产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌PCR检测方法的建立

目的：建立快速简便地检测产酪胺粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)的PCR方法。方法：将粪肠球菌和屎肠球菌的酪氨酸脱羧酶基因与GenBank数据库中已公布的细菌的酪氨酸脱羧酶基因进行比对,根据它们的非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,建立检测产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的PCR方法。结果：根据非保守序列,分别设计粪肠球菌和屎肠球菌的特异性引物,用27株细菌对这两对引物分别进行反复验证,结果显示,所设计的两对引物都只对其目的菌株产生特异性扩增,对其他菌株没有扩增,方法的检测限可达到1.0×102CFU/mL。结论：本方法具有良好的特异性、稳定性和灵敏性,可用作食品中产酪胺粪肠球菌和屎肠球菌的检测。     

2-羟丙基-β-环糊精/阿魏酸包合物对熏马肠中阴沟肠杆菌产酪胺的影响机制

制备2-羟丙基-β-环糊精（2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin,HP-β-CD）/阿魏酸（ferulic acid,FA）包合物（HP-β-CD/FA）,探究其对阴沟肠杆菌（Enterobacter cloaca）L63的pH值、生长量、酪氨酸脱羧酶相关基因表达和酪胺积累的影响,以及对熏马肠中酪胺积累的影响。采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测酪氨酸脱羧酶（tyrosine decarboxylase,tdcA）、酪氨酸/酪胺逆向转运体（tyrosine/tyramine antiporter,tyrP）、酪氨酸t-RNA合成酶和Na＋/H＋逆向转运体基因在酪胺产生途径中的表达水平。此外,采用高效液相色谱法检测酪胺在48 h内的累积水平。结果表明：FA和HP-β-CD/FA包合物在纯菌体系下均能够降低tdcA和tyrP基因的表达（P＜0.05）,对阴沟肠杆菌L63有较强的抑菌活性,在纯菌体系和熏马肠中均能够抑制pH值升高,同时有效减少酪胺积累,FA包埋后抑制酪胺积累效果更显著（P＜0.05）。     

粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和屎肠球菌(Enterococcus faecium)产生物胺交互作用研究

粪肠球菌和屎肠球菌是发酵香肠中常检出的2种主要的产酪胺和苯乙胺微生物。将粪肠球菌和屎肠球菌按照不同比例进行混合接种培养,发现在48h连续培养过程中,当粪肠球菌和屎肠球菌以1∶9比例混和接种培养时,体系pH值、细菌数量和酪胺生成量均显著低于其他各处理组;粪肠球菌有很强的产苯乙胺能力而屎肠球菌产苯乙胺能力较弱,当两者混合接种培养时,各混合体系的产苯乙胺水平相当,屎肠球菌产苯乙胺能力不受影响,而粪肠球菌产苯乙胺能力显著降低。     

环境因素对屎肠球菌产酪胺的影响

酪胺是发酵食品中广泛存在的、毒性较强的一种生物胺。屎肠球菌作为发酵剂或污染菌广泛存在于发酵食品中,大多数具有产生酪胺的能力,成为发酵食品的潜在安全隐患。该研究以一株黄酒酒曲中分离的产酪胺屎肠球菌为对象,选取葡萄糖、酪氨酸、温度、pH值和酒精含量5个因素,研究这些因素对该菌生长和酪胺合成的影响。结果表明,葡萄糖或酪氨酸添加量对菌体的生长影响不大,温度、环境pH值和酒精含量对菌体生长的影响较显著。酪氨酸对菌体产酪胺促进作用明显,温度＜20 ℃,环境pH值＞5,酒精含量＞10%vol时都会减少酪胺的产生。     

雪菊精油对希氏肠球菌产酪胺及相关基因表达的影响

探讨不同质量浓度雪菊精油对希氏肠球菌（Enterococcus hirae）N47产酪胺的影响机制。利用反转录实时定量聚合酶链式反应分析E. hirae在雪菊精油作用下酪氨酸脱羧途径相关基因的表达情况；利用高效液相色谱法检测不同质量浓度雪菊精油对E. hirae产酪胺的影响。并将E. hirae接入到含不同质量浓度雪菊精油的熏马肠中发酵，评估香肠pH值、菌落总数和酪胺积累量。结果表明：在E. hirae纯培养体系和熏马肠体系中，雪菊精油通过抑制微生物的生长和酪氨酸脱羧途径中tyr DC、tyr P基因的表达，降低酪胺的积累量（P＜0.05）。当雪菊精油添加量为1/2最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）和MIC时，熏马肠中酪胺的含量分别为78.52 mg/kg和45.83 mg/kg，较对照组分别减少了64.72%和79.41%。     

自然发酵乳中粪肠球菌和屎肠球菌的4种鉴定方法的比较

采用传统生理生化鉴定方法,16S rRNA基因序列分析技术,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术,变性梯度凝胶电泳技术(DGGE),对分离于自然发酵乳中的9株粪肠球菌和6株屎肠球菌进行鉴定,并对4种鉴定方法进行比较和评价。结果表明,16S-23S rRNA间区序列多态性分析技术和DGGE技术不但可以快速、精确地区分粪肠球菌和屎肠球菌,而且能够将粪肠球菌和屎肠球菌种内的不同基因亚型区分开,而传统生理生化鉴定方法和16S rRNA基因序列分析技术较以上两种方法区分效果略差。     

环境因素对屎肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响

为揭示环境因素对屎肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响,研究了NaCl、糖的添加量、pH、含氧量、温度环境因素以及产胺菌之间对生物胺的影响。结果表明,当pH为5.00时,屎肠球菌的生长和产生物胺能力都受到抑制。当pH为6.00时,产胺菌的产胺能力在有氧条件下显著低于厌氧条件下。通过4因素二次回归方程分析pH、温度、加糖量和加食盐量对生物胺产生的影响,结果表明,pH、糖、盐和温度对屎肠球菌生长有显著的影响,其中受pH和温度影响较大。pH和温度对苯乙胺和酪胺产生有显著的交互影响,并且这种交互作用随着温度升高显著增强。     

食品来源粪肠球菌的全基因组分析

目的 了解食品来源粪肠球菌的全基因组分子特征, 并与临床分离菌株进行比较基因组学分析。 方法 对收集的食品来源粪肠球菌进行全基因组测序和生物信息学分析, 比较分析3株食品来源粪肠球菌和7株已发表的临床分离粪肠球菌基因组, 对比粪肠球菌基因组中携带的耐药基因、毒力基因和移动元件, 筛选核心基因, 构建系统进化树。结果 3株食品来源粪肠球菌染色体全基因组序列全长分别为2816436、3005875和2818728 bp, 共含有2733、2853和2756个基因, 基因平均鸟嘌呤和胞嘧啶(guanine and cytosine, GC)含量为38.0%。在全基因组核酸水平上, 食品与临床分离的粪肠球菌线性关系良好, 基因组结构高度相似。3株食品来源菌株基因组中含有3~7种耐药基因、8~19种毒力基因和42~67个移动元件, 与临床分离菌株比较, 无显著性差异(P>0.05)。系统进化树分析发现食品来源和临床分离粪肠球菌分布在一个进化分枝, 分子遗传关系距离较近。结论 本研究获得了食品来源粪肠球菌全基因组基本特征的背景材料, 证实了食品来源和临床分离粪肠球菌进化溯源关系相近, 基因组无显著差异(P>0.05), 为后续食品工业界实际应用粪肠球菌的安全性评价奠定了基础。     

干酪中肠球菌种群的遗传差异及万古霉素抗性基因分析

通过种、属引物特异性扩增、重复序列PCR（rep-PCR）技术和万古霉素抗性基因检测对新疆北疆地区干酪样品中球菌的遗传结构差异进行分析。结果表明,15份样品共分离52株肠球菌,包括31株耐久肠球菌(Enterococcus durans)、18株粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和3株屎肠球菌(Enterococcus faecium)。依据rep-PCR遗传指纹带谱分析,52株菌可以聚类成7个群,其中4个由E. durans构成。24株肠球菌检测到了万古霉素抗性基因,17株E. durans为VanC2/C3型,4株E. faecalis为VanC1型,2株E. faecium为VanB型,只有1株E. faecium为VanA型。新疆北疆地区干酪中肠球菌种群分布较为广泛,地域之间优势种群和基因型不同,同种肠球菌菌株之间存在广泛的遗传差异。     

屎肠球菌饲用效果及作用机理

屎肠球菌是动物肠道中的一种常见菌,它是一种兼性厌氧的乳酸菌,具有良好的耐酸、耐胆盐和耐热性,能够抑制肠道致病菌增殖,如大肠杆菌和沙门氏菌,医学上屎肠球菌制剂常被用来治疗腹泻。结合我们有关屎肠球菌影响仔猪肠道基因表达的最新研究结果,重点综述了屎肠球菌在饲料中的应用效果及作用机理。     

大蒜精油对屎肠球菌和粪肠球菌产苯乙胺和酪胺的影响

本试验采用双倍试管稀释法,测定大蒜精油分别对高产苯乙胺和酪胺的E.faecium和E.faecalis的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC);并利用高效液相色谱法测定不同浓度的大蒜精油对两株高产苯乙胺和酪胺菌株的影响,从而明确大蒜精油对其产生物胺能力的抑制作用。结果表明:大蒜精油对供试菌株都具有较强的抑菌活性,大蒜精油对E.faecium的最大抑制率可达48.20%,对E.faecalis的最大抑制率为52.41%,且抑菌效果随大蒜精油浓度的增大而逐渐增强;在大蒜精油的添加量为1/2 MIC时,大蒜精油对E.faecium和E.faecalis的生长具有抑制作用;当大蒜精油浓度为0.025%时,能够显著(p0.05)降低供试菌株产苯乙胺和酪胺的含量,苯乙胺含量与空白组相比降低了26.61%,酪胺的降低了15.54%。说明大蒜精油对高产酪胺和苯乙胺的菌株具有显著(p0.05)抑制效果,从而减少了酪胺和苯乙胺的生成。     

Antibiotic resistance and incidence of Enterococcus species in Turkish white cheese

Thirty samples of Turkish white cheese were analysed for the presence of Enterococcus spp., and presumptive isolates were identified by morphological, cultural and biochemical tests and confirmed by the API 20 Strep System. Among the 101 isolates of Enterococcus spp., 62 were E. faecalis , 25 were E. faecium , seven were E. durans , five were E. mundtii and two were E. hirae/dispar . The resistance of the isolates to 13 different antibiotics was determined by the Kirby–Bauer disc diffusion test. Resistance to streptomycin, erythromycin, oxacillin and vancomycin was frequently found in these enterococci, and resistance to vancomycin was found in 96.8% of E. faecalis isolates and 76% E. faecium . The most effective antimicrobials were ampicillin (69.3% of isolates inhibited) and imipenem (76.3% of isolates inhibited). This examination confirmed the presence of enterococci, especially vancomycin-resistant strains, in Turkish white cheese, indicating poor sanitary conditions during production and processing and a significant health risk for consumers.     

Enterococcus populations in Pecorino Abruzzese cheese: biodiversity and safety aspects

The presence of enterococci in Pecorino Abruzzese cheese during ripening was evaluated. Counts were high, especially in fully ripened summer batches. Seventy strains were isolated and identified based on phenotypical and genotypical features as Enterococcus faecium (48.5%), Enterococcus faecalis (40%), and Enterococcus durans (11.5%), with the first species predominant in spring batches and the second predominant in summer batches. High biodiversity was revealed by random amplification of polymorphic DNA and a PCR assay, suggesting the presence of autochthonous strains. E. faecium isolates were the most resistant to the tested antibiotics, especially to erythromycin, chloramphenicol, and penicillin, but all strains were susceptible to vancomycin, as confirmed by the absence of vanA and vanB genes. The presence of some virulence determinants was investigated, revealing the diffusion of aggregation substance (asal) and gelatinase (gelE) genes in 37.5% of E. faecalis strains. However, none of the isolates produced gelatinase in vitro, suggesting the presence of silent genes. The virulence genes were absent in E. durans. Among E. faecium strains, only Lab 41/1 possessed gelE and asal, whose presence previously has been reported only in E. faecalis. Decarboxylating activity was revealed for phenylalanine (27% of the strains) and tyrosine (96%) but not histidine. The presence of a tyrosine decarboxylase-encoding gene was observed for all strains. A comparison of these results with those of previous studies of clinical and food isolates indicates that enterococci from Pecorino Abruzzese cheese have low pathogenic potential.     

产细菌素屎肠球菌TRS5特性分析及其编码基因的扩增

屎肠球菌TRS5在37℃、p H 6.5的MRS培养基中经过24 h的培养后,其细菌素生成量达到最大。培养基中添加胰蛋白胨或葡萄糖有利于促进TRS5细菌素的生成,而添加麦芽糖、乳糖或甘露糖(20 g/L)后细菌素活性减少50%。外源添加5 g/L的甘油和吐温-80会抑制TRS5细菌素的产生,而添加K_2HPO_4或VB_1、VB_2、VB_6、VC则对细菌素的生成没有影响。药敏实验证实屎肠球菌TRS5对红霉素、氯霉素、万古霉素、替考拉宁、四环素、青霉素敏感。聚合酶链式反应及测序结果证实屎肠球菌TRS5含有肠球菌素enterocin P和类L50的结构基因。