长鳍金枪鱼多肽的酶解制备工艺研究

通过酶解法制备具有对H_2O_2诱导的张氏肝细胞保护作用的长鳍金枪鱼多肽。以长鳍金枪鱼下脚料为原料,采用胰蛋白酶进行酶解,以张氏肝细胞的相对增殖率为指标,通过单因素试验和响应面优化试验确定该酶的最佳酶解条件, HE染色观察张氏肝细胞形态变化。结果表明,最佳酶解条件为:料酶解pH 7.28,酶解温度45.29℃,时间5.05 h,所得酶解产物对张氏肝细胞的相对增殖率为53.1%。HE染色显示长鳍金枪鱼多肽对H_2O_2诱导的张氏肝细胞起一定保护作用。该工艺研究为长鳍金枪鱼多肽的分离纯化及开发护肝功能食品提供试验依据。     

β-胡萝卜素对H2O2诱导的斑马鱼肝损伤的保护作用

研究β-胡萝卜素对H2O2诱导的斑马鱼肝损伤的保护作用。选择适宜浓度的H2O2诱导斑马鱼肝脏氧化应激损伤,分别以5、10、20 μg/mL的β-胡萝卜素对其进行保护。给药48 h后检测组织匀浆中谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活力和丙二醛（malondialdelyde,MDA）含量;苏木精-伊红染色观察斑马鱼肝组织病理变化情况;实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测SOD、CAT和GSTP2以及核转录因子Nrf2 mRNA的相对表达量。结果表明：H2O2处理斑马鱼仔鱼48 h后,组织匀浆液中ALT和AST活力升高,SOD活力降低,MDA含量升高;与模型组比较,β-胡萝卜素能够抑制ALT和AST的升高,提高SOD活力,降低MDA含量;病理切片结果显示β-胡萝卜素组能显著改善斑马鱼肝脏组织病理形态;提高Nrf2 mRNA的相对表达量,上调抗氧化酶基因的相对表达量。β-胡萝卜素对H2O2诱导的斑马鱼肝损伤具有保护作用。     

文蛤多肽的制备及对非酒精性脂肪肝细胞模型的修复作用

目的:探讨文蛤酶解多肽的制备工艺及对非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型的修复作用。方法:用质量浓度15μg/m L的软脂酸诱导正常肝Chang liver细胞建立NAFLD模型,以TG含量为指标,筛选酶解文蛤内脏的最佳酶种,通过正交试验、超滤、G-25葡聚糖凝胶层析、高效液相等技术获得酶解产物。将其作用于NAFLD细胞模型,油红O染色后镜下观察形态,检测细胞中的MDA,GSH-ST,ALT,AST,SOD,γ-GT等含量。结果:软脂酸诱导Chang liver细胞48 h后获得NAFLD细胞模型;最佳酶种为碱性蛋白酶,酶解条件为40℃、pH9.5、料液比1∶2、酶解时间12 h,加酶量1 000 U/g;超滤后得到5 ku酶解液,经G-25葡聚糖凝胶层析得到4个峰;峰Ⅰ组分的氨基酸序列为Gln-Leu-Asn-Trp-Asp。该多肽能明显降低NAFLD细胞模型内的TG含量,使MDA,ALT,AST,γ-GT的含量下降,SOD,GSH-ST的含量上升,与未用药的模型组细胞相比有统计学意义。结论 :经碱性蛋白酶酶解文蛤得到的多肽,对NAFLD细胞模型具有明显的修复作用。     

蜂胶对大鼠BRL肝细胞损伤的保护作用

研究中国蜂胶和巴西蜂胶乙醇提取物对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠BRL肝细胞损伤的保护功效。方法:BRL肝细胞经H2O2预孵1 h后,分别经DMEM培养液、中国蜂胶乙醇提取物(EECP)、巴西蜂胶乙醇提取物(EEBP)处理24 h,分别测定细胞存活率、细胞凋亡率以及细胞培养液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)的变化。与H2O2组相比,EECP和EEBP均显著提高H2O2损伤后BRL肝细胞的存活率,抑制细胞的凋亡;降低细胞培养液中ALT和AST水平;提高SOD的活性。尽管中国蜂胶和巴西蜂胶化学组分不同,但中国蜂胶和巴西蜂胶均具有较好的保肝功效,其机制与提高细胞存活率、抑制细胞凋亡以及降低细胞内AST、ALT水平,升高SOD活性有关。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽制备及其对肝细胞损伤的保护作用

目的:研究鳕鱼皮胶原蛋白肽的制备工艺及不同浓度的鳕鱼皮胶原蛋白多肽对经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞的修复作用。方法:以料液比、加酶量、酶解时间和酶解温度为因素,MTT试验所得细胞OD值为指标,通过正交试验探讨鳕鱼皮胶原蛋白肽的最佳酶解工艺,并经超滤、阴离子交换、分子层析对其纯化。通过试剂盒法检测该纯化肽作用Chang Liver细胞后,细胞内抗氧化酶和细胞上清液中转氨酶变化情况;采用Hoechst 33258染色法和Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术观察鳕鱼皮胶原蛋白肽作用损伤Chang Liver细胞后的细胞凋亡情况。结果:最优酶解条件:以胰蛋白酶为水解酶,酶解温度50℃,p H 6,加酶量2 000 U/g,酶解时间8 h,经纯化得到蛋白肽GM2-2-3;GM2-2-3作用经LPS诱导损伤的Chang Liver细胞后,细胞氧化损伤明显减轻,细胞内SOD、CAT、GSH-PX活性上升,MDA的含量下降,并呈剂量依赖性;细胞上清液中AST、ALT、ALP、γ-GT、LDH活性有所下降,且呈剂量依赖性;与损伤组细胞相比,Chang Liver细胞形态较舒展,细胞染色质出现明显的聚集及边集化,细胞核皱缩现象减少,早期凋亡率降低,早期凋亡细胞变少。     

玉米糖肽对酒精诱导损伤LO2细胞的保护效应

构建LO₂细胞酒精性损伤模型,在细胞水平上研究玉米糖肽干预对酒精诱导损伤的LO₂细胞的保护效应,并探讨玉米糖肽拮抗酒精性肝细胞损伤的可能机理。结果表明:与酒精模型组相比,50 μg/mL玉米糖肽的预处理能够增加损伤LO₂细胞中酒精代谢酶(ADH和ALDH)和抗氧化酶(SOD、CAT和GSH-Px)活力以及GSH含量;降低ROS和MDA含量,说明玉米糖肽通过促进酒精代谢和增强抗氧化活力,维持LO₂细胞结构的完整,防止肝内酶(AST、ALT和LDH)的泄露,并降低LO₂细胞早期凋亡和死亡细胞的比例,达到保护酒精诱导损伤的LO₂细胞的效果。     

酶解小黑豆乳清多肽抗肿瘤作用的研究

研究以小黑豆乳清为原料,比较木瓜蛋白酶、537酸性蛋白酶、Prote AX蛋白酶三种蛋白酶水解多肽产物的分子量分布及其对小鼠H22肿瘤细胞生长抑制作用.结果表明,Prote AX酶解多肽的分子量分布明显不同于另外两种多肽,且对小鼠H22肿瘤细胞生长抑制率最高,当Prote AX酶解多肽浓度为40mg/mL时,可达51.36％.用Prote AX酶解多肽喂食用氨基比林-亚硝酸钠(AP-NaNO2)诱导的肝损伤模型小鼠,结果显示,与模型组相比,该多肽可以显著降低肝脏MDA和血清ALT、AST活性(p＜0.05),并提高肝脏GSH-Px活性(p＜0.05).肝脏组织切片结果显示,模型组小鼠大部分肝细胞形态不正常,细胞损伤严重,出现明显的癌前期病变;而小黑豆乳清多肽高剂量组动物的肝细胞形态基本正常,接近正常肝组织;提示Prote AX蛋白酶解多肽可以抑制AP-NaNO2诱导的肝细胞损伤和癌前期病变.     

胶原蛋白多肽铬对四氧嘧啶损伤肝细胞的保护作用

研究了胶原蛋白多肽铬(CPCC)对四氧嘧啶损伤肝细胞HL-7702的保护作用,并探讨其作用机理.方法是将肝细胞HL-7702分为正常对照组、四氧嘧啶组、胶原蛋白多肽铬组及四氧嘧啶 胶原蛋白多肽铬组,分别检测细胞存活率、细胞胞内活性氧(ROS)、胞外超氧阴离子(O2.-)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,并检测胶原蛋白多肽铬在过氧化氢(H2O2)模型组中的作用.结果表明胶原蛋白多肽铬处理使四氧嘧啶损伤肝细胞存活率增加,胞内ROS生成减少,O2.-含量、SOD与GSH-Px低偿性升高及MDA含量降低.结论是胶原蛋白多肽铬处理对四氧嘧啶损伤肝细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能与三价铬抗氧化性能有关.     

辣木叶水提物对H2O2致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

该研究从细胞水平对辣木叶水提物的抗氧化活性进行研究。以过氧化氢（hydrogen peroxide,H2O2）诱导氧化损伤的人体肝癌细胞（Human hepatoma cell,HepG2 cell）为模型,加入不同浓度的辣木叶水提物进行保护干预,利用MTT法测定细胞存活率,同时测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）等抗氧化活性指标,探究辣木叶水提物对H2O2诱导氧化损伤细胞的保护作用。结果表明,辣木叶水提物可明显提高经H2O2诱导损伤的HepG2细胞存活率（p<0.05）,其中高浓度辣木叶水提物（500和600 μg/mL）可使细胞存活率恢复到将近100%。此外,与模型组相比,不同剂量辣木叶水提物可明显提高HepG2细胞的GSH-Px、SOD活性水平（p<0.05）和降低细胞的MDA含量（p<0.05）,其中GSH-Px含量提高了20.77%~151.74%,SOD活力提高了22.24%~139.07%,MDA含量下降了12.51%~34.04%,且其变化程度具有剂量依赖效应。综上所述,辣木叶水提物在细胞水平具有一定的抗氧化活性,研究结果可为辣木叶抗氧化功能产品的开发提供参考依据。     

稻花香活力型白酒对大鼠血清ADH及脂质过氧化的影响

通过观察稻花香活力型白酒(DVL)和普通稻花香白酒(DCL)对大鼠血清中ADH及脂质过氧化的影响,以比较2种酒毒性差异,并探讨稻花香活力型白酒毒性低、对肝细胞损伤较轻的机理.将28只SD大鼠随机分为DVL组、DCL组和正常对照组,采用上述2种白酒进行大剂量灌胃,制备大鼠急性酒精性肝损伤模型,检测各组大鼠血清中ADH活性(生化酶法)、NO含量(硝酸还原酶法)、NOS含量(化学比色法)、MDA含量(TBA法)、SOD活力(黄嘌呤氧化酶法)及肝功能.结果表明,DCL组ADH活性、NO含量、T-NOS及i-NOS含量、MDA含量、AST及ALT值均显著升高,且SOD活力显著降低,而DVL组的i-NOS含量、MDA含量、AST及ALT值均显著低于DCL组,ADH活性及SOD活力略高于DCL组.     

基于Plackett-Burman设计和响应面法优化羊肝抗氧化肽的制备工艺

以羊肝为原料,分别测定5种蛋白酶酶切羊肝所得的酶解液的羟基自由基清除率和肽得率。结果表明,风味蛋白酶羟自由基清除率（84.50%）和肽得率（22.49%）最好。在单因素试验基础上,以羟基自由基清除率为评价指标,采用响应面法优化最佳酶解条件。结果表明,羊肝抗氧化肽制备的最佳酶解条件为料液比1∶3（g∶mL）、加酶量2 400 U/g、酶解温度50 ℃、pH7.50、酶解时间2.8 h。在此优化条件下,测得实际羟自由基清除率为93.70%,与模型理论值相接近。羊肝酶解产物中总氨基酸含量为57.23 g/100 g,其中疏水性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸含量分别为46.47%和41.63%,表明以风味蛋白酶酶解羊肝产物具有较高的抗氧化活性和营养价值。     

小黑豆乳清蛋白和水解多肽对小鼠急性肝损伤的保护作用

目的：研究小黑豆乳清蛋白(SBWP)和水解多肽(SBWPE)对四氯化碳(CCl4)引起的小鼠肝脏损伤的保护作用。方法：分别将SBWP和SBWPE按照6g/(kg·d)和2g/(kg·d)加入到饲料中,饲喂小鼠30d。实验第30天,CCl4经胃给药(5mL/kg)建成急性肝损伤模型;实验结束后,处死动物,检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(AST)和肝脏丙二醛(MDA)、甘油三酯(TG)、谷胱甘肽(GSH)。结果：与模型组相比,SBWP和SBWPE组动物的血清ALT活性和肝脏MDA、TG含量显著降低(P＜0.01),肝中GSH含量显著升高(P＜0.05),其中以SBWPE组效果最明显。结论：SBWP和SBWPE对CCl4引起的小鼠急性肝损伤有保护作用。     

黑豆多肽对超负荷训练小鼠肝细胞损伤影响的研究

为探究黑豆多肽对超负荷运动小鼠肝脏细胞的保护机制,实验以黑豆为原料采用酶解法联合超滤萃取法制取了分子量区间分别为<3、3~5、5~10 kDa的黑豆多肽,以上述黑豆多肽饲喂小鼠并建立超负荷运动模型,以探究不同分子量区间黑豆多肽对运动性肝细胞损伤的保护作用。结果显示:经超负荷训练后模型组小鼠肝功能出现异常,表现为肝指数水平上升,血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性下降,而饲喂黑豆多肽的剂量组肝功能得到了不同程度缓解;实验进一步对肝脏组织T-SOD、GSH-Px酶活测定的数据分析得出,黑豆多肽通过提高抗氧化物酶的活性从而降低机体氧化应激水平,达到抗过氧化损伤的功效并表现为MDA含量显著下降;为明晰黑豆多肽对小鼠肝脏细胞的保护机制,对血清中TNF-α含量以及NF-κB相对表达量进行了测定,其中分子量<3 kDa能够显著降低血清TNF-α的分泌以及NF-κB的相对表达量。结论:黑豆多肽能够有效缓解由超负荷运动导致的肝脏功能异常,并提高抗氧化物酶活性,减弱肝脏氧化应激水平,降低TNF-α的释放以及NF-κB的表达,从而防止由过氧化损伤致使细胞膜裂变而引起的肝细胞损伤。     

福建养殖仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺优化及其对过氧化氢诱导的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用

目的:优化仿刺参抗氧化多肽的酶解工艺,并研究其对过氧化氢(hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926损伤的保护效应。方法:以酶解产物的水解度、体外DPPH自由基清除率为指标,筛选出最适蛋白酶;在单因素实验基础上,选取温度、加酶量、pH作为影响因子,以体外DPPH自由基清除率为响应值,结合响应面试验优化酶解工艺条件;进一步探讨酶解多肽体外抗氧化活性。以MTS法检测低、中、高剂量组的仿刺参抗氧化多肽对H₂O₂诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用,以MDA含量、SOD活力测定细胞氧化及抗氧化水平。结果:动物蛋白水解酶为最适蛋白酶,酶解工艺优化条件为:料液比1:20 g/mL、酶解时间2 h、酶解温度50℃、加酶量7000 U/g、pH7.5,该条件下制备的仿刺参多肽体外DPPH自由基清除率为68.81%,与模型预测值(68.35%),相对误差为1%,回归模型可靠。酶解多肽对DPPH自由基、羟自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O₂-·)和ABTS自由基(ABTS+·)的半数抑制浓度IC₅₀分别是9.01、0.63、10.89和20.53 mg/mL,说明其具有较好的体外抗氧化活性。选取200 μmol/L浓度H₂O₂建立细胞损伤模型,与H₂O₂组相比,中、高剂量组仿刺参抗氧化多肽能明显抑制H₂O₂诱导的血管内皮细胞氧化损伤,降低MDA含量,提高SOD活力。结论:采用动物蛋白水解酶酶解优化工艺制备的仿刺参抗氧化多肽对人脐静脉内皮细胞EA.hy926具有显著的保护作用并呈显著的剂量-效应关系。     

蝉花孢子粉多糖的酶辅助提取及其对酒精性肝损伤小鼠的保护作用

采用响应面法优化纤维素酶辅助提取蝉花孢子粉多糖的工艺参数,并以急性酒精性肝损伤小鼠为模型,评价蝉花孢子粉多糖的保肝作用。小鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组（150 mg/kg水飞蓟宾）和蝉花孢子粉多糖低、中、高剂量组（50、100和200 mg/kg）,各组预防给药20 d,第21 d灌胃50%乙醇（12 mL/kg）,每隔12 h一次,连续3次,测定小鼠血清中谷丙转氨酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性,肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性和丙二醛（MDA）含量。结果表明,酶辅助提取蝉花孢子粉多糖的最佳工艺条件为液料比35 mL/g,纤维素酶用量0.64%、酶解时间80 min、酶解pH6.0、酶解温度50℃,在此条件下蝉花孢子粉多糖得率为7.46%±0.12%（n=3）。蝉花孢子粉多糖能显著（P<0.05）降低酒精性肝损伤小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平,提高小鼠肝脏超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性,降低丙二醛含量（P<0.05）。蝉花孢子粉多糖可通过抗氧化活性发挥其对酒精性肝损伤小鼠的保护作用。     

酶法制备黑豆粕粉多肽的工艺研究

该试验以黑豆粕粉为原料,以蛋白水解度为评价指标,从风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶中筛选水解效果最好的蛋白酶。考察酶解pH、加酶量、酶解温度和酶解时间对黑豆粕粉蛋白质水解度的影响。在单因素试验结果基础上,采用响应面试验对黑豆粕粉多肽的酶解条件进行优化。结果表明,碱性蛋白酶最适合酶解黑豆粕粉多肽,其最佳酶解条件确定为酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶解时间260 min、加酶量4.3%。在此最佳条件下,蛋白水解度为35.23%,较优化前蛋白水解度提高1.93%。     

菊苣醇提物对对乙酰氨基酚诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的研究菊苣醇提物对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的小鼠肝损伤的保护作用。方法将56只昆明小鼠随机分为7组:分别是阴性对照组,APAP模型组,水飞蓟宾阳性对照组,菊苣醇提物单独给药组(200 mg/kg体重),菊苣醇提物低、中和高剂量(50、100和200 mg/kg体重)与APAP联用组。各剂量组小鼠灌胃给予对应药物连续7 d后,一次性腹腔注射APAP(300 mg/kg体重)构建肝损伤模型,24 h后采集肝组织样品和血清。分别测定肝组织和血清的多种氧化指标以及细胞色素P450 2E1酶(CYP2E1)的蛋白表达水平。结果菊苣醇提物能够显著降低血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)水平。降低肝组织中过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)的含量以及提高抗氧化酶系中过氧化氢酶(catalase,CAT)和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)活性;同时,体外抗氧化实验亦表明其具有良好的清除自由基的能力。另外,菊苣醇提物还能够显著抑制CYP2E1的蛋白表达。结论菊苣醇提物有助于维持小鼠体内酶防御系统功能,提高机体清除自由基的能力,并通过减少CYP2E1的蛋白表达对APAP所致小鼠肝损伤具有明显保护作用。     

红岛蛤蜊肉酶解工艺优化及其产物降血压功能研究

以营养价值较高且具地域性特色的红岛蛤蜊为研究对象,以水解度为指标,比较了复合蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶对蛤蜊肉的酶解效果。结果表明,复合蛋白酶的酶解效果优于其他蛋白酶。选用复合蛋白酶,通过酶解温度、pH、料液比、加酶量、酶解时间的单因素实验以及正交试验确定蛤蜊肉酶解的最佳工艺条件为:酶解温度58 ℃、酶解时间6 h、初始pH7.0、料液比1:2（g:g）、加酶量1000 U/g,在此条件下的水解度达71.03% ± 0.69%。通过高效液相测定蛤蜊肽的分子量分布,得出相对分子质量小于1000 Da的占比为94.29%。对蛤蜊肽进行降血压活性研究,结果显现了良好的血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性,其IC₅₀=0.67 mg/mL。本研究结果为红岛蛤蜊的精深加工和利用提供了理论依据。     

水酶法联产核桃油和核桃多肽工艺优化及油脂脂肪酸分析

为提高核桃的综合利用率,优化了水酶法联产核桃油和核桃多肽的工艺条件,并分析了油脂的脂肪酸组成。通过比较4种不同的蛋白酶与纤维素酶复配对核桃提油率和多肽产量的影响,确定最佳酶组合;在此基础上,通过单因素和L₁₈（35）正交试验研究了pH、酶解温度、酶解时间、料液比和加酶量对核桃提油率以及多肽产量的影响,得出最佳工艺条件;利用气相色谱技术分析了核桃油的脂肪酸组成。结果表明,木瓜蛋白酶与纤维素酶复配（2:1,w/w）为最佳酶组合;水酶法制备核桃油和核桃多肽的最佳联产工艺条件为:加酶量3.0%,料液比1:5（g/mL）,pH5,时间3.0 h,温度60 ℃;在此工艺条件下,核桃提油率可达53.37%,多肽产量为4.01 mg/g。气相色谱测定结果表明,核桃油中共检测出5种脂肪酸,分别为亚油酸（62.26%）、油酸（18.64%）、α-亚麻酸（10.57%）、棕榈酸（6.00%）、硬脂酸（2.53%）;核桃油以不饱和脂肪酸为主,其总含量高达91.47%,其中多不饱和脂肪酸含量为72.83%,单不饱和脂肪酸含量为18.64%。该工艺可为水酶法联产核桃油和核桃多肽的产业化应用提供参考。