纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性

目的:优化纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺,并研究决明子粗多糖的体外抗氧化活性。方法:在单因素实验的基础上,以酶解时间、酶解温度、酶用量、液料比及酶解pH为自变量,多糖得率为响应值,利用BoxBehnken响应面法进行工艺优化。以对DPPH自由基和羟自由基清除率的大小为指标考察决明子粗多糖的体外抗氧化活性。结果:纤维素酶法提取决明子粗多糖最佳工艺为酶用量1.4%、酶解时间50 min、液料比24:1 mL/g、酶解pH5.4、酶解温度48℃,此条件下决明子多糖得率为11.67%,与回归模型的理论预测值11.91%误差小于5%。决明子粗多糖对DPPH自由基和羟自由基均具有较强的清除作用,半数抑制浓度分别为1.025 mg/mL和0.894 mg/mL。结论:纤维素酶法可显著提高决明子粗多糖得率,工艺简便可行,获得的决明子粗多糖具有体外抗氧化活性。     

攀枝花黑松露多糖的抗氧化和降血糖活性

多糖作为松露的重要成分之一,具有抗氧化,抗肿瘤和降血糖等多种生物活性。然而,多糖活性与其结构密切相关,但关于攀枝花黑松露中多糖组分的相关结构及其生物活性的研究鲜有报道。该研究采用水提法和Sephadex G-200分离纯化黑松露多糖,并对其结构及体外抗氧化、降血糖活性进行了初步分析。结果表明黑松露多糖的分子质量为1.29×104 u,主要由甘露糖、葡萄糖、鼠李糖和半乳糖组成,其摩尔比为2.89:1.81:0.34:0.50。红外光谱分析表明该组分是含有α-糖苷键的吡喃型多糖。体外抗氧化实验表明,该多糖对DPPH自由基和羟自由基均具有一定的清除作用,但对DPPH自由基表现出更好的清除能力,其IC50值为1.02 mg/mL,同时随多糖质量浓度的增加其抗氧化活性也随之升高。另外,在体外降血糖实验方面,该多糖能显著抑制α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性,其IC50值分别为1.99 mg/mL、3.30 mg/mL。该研究结果可为深度开发黑松露多糖提供理论依据。     

响应面优化酶法提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及抗氧化活性测定

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.5%,此时虎斑乌贼肌肉多糖得率为4.15%,优于水提法和碱提法的多糖得率。体外抗氧化活性研究表明酶法提取的多糖比碱提和水提的多糖具有更好的抗氧化活性,当多糖质量浓度为4 mg/mL时,水提、碱提和酶提虎斑乌贼肌肉多糖对·OH的清除率分别为50.15%、55.14%和89.47%,其IC50值分别为4.51、3.56 mg/mL和0.82 mg/mL;对DPPH自由基的清除率分别为28.89%、31.48%和40.80%,其IC50值分别为16.66、15.43 mg/mL和11.50 mg/mL;对O2-·的清除率分别为75.43%、81.63%和97.00%,其IC50值分别为1.15、0.69 mg/mL和0.29 mg/mL;还原力大小分别为0.134、0.156和0.193。综合分析表明,酶提法得到的多糖得率较高且具有较好的体外抗氧化活性。     

响应面法优化中性蛋白酶提取苦竹花多糖及多糖性质分析

目的:采用响应面法优化中性蛋白酶辅助提取苦竹花多糖的最优条件,并对提取得到的粗多糖进行分离纯化、理化性质及体外抗氧化性测定。方法:在单因素试验基础上,考察提取时间、酶添加量、提取温度对苦竹花粗多糖得率的影响。利用响应面试验建立数学模型,确定最佳提取条件。苦竹花粗多糖经分离纯化,获取2个组分,分别命名为SBH-1和SBH-2,其中以SBH-1为主要组分。通过高效凝胶渗透色谱和红外光谱对SBH-1组分进行单糖组成、分子质量及初步的结构研究。通过与VC对比,研究苦竹花粗多糖SBH-1的体外抗氧化活性,即1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率及抗脂质过氧化能力的测定。结果:在中性蛋白酶添加量0.83%,提取温度46.68℃,提取时间115.95 min条件下,粗多糖得率为7.63%。经检测苦竹花粗多糖SBH-1组分分子质量为18.3 k D,主要由甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)3种单糖组成比例为1.3∶2.3∶1.2。SBH-1对DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除EC_(50)分别为2.03 mg/mL和1.038 mg/mL。结论:采用中性蛋白酶辅助提取得到的苦竹花粗多糖简单易行,纯化得到的中性杂多糖SBH-1具有很好的活性,为进一步研究和开发提供理论基础。     

绿豆多糖制备及抗氧化特性研究

采用响应面法对绿豆仁中多糖碱液提取工艺进行优化,在此基础上进一步开展分离纯化及抗氧化特性研究。结果表明,碱法提取绿豆多糖(Alkali extraction mung bean polysaccharides,AEMP)最佳工艺参数为碱液浓度0.02 mol/L,液料比20∶1 mL/g,提取温度50℃,提取时间3 h,最终AEMP得率9.70 mg GE/g DW。进一步采用DEAE-2纤维柱和SephadexG-100凝胶柱分离纯化绿豆多糖,得到一个中性组分AEMP-1和一个酸性组分AEMP-2。抗氧化特性结果表明AEMP及其纯化组分对羟自由基和DPPH自由基均有良好清除效果,AEMP-2抗氧化活性最强,对羟自由基和DPPH自由基半数抑制浓度IC50值分别为4.71 mg/mL和1.03×10-1mg/mL。表明绿豆多糖具有良好的抗氧化特性。     

硫酸化修饰对小球藻胞内多糖抗氧化及抗肿瘤活性的影响

为探究小球藻多糖硫酸化修饰对生物活性影响,本研究采用小球藻(Chlorella sp.22)为实验材料,提取胞内多糖经DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化得到纯化多糖HDB-1,对纯化多糖HDB-1进行硫酸化修饰得SHDB-1,对硫酸化修饰前后多糖进行抗氧化活性和抗肿瘤活性研究。结果表明,纯化组分HDB-1以α-呋喃糖为主。用三氧化硫-吡啶法对HDB-1进行硫酸化修饰得到SHDB-1,其取代度为1.046。抗氧化活性结果表明,HDB-1与SHDB-1的DPPH自由基清除率IC₅₀(半抑制浓度)值分别为29.28 mg/mL和14.49 mg/mL,羟自由基清除率IC₅₀值分别为36.75 mg/mL和28.59 mg/mL,可知SHDB-1抗氧化效果优于HDB-1。抗肿瘤结果表明,HDB-1及SHDB-1在1 mg/mL浓度下对细胞无毒性,HDB-1与SHDB-1的IC₅₀值分别为960.16μg/mL及658.19μg/mL,可知SHDB-1抑制宫颈癌细胞Hela增殖效果优于HDB-1。以上结果表明,硫酸化修饰的小...     

鸡骨草多糖的酶法提取工艺优化及其抗氧化活性

目的:研究纤维素酶提取鸡骨草有效成分多糖的最佳条件,并探讨其体外抗氧化活性。方法:以鸡骨草多糖得率为响应值,在单因素实验基础上,以液料比、酶解时间、酶添加量、酶解温度为自变量,采用响应面法建立数学模型,筛选最佳提取工艺条件,并采用DPPH·和·OH清除能力体系评价鸡骨草多糖体外抗氧化活性。结果:最佳提取条件为:液料比13:1 mL/g,纤维素酶酶解时间60 min,酶添加量12.8 mg/mL,酶解温度50 ℃,pH5.0,在此条件下鸡骨草多糖得率为8.15%,与理论值8.34%相对误差小于5%。酶添加量对多糖得率影响最大,液料比、酶解时间次之,酶解温度影响最小。鸡骨草多糖对DPPH·和·OH清除的半数抑制浓度IC₅₀分别为1.591、1.926 mg/mL,与维生素C比较,抗氧化活性较弱。结论:鸡骨草多糖纤维素酶酶法提取工艺方便可行,酶解得到的多糖具有较强的体外抗氧化活性。     

不同提取方法猴头菇粗多糖的表征及其抗氧化活性的比较

为探究不同提取方法对猴头菇粗多糖提取效果及抗氧化活性的影响。以猴头菇子实体为原料,通过热水、超声、碱液提取法分别提取猴头菇多糖,得到猴头菇粗多糖提取物:W-He P、U-HeP和A-HeP;研究和比较了不同提取工艺对多糖得率、理化性质和抗氧化活性的影响。结果表明:粗多糖得率依次为A-HeP(4.66%)U-HeP(3.92%)W-HeP(3.29%)。红外光谱分析表明3种粗多糖均呈现出典型的吡喃型葡聚糖和β-型糖苷键吸收;紫外光谱分析表明3种粗多糖组分中均含有蛋白质,而β-消除反应表明3种粗多糖组分中均存在O-糖肽键,说明3种粗多糖中的蛋白质为含有糖链和蛋白质残留的糖蛋白。对3种粗多糖组分的还原力和DPPH·、·OH、ABTS~+·清除效果分析表明3种粗多糖均具有一定的抗氧化能力,其中A-HeP对DPPH·、·OH和ABTS~+·均有较好的清除效果,其清除率分别可达到72%(5 mg/mL)、75%(5 mg/mL)和85%(0.5 mg/mL)左右。由此可见,碱液提取效果较好,碱提猴头菇粗多糖A-HeP具有较好的清除自由基能力,可作为天然抗氧化剂开发利用。     

不同提取方法对米邦塔仙人掌粗多糖体外抗氧化性的影响

目的:研究不同提取方法对米邦塔仙人掌粗多糖体外抗氧化活性的影响。方法:采用热水提法、酶法和超声波法分别提取米邦塔仙人掌粗多糖,苯酚-硫酸法测定粗多糖纯度,以抗肝组织自发性脂质过氧化能力、清除羟基自由基能力、清除超氧阴离子能力、清除1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基能力、总还原能力、总抗氧化能力6种方法作为体外抗氧化能力评价指标。结果:酶法提取的粗多糖得率最高,为10.14%;超声波法提取的粗多糖纯度最高,为47.62%;酶法和超声波法提取的粗多糖各项体外抗氧化指标的活性均高于热水提法。结论:米邦塔仙人掌粗多糖的体外抗氧化活性强弱与粗多糖的提取方法有关,酶法和超声波法提取的粗多糖具有较好的抗氧化活性。     

化橘红多糖的提取纯化及抗氧化活性研究

对化橘红粗多糖及其纯化组分的抗氧化活性进行研究。化橘红粉末经热水提取、乙醇沉淀、sevage法脱蛋白、透析得到粗多糖,粗多糖经DEAE-52纤维素阴离子交换层析柱分离,得到2个纯化组份ECP1和ECP2。采用化学法分别测定了粗多糖及其纯化组分的体外清除自由基(DPPH.,.OH,ABTS.+)能力、还原能力。粗多糖的多糖含量为74.29%,经DEAE-52纯化的组分ECP1和ECP2的多糖含量分别为83.39%和85.77%。结果表明粗多糖及其两个纯化组分均具有较好的抗氧化清除自由基的能力,并且抗氧化能力与多糖浓度之间存在良好的相关性。其中ECP2的抗氧化清除自由基能力强于ECP和ECP1,但是低于对照VC。     

响应面法优化松茸多糖酶法提取工艺及其体外抗氧化性分析

为确定复合酶（纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶）提取松茸多糖的最佳工艺,并对其体外抗氧化活性进行初步研究,在单因素试验的基础上,以料液比、pH值、酶解时间和酶解温度为影响因素,利用Box-Behnken方法进行四因素三水平试验设计,以多糖提取率为响应值,进行响应面分析;分别用邻苯三酚自氧化法和对DPPH自由基的清除作用测定松茸多糖的体外抗氧化性。结果表明：多糖提取的最佳工艺为料液比1∶40（g/mL）、pH 5、酶解温度35 ℃、酶解时间71 min,松茸多糖的提取率预测值为7.06%,验证值为6.95%,与预测值相对误差为1.56%;松茸多糖对超氧阴离子自由基和DPPH自由基具有较强的清除作用,其IC50值分别为0.565 mg/mL和0.454 mg/mL。因此,复合酶法提取松茸多糖高效、简单,可用作松茸多糖的提取工艺;松茸多糖具有明显的体外抗氧化活性。     

笋壳多糖的微波-超声波联合辅助提取工艺优化及其抗氧化活性

目的：通过微波-超声波联合辅助提取法优化笋壳多糖提取工艺,并研究其抗氧化活性。方法：考察提取时间、料液比、微波功率、超声波功率、提取次数对笋壳多糖含量的影响,在单因素试验基础上做L9（34）正交试验优化提取工艺参数,通过测定笋壳多糖清除羟自由基、超氧阴离子自由基、1,1-二苯基-2-苦基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的能力来评价其抗氧化活性,并同传统热水浸提法进行比较。结果：微波-超声波联合辅助提取最优工艺条件为提取时间30 min、料液比1∶30（g/mL）、微波功率200 W、超声波功率750 W,笋壳多糖得率为2.76%,粗多糖中多糖含量为37.63%;清除羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的半抑制浓度分别为0.17、0.43 mg/mL和大于16 mg/mL。微波-超声波联合辅助提取法的各项指标均优于热水浸提法。结论：微波-超声波联合辅助提取笋壳多糖比传统热水浸提具有耗时短、效率高等优点,笋壳水溶性多糖具有显著体外抗氧化活性。     

超声波-生物酶法提取锁阳多糖工艺优化及其抗肿瘤活性

为了获得较高的锁阳多糖得率,以河西锁阳为原料,采用超声波协同生物酶技术进行锁阳多糖提取工艺及活性的研究,选用单因素试验探索料液比、超声时间、超声功率及纤维素酶加酶量、酶解时间、酶解温度、pH值对锁阳多糖得率的影响,在单因素试验的基础上,采用正交试验对工艺条件进行优化,并采用四甲基噻唑蓝（methlthiazoletrazolium,MTT）法评价锁阳多糖对HeLa细胞的抗肿瘤活性。结果表明,锁阳多糖超声波-纤维素酶法提取最佳工艺为：料液比1∶10（g/mL）、超声功率300 W、酶解温度60 ℃、超声时间10 min、加酶量1.8%、酶解时间90 min、pH 5.5。最优条件下锁阳多糖得率达3.01%。MTT实验结果表明,提取多糖对HeLa细胞具有明显的抗肿瘤活性。     

海英菜多糖提取工艺的响应面法优化及其体外抗氧化作用

以单因素试验为基础,选择提取温度、提取时间、液料比三因素三水平进行Box-Behnken组合试验,对野生海英菜粗多糖提取工艺参数进行优化分析。结果表明海英菜粗多糖水浸提的最佳工艺条件为提取温度87℃、提取时间3.5h、液料比31.5:1(mL/g),在此条件下海英菜粗多糖得率达到2.028%。以VC和叔丁基对苯二酚为对照,测定脱蛋白海英菜多糖的体外抗氧化作用,结果表明海英菜多糖的还原能力、对超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力均表现出较好的效果,清除超氧阴离子自由基和羟自由基的IC50分别为0.841mg/mL和0.712mg/mL,其抗氧化能力低于VC,与叔丁基对苯二酚相近。     

拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺优化及体外清除自由基能力

以加酶量、酶解温度、pH值、酶解时间为影响因素,以蛋白脱除率和多糖损失率为评价指标,通过正交试验优化拟目乌贼肌肉多糖酶法脱蛋白工艺,并与三氯乙酸法、等电点法脱蛋白效果进行比较。同时对脱蛋白多糖的体外清除自由基能力进行研究。结果表明,拟目乌贼肌肉多糖脱蛋白最佳工艺条件为:加酶量3.0 g/100 m L、酶解温度53℃、p H 8.2、酶解时间1.5 h。此条件下蛋白脱除率为89.43%,多糖损失率为1.78%,优于三氯乙酸法和等电点法。清除自由基结果显示,多糖质量浓度为10 mg/m L时,酶法、三氯乙酸法和等电点法得到的脱蛋白多糖对羟自由基清除率分别为45.72%、38.72%和25.18%,相应的IC_(50)值分别为12.44、16.37、34.64 mg/m L;对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基的清除率分别为68.00%、30.08%和23.10%,相应的IC50值分别为7.62、16.71、28.96 mg/m L。3种脱蛋白方法所得拟目乌贼肌肉多糖清除自由基效果依次为:酶法三氯乙酸法等电点法。     

总状蕨藻多糖体外抗肿瘤作用

以总状蕨藻为原料,采用热水与蛋白酶酶解相结合浸提得到总状蕨藻多糖提取液,经Sevag法和透析法等步骤纯化后得到总状蕨藻粗多糖（Caulerpa racemosa polysaccharide,CRP）。紫外扫描结果表明CRP中含有少量蛋白质。红外光谱分析CRP有一般糖类物质的特征吸收峰,含硫酸基团,是一种酸性多糖。采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）法研究了CRP对HeLa、K562、CNE-2z细胞的抑制作用,结果表明CRP对3 种肿瘤细胞都有一定的抑制作用,在24～72 h内,随着时间的延长,抑制率逐渐增强,在0.062 5～4 mg/mL质量浓度范围内,随着质量浓度的增加,抑制率逐渐增强,对HeLa、K562和CNE-2z细胞的抑制率最大分别达到61.7%、85.9%和90.3%。     

不同干燥方式对银耳多糖理化特性及抗氧化活性的影响

研究传统热风干燥、冷冻干燥和抽真空干燥等不同干燥方式对银耳多糖（Tremel la fuci formispolysaccharides,TFPs）的理化特性和体外还原力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、羟自由基（hydroxyl free radical,•OH）和超氧阴离子自由基（superoxide free radicals,O2－•）的影响。结果表明：3 种干燥方式对TFPs均有显著影响,其中冷冻干燥处理多糖（freezing drying Tremella fuciformispolysaccharides,TFPs-F）的得率、总糖和黏度最高;3 种干燥方式对粗多糖相对分子质量分布和和抗氧化活性有一定影响;TFPs-F的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的半抑制浓度（half-inhibitory concentration,IC50）分别为2.61、1.64、1.78、1.75 mg/mL;传统热风干燥和抽真空干燥处理多糖的还原力、清除DPPH自由基、•OH和O2－•的IC50高于低温冷冻干燥处理多糖相应的IC50。结果说明,冷冻干燥处理是获得高品质和高活性银耳多糖的较好方法。     

单环刺螠体壁多糖的分离纯化、理化性质及抗脂质过氧化活性

为研究和开发单环刺螠中活性多糖成分,采用酶法提取和色谱分离技术,从单环刺螠的体壁中提取分离多糖组分,采用化学和仪器分析方法对其单糖组成、分子质量等理化性质进行研究,并通过体外清除脂质过氧化物实验对其进行初步的活性评价。结果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶两步酶解后,单环刺螠多糖（unicinctus polysaccharide,UP）得率为5.3%。通过离子交换柱层析分离纯化后主要得到两个组分UP-1和UP-2。UP-1是主要由葡萄糖（Glc）组成的高聚葡聚糖,分子质量340 kD,而UP-2为组成复杂的类糖胺聚糖,分子质量约为7.9 kD,主要含有葡萄糖（Glc）、半乳糖（Gal）、氨基葡萄糖（GlcN）和岩藻糖（Fuc）,还含有少量的甘露糖（Man）和氨基半乳糖（GalN）。其单糖组成Man、GlcN、GalN、Glc、Gal、Fuc物质的量比例为1.0∶1.47∶0.64∶6.49∶2.5∶3.0。和其他海洋动物来源类糖胺聚糖类似,UP-2还含有少量的硫酸基,含量为7.4%。对UP-1和UP-2进行初步体外抗氧化活性研究表明,类糖胺聚糖UP-2具有显著的脂质过氧化物清除活性,半数清除质量浓度为5.0 mg/mL。     

平菇粗多糖的提取及活性研究

目的比较不同提取平菇粗多糖方法的优劣并对其粗多糖抑菌特性进行检测。方法采取水提法、超声波法、微波法、纤维素酶法提取平菇粗多糖,利用细菌(大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌)和真菌(毛霉、根霉、青霉、曲霉)作为试验菌株,采用打孔法,对不同提取方法提取的平菇粗多糖的抑菌特性进行研究。结果纤维素酶法提取的平菇粗多糖的多糖含量为57.50%、多糖得率为1.538%,均明显优于其他3种方法。在抑菌试验中,平菇粗多糖浓度为100 mg/m L时,水提法、超声波法、纤维素酶法提取的平菇粗多糖对毛霉的生长具有抑制作用。结论纤维素酶法提取平菇粗多糖效果较好,不同方法提取的平菇粗多糖在高浓度时均对毛霉有微弱抑制作用。