利用生物技术获取有机钙的研究

本文研究了利用中性蛋白酶、胰酶、酸性蛋白酶极其构成的复合酶水解畜禽骨骼获取钙的方法，并检测钙的转化率。结果表明不同酶类，加酶量，加水比、ｐＨ值、温度、酶解时间及不同种类骨骼等因素对钙转化率都有较大的影响。其中利用各１％的胰酶＋中性蛋白酶、加水比１：３、ｐＨ８．５、温度５０℃、水解时间９小时，牛骨与鸡骨中钙的转化率最高。     

罗非鱼骨粉可溶性钙提取工艺的探索

罗非鱼骨经过脱脂、粉碎、酶解和干燥制成脱脂骨粉。在酶底比为3‰,PH值为4.0,酶解时间为10h是获得高骨钙转化率的最佳工艺。     

酶解罗非鱼鱼骨粉制备可溶性钙的工艺研究

采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶酶解罗非鱼鱼骨粉,以酶解液中可溶性钙含量、水解度和氮收率为特征性指标,利用L16（54）正交实验设计优化水解鱼骨粉的工艺条件。结果表明：采用胃蛋白酶水解鱼骨粉,效果优于其它三种酶;胃蛋白酶水解鱼骨粉的最佳条件是：pH2.0、料液比1∶3、酶用量0.3%、时间5h、温度37℃;所得酶解液中钙含量为23.68g/L,水解度和氮收率分别达14.07%和56.35%,可溶性氮含量达97.43%,Fe、Zn、Mg、P的含量分别为0.36、3.84、716.67mg/L和10.89g/L。     

两种乳杆菌协同发酵牛骨粉促钙转化的工艺研究

以牛骨为钙源,利用嗜酸乳杆菌与鼠李糖乳杆菌的共生作用发酵牛骨粉,提高骨钙转化率。采用单因素试验确定两种益生菌协同发酵牛骨粉的最适比例、发酵时间、骨粉浓度、葡萄糖添加量。采用响应面试验设计,以钙转化率为特征性指标,优化两种益生菌协同发酵牛骨粉的工艺条件。结果表明：两种益生菌具有共生作用,均能将牛骨粉中结合态的钙转变为游离态。发酵时间与骨粉浓度是影响钙转化率的主要因素。两种益生菌协同发酵牛骨粉的最适发酵条件为菌种比例4.67:1(m/m)、发酵时间69.96h、骨粉浓度4.45%、葡萄糖添加量12.26%,钙转化率达32.21%。     

酶法水解猪血蛋白的研究

采用酶法开发了营养价值高而价格低廉的蛋白质资源－猪血。ＡＳ１．３９８中性蛋白酶对动物血的水解能力最强,胰蛋白酶次之,而木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶的水角能力最差。ＡＳ１．３９８中性蛋白酶水解猪血的最佳条件为,ｐＨ为７．５,温度为４０℃,酶与底物之比为８０００Ｕ／ｇ底物浓度的质量分数为８％,酶水解７ｈ,水解率可达４８．９％。     

天然促生长因子促进益生菌发酵牛骨粉钙转化的工艺优化

利用益生菌发酵牛骨粉,添加8 种天然益生菌促生长因子协同发酵牛骨粉。通过单因素试验,筛选益生菌促生长因子。采用L9(34)正交试验设计,以游离钙转化率为特征性指标,优化几种天然促生长因子的最佳组合。单因素试验结果表明：玉米汁、番茄汁、豆芽汁、白菜汁、胡萝卜汁、牛奶均对益生菌有促生长作用,除玉米汁外,发酵终止时的pH 值越低、活菌数越大,钙转化率越高。白菜汁、番茄汁、豆芽汁、牛奶最适添加量均为15%,胡萝卜汁为20%,玉米汁为5%。马铃薯汁对鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌及两者协同发酵时均有抑制作用。正交试验结果表明：番茄汁、豆芽汁、白菜汁、胡萝卜汁4 种促生长因子协同发酵牛骨粉钙转化率的最优组合为：白菜汁18.0%、豆芽汁15.0%、番茄汁12.0%、胡萝卜汁20.0%,在该条件下钙转化率可达38.8%。     

不同种类低值鱼酶解效果的比较及优化

本文对比了不同海洋低值鱼的蛋白质含量和酶解效果,并对青鳞鱼和斑鲦的酶解方案进行优化。结果表明：蓝园鳕和青鳞鱼的蛋白质含量较高,为17％以上;斑鲦、黄鲫、刺鲳、鲻鱼、鳓鱼的蛋白质含量为15～16％。但蓝园鳕、黄鲫、刺鲳、鲻鱼的酶解效果较好,青鳞鱼、斑鲦和鳓鱼的酶解效果较差。青鳞鱼的最佳酶解方案为：木瓜蛋白酶0．05％,风味蛋白酶0．1％,水解蛋白酶0．05％,胰蛋白酶0．15％,可提高蛋白质利用率为86．07％,氨基酸转化率为49．24％,酶解清液出品量为11．30mL。斑绦的最佳酶解方案为：木瓜蛋白酶0．15％,风味蛋白酶0．1％,水解蛋白酶0．05％,胰蛋白酶0．15％,可提高蛋白质利用率为83．22％,氨基酸转化率为49．14％,酶解清液出品量为10．91mL。     

羊骨胶原钙螯合肽酶解工艺的研究

本试验采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶四种蛋白酶酶解羊骨胶原蛋白,以酶解液中游离钙含量为试验指标,采用正交实验以及极差分析法确定了酶解羊骨蛋白获得胶原钙螯合肽的最佳用酶和酶解工艺条件。试验结果表明:胃蛋白酶为最佳用酶,最佳酶解工艺条件为:酶解时间6h,底物浓度为0.2kg/L,酶用量为1900U/g,酶解温度37℃,最适pH值3.0。酸性条件有利于钙的溶出。     

0—2周龄肉用仔鸡钙,锰,锌维生素D3需要的研究

选用４３２羽１日龄ＡＡ肉用公雏，随机分成３６组，每组１２羽，采用五因素部分实施的二次回归几乎正交旋转组合设计估测０－２周龄肉用仔鸡钙，磷，锰，锌及维生素Ｄ３的适宜需要量，并建立估测其生产性能地回归方程，结果表明，日粮中适宜的钙，磷（非植酸磷）浓度为：１．００％，０．５０％，钙磷的适宜比例为１．８－２．２，锰，锌，维生素Ｄ３的浓度分别为：８０－８９ｐｐｍ，１０６－１２５ｐｐｍ，１５１５－１２５０ＩＵ     

生活物性肽——酷蛋白磷酸肽（CPP）的研制

摸索了２７０９碱性蛋白酶水解酷蛋白制备ＣＰＰ的最佳工艺条件：底物浓度１０％、用酶量１５００Ｕ／ｇ底物、反应温度４５℃、ｐＨ１０．５、反应时间１５０ｍｉｎ。采用选择淀淀法分离ＣＰＰ,在ｐＨ４．５添加１．１％ＣａＣｌ２（ｗ／ｖ）和５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品５０％（ｖ／ｖ）乙醇,室温沉淀４ｈ,得到ＣＰＰ产品的Ｎ／Ｐ、得率分别为６．３９和１３．９４％。     

发酵豆粕分泌蛋白酶的兼性厌氧型菌株筛选与鉴定

在厌氧条件下筛选固态发酵豆粕的生产菌株。以透明圈法分别对中外发酵豆粕、霉豆腐、酱油发酵原液等进行厌氧条件下高产大豆蛋白酶生产菌株进行筛选。利用初筛得到的单菌在厌氧条件下发酵豆粕,以小肽含量和蛋白酶酶活力为指标进行复筛,得到优势菌株NCU646。结果表明：厌氧条件下NCU646菌株在豆粕固态发酵培养基中产蛋白酶活力高达9600U/g,发酵后豆粕中小肽含量提高10倍以上,豆粕中粗蛋白含量增加了近10.0%。经过生理生化鉴定和16S rRNA基因序列分析鉴定,该菌株为兼性厌氧型的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。     

响应面试验优化牛骨汤酶解工艺及其钙含量分析

试验研究牛骨汤的最佳酶解工艺并对其游离钙含量进行分析。以牛骨汤为原料,以水解度为指标,从木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶中筛选最佳酶制剂,通过单因素试验和响应面试验得到酶解最佳工艺。结果表明复合蛋白酶酶解效果最好,其最优酶解工艺为:pH 7.60、加酶量1.16%、温度53℃、时间3.5 h,在此条件下水解度可达到4.83%;通过游离钙含量测定可知酶解后牛骨汤中可溶性钙含量增加了75%。     

加酶超声提取核桃抗氧化肽工艺优化

实验利用脱脂核桃粕为原料,在加酶提取核桃抗氧化肽工艺基础上,采用超声辅助技术,研究了超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽的最佳提取条件。以对DPPH自由基清除率为考察指标,在单因素实验基础上进行正交实验优化超声辅助加酶提取核桃抗氧化肽工艺。结果表明:加酶超声提取核桃抗氧化肽的最优工艺为:酶解时采用Alcalase2.4L碱性蛋白酶,料液比(核桃粕:缓冲液)1:20,[E]/[S]为13:500、pH9、酶解温度49℃的条件下酶解2h;超声功率150W,超声时间20min,超声温度50℃,在此条件下制备的核桃抗氧化肽对对二苯代苦味肼基自由基(DPPH·)的清除率达65.11%,抗氧化肽产率62.37%。     

水溶性大豆多糖的提取工艺研究

以脱脂豆粕为材料,对豆粕中水溶性大豆多糖的提取、纯化进行研究。通过酶提取效果选择,在木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶3 种酶中选取提取效果最佳的碱性蛋白酶;通过从提取溶液的pH 值、提取时间、料液比、酶的添加量及提取温度等因素的试验分析比较,得出大豆多糖的最优提取条件。结果表明：当提取溶液pH 值、提取温度、提取时间和液料比分别为6.0、50℃、1.5h 和20:1(mL/g)时,豆渣中大豆多糖的提取率可达到最大值17.92%,粗多糖的纯度为86.32%。     

柠檬酸与胃蛋白酶协同水解牛骨粉的工艺优化

以新鲜牛骨为原料,探讨牛骨粉的制备工艺;采用对比和正交实验相结合的设计方案,用柠檬酸与胃蛋白酶协同水解牛骨粉,以水解度、钙溶出率为特征性指标,三氯乙酸中可溶性氮含量评定水解效果。结果表明:牛骨在121℃,0.14MPa条件下,蒸煮120min全部松软,蛋白质暴露面积增加,有利于其水解;用柠檬酸水解牛骨粉,水解度与钙溶出率呈极显著相关性(P<0.01);柠檬酸与胃蛋白酶协同水解牛骨粉的最佳条件:柠檬酸浓度0.5mol/L、酶与底物蛋白量比(E/S)为500U/g、底物浓度11%、反应时间为6h,水解度与钙溶出率分别达33.7%和11.2%;三氯乙酸中可溶性氮含量达到97.2%,表明大部分产物为低分子肽类,溶解性高。     

酶法水解麦胚蛋白及其产物的抗氧化活性研究

选择碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对麦胚蛋白进行水解,并考察其水解产物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶为制备麦胚抗氧化肽的最适蛋白酶,其最佳水解条件为:底物质量分数4%,酶添加量6 000U/g,酶解温度50℃,pH值7.5,水解至270min时抗氧化活性最大。     

芝麻粕蛋白酶法提取工艺优化及组分分析

为了综合利用芝麻粕资源,以芝麻粕为原料,利用硬脂酸、吐温80、十二烷基硫酸钠三种表面活性剂对其进行脱脂处理,再采用水剂法去除表面活性剂,最后利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对芝麻粕蛋白进行水解,以芝麻粕蛋白溶出率为考察指标优选出最佳水解酶。在此基础上,通过单因素试验和正交试验对酶解工艺条件进行优化,并利用2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法分析水解物成分。结果表明,吐温80脱脂效果最好,芝麻粕脱脂率达93.49%;碱性蛋白酶为最佳水解酶,其最佳酶解条件为料水比1∶10（g∶mL）、酶解温度50 ℃、加酶量0.04%、酶解时间3.0 h。在此最佳酶解条件下,芝麻粕蛋白溶出率为88.94%。水解物中含有20种氨基酸,其中8种人体必需氨基酸含量高于FAO/WHO的推荐值。     

大鲵多肽制备工艺的研究

以人工养殖大鲵为原料,酶解大鲵肌肉粉制备大鲵肽。结果表明,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、Flavourzyme、Protamex、Alcalase 5种酶,在各酶最适pH和温度下,按照加酶量2000U/g、料液比1:25对大鲵肌肉粉酶解5 h,以肽得率为指标,Protamex酶解产物的肽得率最高;采用L9(33)正交试验进行Protamex水解大鲵肌肉粉的水解工艺研究,获得最佳工艺参数为:温度50℃、酶解时间7 h、料液比1:35。     

Availability of essential amino acids from proteins. II.—food proteins

The availability of leucine from L-leucinamide hydrochloride, L-leucyl-glycyl-glycine and glycyl-L-leucine as substrates for leucine aminopeptidase and glycyl-leucine dipeptidase was studied with Streptococcus faecalis, S. zymogenes and Lactobacillus arabinosus. The results indicate that these micro-organisms have their own activity of exopeptidases through which they may utilise amino acids of peptides, released from the proteins by hydrolysis by endopeptidases. The availability of leucine from the proteins of beef muscle, hydrolysed by pepsin, trypsin, pancreatin or papain was also studied. The amount of available leucine found differed according to the enzyme and micro-organism used. Most efficient were pancreatin and papain. The calculated total amount of leucine present in the proteins studied was not found experimentally by digestion with any of these enzymes. Further hydrolysis by leucine aminopeptidase increased the availability of leucine to 84.6-100%. By using leucine aminopeptidase simultaneously with prolidase, complete availability with all micro-organisms was reached. It is suggested that the availability of essential amino acids in the proteins may be determined microbiologically after total enzymic hydrolysis by papain, leucine aminopeptidase and prolidase. By this method the proteins of beef muscle freeze-dried and stored for 4 years, and those of meat bone meal and blood meal were analyzed.     

Digestibility and Immunoreactivity of Shrimp Extracts Using an In Vitro Digestibility Model with Pepsin and Pancreatin

Shellfish allergy affects 2% of the adult population in the United States. Identification of allergenic shrimp proteins is needed for improved management and assessment of shrimp allergy. We determined the temporal pepsin and pancreatin stability of total shrimp proteins using simulated physiological digestive conditions in vitro. Gel electrophoresis was used to determine protein stability, whereas immunoreactivity of protease stable proteins was determined using rabbit antigen‐specific antibodies. Potential allergenicity of protease stable proteins was determined utilizing human sera from shrimp allergic patients. Total shrimp myofibrillar proteins were pepsin‐ and pancreatin‐stable for up to 1 h after initiating digestion, whereas only pancreatin‐stable total shrimp proteins were Immunoglobulin G (IgG) immunoreactive. However, shrimp proteins of 32 and 25 kDa were pepsin and/or pancreatin stable and Immunoglobulin E (IgE) reactive, denoting the stability and potential allergenicity. These findings suggest that this in vitro digestibility model may be useful for the identification of shrimp allergenic proteins that are more resistant to physiologic digestive conditions and may elicit an immunologic response in vivo.