罗非鱼肌浆蛋白源抗氧化肽的制备、分离纯化及其体外抗氧化活性

采用木瓜蛋白酶对罗非鱼肌肉蛋白组分（肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白）进行酶解,研究罗非鱼不同蛋白组分酶解产物的抗氧化活性,并通过超滤、凝胶过滤色谱、反相高效液相色谱对高活性肌浆蛋白组分抗氧化肽进行分离纯化,同时对纯化后的抗氧化肽氨基酸组成予以分析。结果表明：罗非鱼肌浆蛋白酶解物（tilapia sarcoplasmic protein hydrolysates,TSPH）抗氧化活性高于肌质与肌原纤维蛋白酶解物,当肌浆蛋白酶解4 h时,TSPH（6 mg/mL）对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基清除率及其还原力均达到最高,分别为84.61%、50.01%和0.629;经超滤分离后,其分子质量小于5 kDa的组分具有较高的抗氧化活性;该组分经凝胶色谱分离后,富集得到E1～E4共4 个组分,其中E3组分（0.8～0.3 kDa）的抗氧化活性最高, 3 mg/mL E3组分对DPPH自由基清除率达83.61%,还原力为0.953;E3组分再经反相高效液相色谱分离纯化后,富集得到F1～F9共9 个组分,其中F4组分的抗氧化活性最高,其DPPH自由基的半清除质量浓度为0.78 mg/mL,且经氨基酸组成分析发现色氨酸（Trp）、甘氨酸（Gly）、组氨酸（His）为其含量较高的氨基酸,相对含量分别高达31.20%、27.25%和8.97%。     

女贞内生真菌清除自由基活性成分的分离纯化

采用组织块分离法对女贞的内生真菌进行分离,对分离到的菌株进行清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-（2,4,6-trinitrophenyl）hydrazyl,DPPH）自由基活性研究,并对活性较强菌株代谢产物中的清除自由基成分进行分离纯化。从女贞的叶片、茎、根、枝条等组织共分离出101 株内生真菌,研究发现NZ-18菌株清除自由基活性最强,并采用液相色谱法对NZ-18发酵液中清除自由基活性成分进行制备。分离到一种活性较强的化合物1,经高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）法和薄层色谱（thin layer chromatography,TLC）法纯度验证,发现该化合物为纯品化合物经活性验证发现化合物1在样品质量浓度为0.5 mg/mL时对0.2 mg/mL的DPPH自由基清除率为94.88%。结果表明,女贞内生真菌中存在大量的清除自由基活性菌株。     

远志多糖的分离纯化、结构特征及生物活性

目的:分离纯化远志多糖(polysaccharide of Polygala tenuifolia,PTP),并对其理化性质、抗氧化和降血糖活性进行研究。方法:采用超声波辅助提取、分级醇沉、DEAE-cellulose 52和Sephadex G-100柱色谱分离纯化远志多糖;紫外-可见光谱扫描法、比旋光度法、凝胶渗透色谱法3种方法验证纯度;高效凝胶渗透色谱法测定相对分子质量,高效阴离子交换色谱测定单糖组成;清除1,1-二苯基-2-苦味基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基和羟自由基评价体外抗氧化活性;测定对α-葡萄糖苷酶抑制能力以研究其降血糖活性。结果:远志多糖经分离纯化后获得组分PTP-1,经3种方法验证PTP-1为均一性良好的多糖,相对分子质量为4.62×10~4,由半乳糖、葡萄糖、甘露糖组成,物质的量比为3.92∶1.00∶2.08。抗氧化活性研究结果表明,PTP-1对清除DPPH自由基和羟自由基呈良好的量效关系,半数清除率浓度IC_(50)分别为0.35 mg/m L和0.51 mg/m L。降血糖活性结果表明,PTP-1对α-葡萄糖苷酶具有较好的抑制能力,IC_(50)值为0.52 mg/m L。结论:远志多糖PTP-1为具有抗氧化和降血糖活性的均一多糖。     

DPPH自由基清除活性评价方法在抗氧化剂筛选中的研究进展

1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-Diphenyl-2-picryl-hydrazyl,DPPH)自由基是合成的以氮为中心的稳定自由基,结构简单,反应容易控制,已广泛应用于各种物质提取物或纯化合物的抗氧化活性的评价和筛选。论文详述了目前国内外DPPH自由基应用于抗氧化剂的抗氧化活性评价的测定方法(分光光度法、电子顺磁共振法、电化学法和反相高效液相液色谱法)、原理,以及应用特性。     

玉米谷蛋白抗氧化肽的分离纯化与活性研究

采用Alcalase蛋白酶酶解从玉米脱脂蛋白粉中分离得到的玉米谷蛋白,对酶解产物采用超滤、凝胶过滤层析和高效液相色谱法分离纯化玉米谷蛋白抗氧化肽,并研究其抗氧化活性。结果表明,Alcalase蛋白酶酶解玉米谷蛋白获得的抗氧化肽分子量主要集中在低于1 kDa,其DPPH自由基和羟自由基清除率分别为80.46%、81.36%。凝胶过滤层析得到抗氧化活性较高的组分P6、P7和P8,其DPPH自由基清除率分别为32.05%、24.43%、14.19%,多肽含量分别为0.638、0.253、0.158 mg/mL。高效液相色谱对这3个组分进一步分离纯化分别得到主要组分。     

贵州顶坛花椒抗氧化活性成分研究

目的:研究顶坛花椒的抗氧化活性成分。方法:采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除法筛选测定顶坛花椒果皮的甲醇提取物及其不同极性溶剂萃取部位抗氧化活性,筛选出抗氧化活性部位,然后采用柱层析法及高效液相色谱法分离活性部位,通过13C-NMR、1H-NMR和质谱法,结合文献数据鉴定化合物结构。结果:顶坛花椒的甲醇提取物具有显著DPPH自由基清除能力,其乙酸乙酯萃取部位为活性部位,从中分离得到的5个主要成分分别被鉴定为:2’-羟基-β-山椒素(1),异鼠李素-3-O-β-半乳糖苷(2),槲皮素-3-O-β-半乳糖苷(3),槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷(4),槲皮素-3-O-β-(4’’-O-硬脂酰基)葡萄糖苷(5),其中(5)为首次从花椒属植物分离得到。结论:顶坛花椒果皮具有显著的抗氧化作用,主要活性成分为其中的酰胺类和黄酮类组分。     

不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

高速逆流色谱法用于纵条纹炭角菌中过氧麦角甾醇的分离纯化

过氧麦角甾醇生物活性多样,具有较大开发价值,但传统柱色谱分离手段步骤多效率低,本文建立了高速逆流色谱从纵条纹炭角菌中高效快速制备过氧麦角甾醇的方法。通过高效薄层色谱和高效液相色谱测定分配系数,再利用高速逆流色谱考查了多个溶剂体系的分离效果,确定最佳溶剂体系为:正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水(体积比为3∶1∶2∶0.8)。以上相为固定相,下相为流动相,转速为800 r/min(正转),流速为2 m L/min,检测波长为220 nm。制备所得过氧麦角甾醇经13C-NMR和1H-NMR鉴定,并经高效液相色谱分析纯度达到96.05%(峰面积归一化法)。经DPPH体外抗氧化活性测试,发现该化合物在0.2 mg/m L时,对DPPH自由基清除为28.36%,远低于阳性对照抗坏血酸(93.41%),且量价关系也不明显,表明其DPPH自由基清除能力较弱。该方法制备过氧麦角甾醇简便、快速,所得产物纯度高,可用于纵条纹炭角菌中该化合物的分离。     

一种新型抗氧化五肽的纯化、鉴定与表征

以黑鲨鱼皮为原料,利用蛋白酶酶解制备和分离纯化抗氧化多肽,并探究其抗氧化机理。以1,1-二苯基-2-苦肼基（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为主要指标,以水解度为辅助指标,优化酶解工艺条件。通过反相高效液相色谱和电喷雾四极杆飞行时间质谱分离纯化和鉴定氨基酸序列并探究其体外抗氧化活性。结果显示,最佳水解蛋白酶为碱性蛋白酶,最优酶解工艺为pH 8.0、酶添加量311 U/mL、底物质量分数3%、酶解温度45 ℃、酶解时间4.9 h,所得的酶解液DPPH自由基清除率为77.61%,水解度为14.21%。经反相高效液相色谱分离,得到组分F19的DPPH自由基清除能力最强。经鉴定,选择抗氧化活性高的总离子流色谱峰（保留时间为10.02 min左右）进行一级质谱和二级质谱分析,获得纯化的新型抗氧化五肽,其分子质量为461 Da,氨基酸序列结构为Pro-Gly-Gly-Thr-Met,其DPPH自由基清除率为75.01%（1.0 mg/mL）,氧自由基吸收能力（以Trolox当量计）为2490.01 μmol/g。新型五肽的Pro和Met在抗氧化中起到关键性作用。本研究为黑鲨鱼皮抗氧化五肽的抗氧化机理及其构效关系提供了一定理论依据。     

酶解鸡血球制备抗氧化肽的工艺优化和分析鉴定

为挖掘家禽血液潜在的抗氧化特性,以鸡血球为原料,筛选最佳蛋白酶酶解制备抗氧化肽,并对酶解工艺进行响应面优化。采用超滤、阳离子交换色谱、凝胶色谱及高效液相色谱对酶解物进行连续分离纯化,并用质谱进行结构鉴定。结果表明,酸性蛋白酶水解血球蛋白制备的酶解物具有最高的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除能力（＞80%）。其最佳酶解条件为酶用量2%、酶解温度45?℃、酶解时间3.0?h,该条件下的DPPH自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力和还原力分别为（98.31±0.66）%、（28.89±0.31）%和1.94±0.03。经系列分离纯化获得抗氧化活性最强的组分,其在质量浓度为0.1?mg/mL时,DPPH自由基清除能力和还原力分别为（87.16±1.59）%和0.21±0.01。经高效液相色谱-质谱联用技术鉴定,目标肽的氨基酸序列为MGQKDSYVGDEAQSKRGILT,分子质量为2?182.1?Da。     

人工培养蛹虫草C19提取液的体外抗氧化活性研究

探讨人工培养的蛹虫草C19的生物学活性,采用化学比色法分别测定蛹虫草提取物的抗氧化活性.实验结果表明,蛹虫草C19提取液具有很强还原能力.提取液为0.12%时,对DPPH的清除率达到(49.7±1.83)%,对MDA生成的抑制率为(88.67±2.59)%;提取液为0.6%时,对O2-·的清除率为(83.22±3.07...     

北虫草多糖提取工艺优化及其细胞氧化损伤保护作用

目的:优化北虫草多糖的提取工艺,研究北虫草多糖对血管平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:采用L₉(34)正交实验法优化多糖提取工艺,利用羟自由基法、DPPH自由基法和FRAP法检测北虫草多糖清除自由基的能力。在细胞水平上构建过氧化氢诱导细胞氧化损伤模型,采用MTT法、ROS细胞染色法评估北虫草多糖对过氧化氢诱导大鼠主动脉平滑肌细胞氧化损伤的保护作用。结果:北虫草多糖的最佳提取条件为:提取温度90 ℃,料液比1:30 g/mL,提取次数3次,提取时间3.0 h,最高得率为7.94%±0.16%。在多糖浓度为1.6 mg/mL时对羟自由基和DPPH自由基的清除能力以及总抗氧化能力分别为75.57%±1.39%、80.23%±2.75%和(0.22±0.01) mmol/mg。细胞实验表明北虫草多糖可显著抑制过氧化氢诱导细胞内ROS生成,提高细胞存活率。结论:成功优化北虫草多糖提取工艺,北虫草多糖具备良好的体外清除自由基的活性,对由氧化应激所导致的心血管疾病中起到很好的防治意义。     

模拟胃肠消化提高蛹虫草蛋白的体外抗氧化活性

探究模拟胃肠消化对蛹虫草蛋白质理化性质及抗氧化活性的影响。分别采用SDS-PAGE和酸水解法分析模拟胃肠消化前后的蛋白质分子量分布及氨基酸组成。通过体外化学评价方法,测定模拟胃肠消化前后蛹虫草蛋白质及其消化产物的抗氧化活性。构建H2O2诱导氧化损伤的PC12细胞模型,使用CCK-8试剂盒测定经蛹虫草蛋白质消化产物处理后细胞模型中的细胞活力。结果表明,经模拟胃肠消化后,蛋白质分子量的主要分布范围由10~120 ku变为8~15 ku;模拟胃肠消化前后DPPH自由基清除力的IC50值分别为1.55 mg/mL和1.06 mg/mL,Fe2+螯合力的IC50值分别为1.32 mg/mL和0.18 mg/mL,0.3 mg/mL样品的ORAC值分别为467.27±46.53μmol TE/g和948.80±24.02μmol TE/g;100μg/mL消化产物预保护H2O2损伤的PC12细胞后,细胞活力显著提高(p<0.05)。蛹虫草蛋白质模拟胃肠消化前后均具有较强的抗脂质过氧化能力及较低的Fe3+还原能力。蛹虫草蛋白质经模拟胃肠消化后产生了更多小分子量多肽,抗氧化活性显著提高,因此可对消化产物中的抗氧化肽进行进一步的研究和开发。     

不同来源北冬虫夏草活性成分差异及其对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨不同来源北冬虫夏草主要活性成分的差异,并评价其调节小鼠免疫功能的能力。方法：使用高效液相色谱法测定不同来源北冬虫夏草虫草素和腺苷的含量;通过测定小鼠免疫器官指数以及碳廓清实验和脾淋巴细胞增殖实验研究其对小鼠免疫功能的影响。结果：虫草素含量由高到低依次为蚕蛹虫草3.68 mg/g、小麦虫草2.86 mg/g、大米虫草2.63 mg/g、头状虫草0.95 mg/g;腺苷含量由高到低依次为蚕蛹虫草1.11 mg/g、小麦虫草0.79 mg/g 、头状虫草0.64 mg/g、大米虫草0.094 mg/g。碳廓清指数和脾淋巴细胞增殖能力研究结果表明4 种虫草均有提高小鼠免疫活性的功效,与空白组相比差异极显著,蚕蛹虫草和小麦虫草功效最佳;饲喂4 种虫草的小鼠免疫器官指数与空白组相比差异显著。结论：不同来源北冬虫夏草的虫草素和腺苷含量有所差异,蚕蛹虫草和小麦虫含量最高,其提高小鼠免疫功能的能力也最强。     

蛹虫草对紫外诱导果蝇氧化损伤的保护作用

为了探讨蛹虫草对紫外辐射所致氧化损伤果蝇的保护作用,以不同质量分数的蛹虫草培养基饲养经不同时间紫外辐射的果蝇,观察统计其体内的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性和丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果表明：蛹虫草粉质量分数为0.4%的培养基能极显著提高紫外辐射20 min雄果蝇的SOD活性（13.09%,P＝0.005 9＜0.01）并极显著降低MDA含量（17.11%,P＝0.003 2＜0.01）;蛹虫草粉质量分数为0.2%的培养基能极显著提高紫外辐射40 min雄果蝇的SOD活性（8.99%,P＝0.006 6＜0.01）并极显著降低MDA含量（9.06%,P＝0.006 1＜0.01）;蛹虫草对雄性果蝇的抗氧化保护作用优于对雌性的。由此可见,适宜质量分数的蛹虫草粉能够修复紫外辐射对果蝇造成的损伤,对机体起到抗氧化保护作用。     

虫草花多糖提取工艺优化及其抗氧化特性

采用超声辅助法提取虫草花多糖,在单因素试验的基础上,通过L9（34）正交试验优化了虫草花多糖提取工艺;并就虫草花多糖对羟基自由基（·OH）、1,1-苯基-2-苦肼基（DPPH）自由基的清除作用和还原能力进行研究。结果表明：虫草花多糖最佳提取工艺条件为超声功率300 W,液料比30∶1（mL∶g）,超声时间30 min,超声温度45 ℃。在此优化条件下,多糖的平均提取率为3.88%。抗氧化活性试验结果表明,虫草花多糖质量浓度在2.9～14.7 mg/L范围内,随着虫草花多糖质量浓度的增加,其OH、DPPH自由基清除能力及还原能力均逐渐增强,虫草花多糖质量浓度为14.7 mg/L时,对·OH和DPPH·清除率分别达到44.39%和56.34%,说明虫草花多糖具有较强的抗氧化活性。     

高效液相色谱法测定3 种蛹虫草中虫草素及比较分析

对3 种蛹虫草中虫草素含量进行高效液相色谱法测定并比较,以查看不同地区来源的蛹虫草中虫草素含量
的区别,为选育高含量虫草素蛹虫草菌种及改变其培养条件指明方向。首先采用正交试验研究虫草素的提取条件,
获得最适提取工艺,即料液比1∶80、提取时间5 h、提取温度70 ℃,在此条件下虫草素的得率达0.604%（以湖北地区
的蛹虫草作为原料）。然后在此条件下分别对湖北地区（A）、云南地区（B）和本实验室培养（C）的蛹虫草中提
取虫草素并进行测定,结果表明：样品C的虫草素含量远高于A（6.041 mg/g）和B（7.606 mg/g）,为26.071 mg/g。
结果显示,不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,这可能与培养蛹虫草所用的菌种和培养条件差异有关。本
研究筛选出来的菌种以及获得的培养方法,对后续研究补硒栽培对蛹虫草中的活性成分虫草素含量的影响提供了技
术基础。     

蛹虫草胞外多糖的制备、结构分析及其免疫活性

本实验选择蛹虫草菌株CICC 14014液态发酵培养，提取蛹虫草胞外多糖，测定其理化性质及结构，并对其免疫活性进行研究。采用DEAE-Sephacel阴离子交换柱联合Sephadex G-200葡聚糖凝胶柱纯化蛹虫草胞外多糖；利用高效液相色谱法测定多糖分子质量，利用傅里叶变换红外光谱鉴定多糖结构；选用BALB/c小鼠构建免疫损伤模型，考察其体质量及免疫器官指数变化情况，观察其脾脏组织切片形态，计算其T、B细胞增殖率，测定其血清细胞因子及免疫球蛋白质量浓度。结果表明，蛹虫草发酵液中多糖质量浓度为3.15 mg/mL，经分离纯化后所得单一多糖分子质量为3.67 kDa，纯度可达86.13%。动物实验结果表明，蛹虫草胞外多糖可明显提高免疫器官指数，能够有效促使T细胞（低剂量时）、B细胞增殖和免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）G、IgA、IgM、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素（interleukin，IL）-6、IL-2、干扰素（interferon，IFN）-γ的分泌，免疫调节效果显著。研究结果表明蛹虫草胞外多糖可修复环磷酰胺导致的BALB/c小鼠免疫功能损伤，为开发蛹虫草发酵液资源建立了部分理论支撑。