8.6、-8.6 kal/mol,其中KGHLFPN抗氧化能力最强。综上,<3 kDa核桃肽模拟胃肠道消化能够释放抗氧化活性更高且能够被小肠吸收的...     

鲣鱼蛋白肽谱效关系研究

采用鲣鱼为原料,以蛋白质回收率为指标,酶解制备不同工艺条件的样品。通过测定其黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制活性、ORAC值、分子质量分布图谱和总氨基酸含量,构建鲣鱼蛋白肽体外化学活性与其分子质量分布图谱、总氨基酸含量图谱之间的谱效关系。结合超高效液相-质谱联用(LC-MS/MS)方法研究其降尿酸肽和抗氧化肽的分布。研究表明,鲣鱼蛋白肽的XOD抑制活性与其ORAC值具有显著的相关性。由多肽分子质量<1ku所占含量的分布区段和脂肪族氨基酸的含量可初步预测鲣鱼蛋白肽的化学活性。质谱分析表明,纯化组分的质谱基峰图在不同时间段的信号强度与鲣鱼蛋白肽的降尿酸活性和抗氧化活性具有明显的相关性。