绞股蓝热处理产物中活性成分的纯化与鉴定及其对A549细胞的抑制活性

目的:提取、分离、鉴定绞股蓝热处理产物中抑制肺癌A549细胞的活性成分。方法:绞股蓝叶在温度125℃、压力0.24MPa条件下,加热处理3h,用80%乙醇加热回流提取3h,利用活性跟踪方法,通过大孔树脂HP-20及反相柱等分离手段,分离抑制肺癌A549细胞的活性成分,并用核磁共振波普(1H-NMR、13C-NMR)、电喷雾质谱(ESI-MS)等数据鉴定有效成分。结果:绞股蓝热处理产物中分离得到2个达玛烷类皂苷,分别为绞股蓝皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI,而且它们对肺癌A549细胞具有质量浓度依赖性的抑制活性(P<0.05),其IC50值分别为(48.43±1.33)μg/mL和(34.35±0.88)μg/mL。结论:热处理绞股蓝产物可提高对肺癌A549细胞的抑制作用,其中有效成分为达玛烷类皂苷Gypenoside L和Gypenoside LI。     

绞股蓝皂苷生物转化与活性的研究进展

绞股蓝为葫芦科绞股蓝属植物,含皂苷、黄酮、多糖等多种成分,具有防衰老、降血糖、降血脂、抑制肿 瘤等多种生物活性。绞股蓝皂苷是绞股蓝的主要活性成分之一,因其具有与人参皂苷相同的四环三萜达玛烷型母核 结构而备受关注。近年来,通过生物转化对绞股蓝皂苷上的糖基进行改造以制备活性较高的次生皂苷成为研究热 点,并出现大量相关的研究报道,但鲜有较为系统的文献整理。鉴于此,本文综述了绞股蓝皂苷的结构与类别、绞 股蓝皂苷与人参皂苷的异同、绞股蓝皂苷的生物转化及其生物活性的研究进展,并就绞股蓝皂苷未来的研究方向提 出建议,以期为绞股蓝皂苷的进一步研究提供思路。     

高效液相色谱法测定绞股蓝提取物中的皂苷成分

目的建立绞股蓝提取物皂苷成分的高效液相色谱测定法,并测定市场上绞股蓝提取物皂苷含量。方法比较甲醇、乙醇、水做提取溶剂及超声、回流提取方式下的皂苷得率。色谱柱为Waters Synnetry C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温:35℃;流速1.0 m L/min;检测波长为203 nm。结果以甲醇为溶剂,超声30 min皂苷含量较高。绞股蓝皂苷XLⅨ、绞股蓝皂苷XLⅥ、绞股蓝皂苷A、皂苷XⅦ分别在2.605~130.24μg/mL(r~2=0.9992)、2.205~110.24μg/mL(r~2=0.9995)、1.981~99.04μg/mL(r~2=0.9992)、1.794~89.68μg/m L(r~2=0.9995)范围内线性关系良好,平均回收率分别为98.5%~100.4%、97.3%~101.4%、98.0%~101.1%及99.1%~100.6%。结论本方法灵敏、准确、专属性强,能准确有效地检测绞股蓝提取物中4种皂苷的含量。     

绞股蓝皂苷微丸的制备工艺

研究绞股蓝皂苷微丸的制备工艺。以挤出频率、滚圆频率、滚圆时间为考察因素,以微丸的圆整度为评价指标,利用单因素法研究制备微丸的最优工艺条件。采用挤出滚圆法制备空白微丸;采用流化床法制备绞股蓝皂苷微丸。并对微丸的粉体学性质和体外释放度进行测定;用红外光谱法、X-射线粉末衍射法、扫描电子显微镜法对其进行表征。结果显示,制备微丸的最佳工艺参数为挤出频率30 Hz、滚圆频率50 Hz、滚圆时间4 min。采用流化床底喷上药包衣法制备的绞股蓝皂苷微丸体外释放度为95.98%,符合药典规定;脆碎度为0.90%;圆整度为0.80,表面较为光滑;堆密度较好、大小均匀;休止角为38.70°,流动性较好。电镜、红外、X-衍射等表征结果表明微丸圆整,绞股蓝皂苷分布均匀。利用挤出滚圆-流化床包衣法制备绞股蓝皂苷微丸,该工艺简便易行,可工业化生产。     

超声波强化提取绞股蓝皂苷的工艺研究

为进一步探索超声波技术用于绞股蓝皂苷提取的可行性,分别采用常规水浴法、超声波法提取绞股蓝皂苷,研究不同料液比、提取时间和提取温度对绞股蓝皂苷得率的影响,将40kHz 和28kHz 超声波提取与水提取的结果进行对比,并利用正交试验设计优化了28kHz 超声波提取绞股蓝皂苷的工艺。结果表明：与常规水浴提取相比,40kHz 超声波对绞股蓝皂苷的提取过程无明显强化作用;28kHz 超声波对绞股蓝皂苷提取过程的强化作用明显;28kHz 超声波提取绞股蓝皂苷的最佳提取工艺为：料液比1:30,提取温度70℃,提取时间60min,在此条件下皂苷得率7.5934%,且提取结果重现性好,可信度高。     

绞股蓝皂苷成分的分离与鉴定

目的 提取、分离、鉴定绞股蓝皂苷主要成分。方法 利用硅胶柱色谱及反相半制备柱色谱等分离手段, 分离、纯化绞股蓝皂苷成分, 并用核磁共振波谱(1H-NMR、13C-NMR)、液相色谱离子阱飞行时间质谱(LCMS-IT-TOF)等方法鉴定化合物结构, 并对相关成分的抑癌作用进行了研究。结果 绞股蓝总提物的主要成分经分离得到2种达玛烷类皂苷, 分别为绞股蓝皂苷gypenoside XLVI和gypenoside LVI, 而且它们具有一定的抑制癌细胞增殖作用。结论 利用硅胶柱色谱和反相半制备色谱方法从绞股蓝总提物中分离得到主要的皂苷成分, 为进一步研究其抑癌有效成分提供了参考。     

不同方法提取绞股蓝总皂苷的比较研究

以常规乙醇回流法、酶法及微生物发酵法提取绞股蓝总皂苷,通过总皂苷含量、单体皂苷组分、抗氧化活性三方面对不同提取方法进行比较研究。结果显示,复合酶法提取所得绞股蓝总皂苷含量达7.69%,比常规回流法相对提高了31%,但对皂苷组分转化未见显著效果。微生物发酵提取破壁效果最佳,提取物中绞股蓝总皂苷含量达8.34%,比回流提取法所得含量相对提高了42.1%;经发酵处理后,绞股蓝总皂苷中活性更强的次级苷组分如绞股蓝皂苷V-AH(人参皂苷Rg3)等含量增加,对DPPH·清除的IC50值相比常规法由1.544 mg/m L降至0.562 mg/m L,对Fe~(3+)还原力的V_C当量抗氧化能力AEAC值提高至(236.299±12.785)mg V_C/g固形物,显示出该方法的优越性。     

HPLC法测定绞股蓝中5种皂苷成分的含量

目的:HPLC法比较不同地区绞股蓝中人参皂苷Rb1、Rb3、Rd和绞股蓝皂苷XLIX、XVII的含量。方法:采用Shimpack C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈和水,流速为0.8m L·min-1,检测波长为203nm,柱温为25℃。结果:采自陕西沣峪口的绞股蓝样品中人参皂苷Rb1、Rb3和Rd的含量最高,约为1.625%,1.776%,0.892%;云南普洱样品所含的绞股蓝皂苷XLIX最高,约为1.75%;重庆北碚区-1的样品中XVII的含量最高,约为1.063%。结论:各地区绞股蓝样品中皂苷含量差异很大。     

果胶酶提取绞股蓝皂苷的工艺研究

为进一步研究绞股蓝皂苷的提取工艺条件,利用果胶酶提取绞股蓝皂苷,本文分析了不同酶用量、不同pH值、不同酶解温度、不同酶解时间对绞股蓝皂苷提取得率的影响,并利用正交法优化该提取工艺,然后按此工艺条件进行提取后,采用水浴加热提取和灭酶,在不同的时间条件下,考察了加热后绞股蓝皂苷得率的变化情况。最终确定果胶酶提取绞股蓝皂苷的最佳工艺为：果胶酶用量为0．35％,pH值为4．0,酶解温度为50℃,酶解时间为90min,高温灭酶提取16min。在此工艺条件下皂苷得率达7．9201％,在常规水酶法提取基础上增加了9．4148％,相对标准偏差RSD为0．9764％,提取结果稳定,符合工业化生产要求。     

黔产绞股蓝中总皂苷含量测定方法研究

目的:以黔产绞股蓝为研究对象,筛选出适宜的绞股蓝总皂苷的提取方法以及测定方法,为绞股蓝相关产品的开发研究提供质量控制依据。方法:采用紫外-可见分光光度法,以人参皂苷Re为对照品,于波长546nm处对黔产绞股蓝总皂苷吸光度进行测定。结果:所建立绞股蓝总皂苷含量测定方法有良好的精密度、稳定性、重现性和回收率;不同制样方法测定的黔产绞股蓝总皂苷含量均呈现出遵义(七叶)遵义(五叶)贵阳(五叶)规律,且七叶绞股蓝均明显高于五叶绞股蓝,含量高达7.83%;绞股蓝总皂苷的提取效果呈现出75%乙醇超声提取法甲醇超声提取法正丁醇超声提取法趋势,且提取效果显著。结论:黔产绞股蓝总皂苷的提取效果以75%乙醇超声提取法最佳,所建立的提取工艺可作为绞股蓝总皂苷质量控制的有效方法。     

福建绞股蓝皂苷的优化提取及其抗肝癌活性

绞股蓝素有"南方人参"美誉,含有与人参皂苷相同骨架达玛烷型结构的三萜皂苷。通过不同体积分数乙醇溶液优化提取绞股蓝皂苷,测定其抗癌活性,为后续活性化合物的分离奠定基础。利用HPLC分析绞股蓝的皂苷成分并确定提取绞股蓝皂苷的乙醇体积分数,正交实验优化提取方法,进而MTT法测定提取的绞股蓝皂苷抗肝癌活性。HPLC分析确定用体积分数75%乙醇溶液提取绞股蓝总皂苷(GYP),体积分数45%乙醇提取极性绞股蓝皂苷(GYP1),体积分数90%乙醇提取弱极性绞股蓝皂苷(GYP2);正交实验结果表明在70℃水浴中以30质量的体积分数45%乙醇加热提取12 h为最佳条件提取GYP1,在60℃水浴中以30质量的体积分数90%乙醇加热提取6 h为最佳条件提取GYP2;利用MTT法测定GYP、GYP1和GYP2对肝癌细胞的抑制作用,GYP和GYP2对肝癌细胞SMCC7721具有抗癌活性,半抑制率IC50值分别为(165.83±14.12)μg/mL和(113.97±9.26)μg/mL,GYP1没有抗癌活性,表明绞股蓝抗癌药效成分主要是由弱极性绞股蓝皂苷发挥功效。     

正交法优选绞股蓝皂苷提取工艺及稳定性研究

综合考察和分析了各影响因素在绞股蓝水提取过程中对绞股蓝皂苷提取过程的影响,确定以料液比、提取时间、提取温度为主要考察因素进行单因素试验,并分析各因素对绞股蓝皂苷提取得率的影响.以人参皂苷标准品为对照,利用分光光度法对绞股蓝皂苷进行检测,并对提取液中皂苷纯度进行了分析计算.在单因素试验基础上,确定料液比、提取时间、提取温度为影响因素,各选出3个水平,安排三因素三水平的L9 (33)正交试验,进一步优化了水提取绞股蓝皂苷的提取工艺,并在此提取工艺条件下进行了重复性验证试验,考察了提取工艺的稳定性.最终的试验结果为,水提取的最佳提取工艺为:料液比1∶ 35,温度85℃,时间90min;在此最佳条件下绞股蓝皂苷平均提取得率为7.7943%,提取纯度为26.8522%,各提取得率相对标准差RSD为1.2099%.结果表明,绞股蓝提取率与提取纯度较高,提取工艺稳定,符合工业化生产要求.     

高效液相色谱-蒸发光检测法检测绞股蓝皂苷大孔树脂纯化产物

为建立D101大孔吸附树脂富集、纯化福建绞股蓝中人参皂苷Rb1、Rb3、Re的最佳工艺条件,以人参皂苷Rb1为对照,以总皂苷含量为指标,研究不同绞股蓝提取物上样质量浓度、不同体积分数乙醇溶液洗脱剂对D101大孔树脂吸附和纯化人参皂苷的影响,并以高效液相色谱-蒸发光检测法检测分离产物中的人参皂苷纯度,确定以质量浓度6mg/mL进行上样,50%乙醇溶液洗脱为最佳工艺条件,得到绞股蓝总皂苷纯度最高为92.76%。     

保健啤酒新产品的开发

用食用酒精制成绞股蓝皂苷液，添加量按总皂苷量计，为4～6mg/L。可采用3种方法添加：在麦汁煮沸时与酒花一起加入到麦汁中；加入到清酒中搅匀；加入主发酵结束后的嫩啤酒中，制成绞股蓝保健啤酒。将黄瓜、西红柿、小白菜分另4制成蔬菜汁，可单独添加，也可混合添加制成蔬菜啤酒。(丹妮)     

黄芪皂苷类成分在人源肠道菌群中生物转化特征研究

目的阐释黄芪皂苷类成分(黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷)在人源肠道菌群中的生物转化特征,及共性代谢产物环黄芪醇的生成过程。方法将黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷,分别与人源肠道菌液在厌氧条件下共孵育,通过超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(UPLCQ-TOF/MS)技术检测0,4,8,12,24,48 h代谢产物,并以峰面积标示环黄芪醇生物转化率。结果黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷主要的代谢途径包括脱糖基、脱乙酰基和脱氢;共性代谢产物为环黄芪醇,生物转化率可达50%以上;相较于黄芪皂苷Ⅱ和黄芪甲苷,黄芪皂苷Ⅰ和黄芪皂苷Ⅲ转化速率更快。结论黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ和黄芪甲苷可经人源肠道菌群逐步脱糖,转化成易吸收入血的环黄芪醇,并成为黄芪皂苷类成分在体内发挥药效的重要物质基础;相对于黄芪甲苷,黄芪药材中黄芪皂苷Ⅰ~Ⅲ含量更高,其潜在生物活性值得进一步研究。     

绞股蓝茶总皂苷的纯化及其抗氧化活性研究

研究了绞股蓝茶总皂苷的提取、纯化及其抗氧化活性。采用热水浸提法提取,D101大孔吸附树脂纯化,并通过DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子的清除率对纯化的总皂苷进行抗氧化活性研究。结果表明:粗提取的绞股蓝茶总皂苷含量为3.91%。D101大孔吸附树脂对提取的绞股蓝茶总皂苷进行纯化后,总皂苷的纯度从26.2%提高到了83%。纯化后的绞股蓝茶总皂苷在浓度为4、3、3mg/m L时对DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、超氧阴离子清除率分别可达到92%、82%、73%。说明D101大孔吸附树脂对绞股蓝茶总皂苷有很好的纯化效果,且纯化后的总皂苷有很好的抗氧化活性。     

二次通用旋转设计优化绞股蓝皂苷的提取工艺参数

为获得绞股蓝皂苷提取的最佳工艺参数,采用二次通用旋转设计方法,以料液比、提取温度、提取时间为自变量,绞股蓝皂苷的得率为因变量,对影响绞股蓝总皂苷提取工艺的因素进行了优选.结果表明:3个因子对绞股蓝皂苷得率的影响大小依次为提取温度＞提取时间＞料液比,提取时间、提取温度对提取效果有极显著影响,料液比对提取效果有显著影响,且料液比和提取时间、提取时间和提取温度间交互作用显著.通过软件模拟优化后得到绞股蓝皂苷提取的最佳工艺参数为:料液比35(体积分数)、提取温度81℃、提取时间88min,绞股蓝皂苷的得率为8.12%.二次通用旋转设计优选绞股蓝皂苷的提取工艺,方法简单,预测性良好,对工业生产优化绞股蓝总皂苷的提取工艺提供了可行性依据.     

绞股蓝中总皂苷含量测定方法

建立比色法测定绞股蓝中总皂苷含量的方法。采用75%乙醇热回流提取绞股蓝中总皂苷,通过D101大孔吸附树脂纯化提取液,采用香草醛-高氯酸法比色体系测定绞股蓝中的总皂苷含量。结果表明,人参皂苷Rb1在550nm处有最大吸收,在0.04～0.25 mg有良好的线性范围,相关系数r²=0.999 2,平均加样回收率为102.65%,相对标准偏差(S_RSD)为2.77%(n=6)。采用D-101大孔吸附树脂提取纯化绞股蓝皂苷的方法简单、准确、灵敏度高、重复性好,可用于绞股蓝中总皂苷含量的测定。     

HPLC法测定8个不同产地绞股蓝中4种人参皂苷类成分的含量

高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)法比较不同产地绞股蓝中人参皂苷Rb1、Rb3、Rc、Rd的含量。采用Sun Fire~(TM)-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长203 nm,柱温25℃。结果表明内蒙古产的绞股蓝中人参皂苷Rb1含量最大,江西产的绞股蓝中人参皂苷Rb3含量最大,湖北产的绞股蓝中人参皂苷Rc含量最大,江西产的绞股蓝中人参皂苷Rd含量最大,广东和江西产的绞股蓝中4种人参皂苷在成分和含量上都较为占优势。该方法简便、稳定、可行,不同产地绞股蓝中人参皂苷在成分和含量上存在差异,该结果为今后绞股蓝的开发利用和深入研究提供一定的参考。     

响应面法优化绞股蓝皂苷微波辅助-超声提取工艺

以绞股蓝为原料,采用微波超声双辅助提取皂苷。在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化提取工艺,建立二次多项数学模型。结果表明,绞股蓝皂苷微波超声双辅助提取的最优工艺参数为:微波功率400 W、超声时间60 min、乙醇浓度80%、超声温度为51℃、微波时间117 s、液料比28∶1(m L/g),此条件下绞股蓝皂苷提取率为7.05%,与预测值的相对误差约为0.57%,试验值与预测值相吻合。