凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺优化及分离纯化

优化凡纳滨对虾肌肉中组织蛋白酶L提取工艺,分离纯化组织蛋白酶L并验证其对肌原纤维蛋白的降解作用。以凡纳滨对虾肌肉为原料,采用单因素试验、Plackett-Burman试验和双因素等重复试验对肌肉中组织蛋白酶L的提取工艺进行了优化。采用Tris-HCl缓冲液浸提、硫酸铵沉淀、Q-Seharose F.F阴离子交换层析、Sephacryl S-100凝胶过滤层析和SDS-PAGA等方法对组织蛋白酶L粗酶液进行分离纯化,并验证提纯后的组织蛋白酶L对肌原纤维蛋白的降解作用。最终确定对虾肌肉中组织蛋白酶L最佳提取工艺为:缓冲液体系(Tris-HCl缓冲液浓度40 mmol/L,半胱氨酸浓度6 mmol/L,苯甲基磺酰氟浓度0.4 mmol/L),料液比1∶8(g∶mL),pH 6.0。优化后组织蛋白酶L总酶活力值升至378.36 U,酶活力得率达到150.1 U/g,纯化后的组织蛋白酶L的比活力从0.34 U/mg提高到了101.15 U/mg,纯化倍数达到298.28倍,得率为16.50%,分子质量为46.4 kDa,并进一步验证了提纯后的组织蛋白酶L对肌球蛋白重链和肌动蛋白有降解作用。发现对...     

莫氏马尾藻(Sargassum mcclurei)褐藻多酚的抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用

目的:研究莫氏马尾藻(S.mcclurei)褐藻多酚(PTs)的抗氧化活性和抗肿瘤细胞增殖作用。方法:溶剂萃取和超滤的方法进行PTs的提取和精制;Folin-Ciocalteu比色法和磷钼络合物法检测PTs的含量和总抗氧化能力;DPPH自由基和超氧阴离子自由基法检测PTs的自由基清除能力;MTT法检测PTs对sw579甲状腺鳞癌细胞生长抑制作用。结果:获得4种PTs提取物,分别为水层内液(W1)和乙酸乙酯内液(EA1)(分子质量>10kD)、水层外液(W2)和乙酸乙酯外液(EA2)(分子质量<10kD),总酚含量分别为1.672、0.096、1.319、0.143mg没食子酸(GA)/g海藻干基;在相同质量浓度(3mg/L)时,W1的总抗氧化能力最强,相当于2.315mg/L的GA;4种PTs提取物均有清除自由基的作用,W1和EA1的清除作用更强;随着作用时间延长,4种PTs提取物在低质量浓度(4.4mg/L)时对sw579甲状腺鳞癌细胞生长的抑制作用不断增加,其中W2的作用最强,作用72h的抑制率为23.84%。结论:莫氏马尾藻具有显著的抗氧化作用和一定的细胞毒活性,具有潜在的开发应用价值。     

刺松藻化学成分测定及其营养评价

对刺松藻的常规营养成分、不溶性膳食纤维、氨基酸、脂肪酸及矿质元素进行了分析测定。结果显示：刺松藻的主要成分是碳水化合物，占66．86％，其中不溶性膳食纤维占43.04％；蛋白质含量较高，占21．67％，必需氨基酸占总氨基酸百分比为42．2％，限制氨基酸为蛋氨酸和胱氨酸，氨基酸评分86；脂肪含量低，占3．47％，其中不饱和脂肪酸占47．46％；矿物元素含量丰富，尤其是微量元素Cu，Fe，Zn含量高。结论：长刺松藻是一种高膳食纤维、高蛋白、低脂肪、低热量，且富含铁、锌等微量矿质元素的天然理想保健食品原料。     

全缘马尾藻褐藻多酚的抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用研究

检测全缘马尾藻褐藻多酚提取物(IPTs)的抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用。通过萃取和超滤获得4种IPTs提取物-IPTa1、IPTa2、IPTe1和IPTe2,总酚含量分别为1.16、0.6、0.25和0.34 mg没食子酸（GA）/g海藻干基,1.5 mg/L时的总抗氧化能力（TCA）分别相当于1.724、1.379、1.833、0.695 mg/L的Fe2+还原能力;MTT结果显示,4.4 μg/mL时,4种IPTs提取物作用sw579细胞24 h、48 h、72 h后,除了IPTa2外,IPTa1、IPTe1和IPTe2均以时间依赖方式显著抑制肿瘤细胞的生长;0.3125~5 μg/mL浓度范围内,IPTa1和IPTe1的抑制率与作用时间和浓度呈正相关,最高抑制率达90%以上。     

酶解猪血制备水解蛋白和血红素的工艺研究

目的:优化猪血中水解蛋白提取工艺,同时辅助提取血红素;方法:以水解度作为主考察指标,以血红素得率为辅助指标,在单因素实验基础上,通过L9(3)4正交实验研究了胰蛋白酶酶解猪血提取水解蛋白和血红素的工艺条件。结果:最佳工艺参数为温度50℃,pH7.5,料液比1:55,胰蛋白酶用量11173U/g,酶解时间4h,在此工艺条件下,水解蛋白得率为40.1%,血红素粗品得率为16.2%。结论:研究结果对猪血资源的综合开发利用具有一定的指导意义。     

响应面法优化近江牡蛎肉酶解工艺参数

采用响应面法确定复合蛋白酶酶解近江牡蛎肉的最佳条件,以温度、时间、加酶量,固液比及pH 5个单因素时水解的影响结果为依据,采用二次回归正交旋转组合设计研究了酶解温度、酶解时间和加酶量3个因素时近江牡蛎肉水解过程中游离氨基氮生成量的影响.结果显示:加酶量为每克贝肉添加997U复合蛋白酶,固液比1:1(g/mL),温度53℃,酶解时间5.7h,pH7.0,在此条件下,游离氨基氮生成量为6.49mg/g肉(此时总氮回收率为83.62%),与模型的预测值接近.     

土贝母苷甲诱导HeLa 细胞周期阻滞和凋亡

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)抗肿瘤作用的机制, 探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:采用MTT 法检测苷甲对细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术, 光学、荧光和电子显微镜, 以及DNA 琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl-2 和bax 表达的变化。结果:苷甲对HeLa 细胞的生长有强抑制作用, 其24、48 和72 h 的IC₅₀ 值分别为35.7, 23.6, 17.4 μmol·L^-1 。在苷甲的作用下, 细胞周期阻滞在G₂/M 期, 细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl-2 下调, bax 过表达。结论:苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用, 而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl-2 的下调及bax 的过表达密切相关。     

长松藻化学成分及其营养评价

分析结果显示,碳水化合物和蛋白质是长松藻的主要成分,两者共占藻体干重的92.0%,其中不溶性膳食纤维占藻体干重的41.5%,蛋白质占19.7%,必需氨基酸丰富,占氨基酸总量的43.5%,氨基酸评分88,限制氨基酸为蛋氨酸和胱氨酸;脂肪含量为4.79%,不饱脂肪酸含量高,占脂肪酸的47.9%;矿质元素含量丰富,尤其是铁和锌含量高。因此,长松藻是一种高膳食纤维、高蛋白、低脂肪、低热量,且富含铁、锌等微量矿质元素的天然理想保健食品原料。     

总状蕨藻Caulerpa racemosa多糖抗肿瘤和免疫增强活性

以荷S180实体瘤的昆明小鼠为模型,研究了总状蕨藻粗多糖(CRP)的抗瘤作用及其对免疫器官等的影响,采用细胞培养法研究了CRP及其两个主要级分(CRPF1和CRPF2)对正常小鼠免疫细胞功能的影响。实验结果显示:总状蕨藻粗多糖对S180实体瘤具有显著的抑制作用,其抑瘤率和免疫活性与给药方式、剂量等因素有关,在注射和灌胃给药条件下,当CRP剂量分别为25mg/(kg.d)和100mg/(kg.d)时,其抑瘤率达到最大值,分别为46.2%和58.2%,且在注射给药时能显著地增加小鼠的脾脏指数。在50~200mg/(kg.d)范围内,灌胃给药时能升高小鼠碳廓清指数;细胞培养结果显示:CRP能提高正常小鼠的免疫功能,不过,其对静止淋巴细胞增殖的促进作用和对小鼠腹腔巨噬细胞MФ分泌NO的促进作用均小于CRPF1和CRPF2。以上事实表明,总状蕨藻多糖具有较强的抗肿瘤和增强小鼠免疫力的作用。     

近江牡蛎肉水解物的营养成分及抗疲劳作用研究

实验是在研究近江牡蛎(Ostrea rivularis)肉水解最佳条件的基础上,对水解物的营养成分进行了分析,并以小白鼠为实验对象,研究水解物的抗疲劳效果。结果表明,水解物中粗蛋白质含量达到70.27%,糖原含量为15.32%,氨基酸组成完善,并发现含有大量的牛磺酸、矿物质锌等多种具有抗疲劳作用的营养成分;动物实验证明近江牡蛎肉水解物有较好的抗疲劳效果。