扫频超声波预处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响

目的:研究扫频式超声波预处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响。方法:以ACE抑制活性和水解度为指标,考察扫频超声波对玉米醇溶蛋白制备ACE抑制肽酶解特性的影响;研究经扫频超声处理后,玉米醇溶蛋白二级结构、表面形貌、酶解产物氨基酸组成等特性的变化。结论:扫频超声波预处理玉米醇溶蛋白后,其水解度和酶解液的ACE抑制率显著提高;酶解产物的疏水性氨基酸和支链氨基酸含量大幅度提高。(40±2)k Hz/(68±2)k Hz组合双频扫频超声波预处理后,玉米醇溶蛋白酶解液的ACE抑制率为43.7%,与未超声对照组相比提高了1.21倍。玉米醇溶蛋白经超声处理后其二级结构发生变化;原子力显微镜对其表面形貌分析表明,双频扫频超声处理使玉米醇溶蛋白颗粒迅速疏松、细化,出现分子自组装聚集现象。     

超声波预处理对大米蛋白酶解产物ACE抑制率的影响

研究了大米蛋白经三频平板式超声波设备预处理对碱性蛋白酶酶解后的大米多肽血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的影响。分别采用紫外可见分光光谱仪、傅里叶变换红外光谱仪、荧光分光光度计对超声的大米蛋白进行了测定,探讨超声影响酶解产物活性的机制。结果表明,所有的频率组合均可显著提高大米蛋白酶解产物的ACE抑制活性,尤其是20,35,50 kHz顺序超声。通过超声后大米蛋白的紫外光谱,红外光谱,表面疏水性的变化表明:超声能改变蛋白的紫外吸收峰,降低蛋白二级结构中α-螺旋和β-转角的含量,同时提高β-折叠的含量。通过蛋白表面疏水性可知,超声能显著提高大米蛋白的表面疏水性,影响蛋白的结构,使碱性蛋白酶容易与酶切位点结合,从而影响蛋白酶解产物的ACE抑制活性。     

超声频率对大米蛋白酶解物及其胃肠模拟消化产物ACE抑制活性的影响

研究不同的超声频率预处理对大米蛋白酶解产物及其胃肠道模拟消化产物的ACE抑制活性的影响,同时研究不同阶段大米蛋白酶解产物的多肽含量。研究表明,单频、双频顺序及双频同步超声虽然对大米蛋白的水解度均无显著影响(P0.05),但是均可以显著提高酶解产物的ACE抑制活性(P0.05)。单频超声20 kHz、双频顺序超声20/35 kHz及双频同步超声20/35 kHz对ACE抑制活性的影响最为明显,与对照组相比,分别增加了35.68%,66.24%和56.17%。双频超声对ACE抑制活性的提高幅度明显高于单频超声,且顺序超声优于同步超声。经胃模拟消化后,不同超声频率预处理均能显著提高蛋白酶解产物的ACE抑制活性。然而过肠模拟消化以后,与对照组相比,不同超声频率预处理对蛋白酶解产物的ACE抑制活性显著升高(P0.05),然而与胃消化的结果相比则显著降低(P0.05)。多肽含量测定结果表明,与对照相比,超声显著增加胃模拟消化后大米多肽的含量(P0.05),而对于肠模拟消化后的大米蛋白含量显著降低(P0.05)。结论:不同超声频率预处理均可促进大米蛋白酶解物及胃模拟消化后的ACE抑制活性;大米蛋白酶解产物经过胃消化后的多肽含量增加,而经过肠消化后的多肽含量反而降低;双频顺序超声效果优于双频同步超声,更优于单频超声。     

三斑海马蛋白肽ACE抑制活性的研究

本文通过三斑海马酶解液的制备、ACE抑制活性肽的分离和体外消化模型的建立研究了三斑海马蛋白肽的ACE抑制活性。利用碱性蛋白酶制备得到具有ACE抑制活性的三斑海马酶解液,经葡聚糖凝胶层析分离纯化后,得到具有较高ACE抑制活性的组分(其IC50为0.91 mg/m L);通过对该组分的氨基酸组成和体外消化模型分析,发现该组分中疏水性氨基酸的含量为50.48%,消化酶作用后,显著提高ACE抑制活性,经判断,该组分中的蛋白肽为前体型抑制剂。     

超声预处理对金枪鱼皮胶原ACE抑制肽消化稳定性的影响及消化产物的分离纯化、鉴定

以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC₅₀值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC₅₀值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。     

超声波对麦胚蛋白性质及其酶解物ACE抑制活性的影响

为了提高麦胚分离蛋白酶解产物的降血压活性,采用超声波处理麦胚分离蛋白。研究了超声波功率对麦胚分离蛋白的溶解度、表面疏水性、荧光光谱、巯基含量变化、水解度和酶解产物对血管紧张素转换酶(ACE)相对抑制活性的影响。结果表明:经超声波处理后,小麦胚芽球蛋白的荧光光谱和巯基含量均发生了显著的变化。麦胚分离蛋白的溶解度和表面疏水残基含量随着超声波功率的增加而提高,但当超声功率达到800 W后,增幅趋于平缓。经超声波前处理后,ACE抑制活性明显提高,而麦胚分离蛋白的酶解产物水解度没有明显变化,因此ACE抑制活性的提高是由于蛋白结构的变化造成的。在超声功率800 W时,酶解产物的ACE相对抑制活性提高了41.09%。     

扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响

目的:研究不同扫频超声处理时间对β-乳球蛋白酶解制备多肽抗氧化活性的影响。方法:研究不同的超声预处理时间(10,20,30,60,90 min)对β-乳球蛋白表观结构的影响,以及超声波处理对β-乳球蛋白酶解产物的抗氧化活性、氨基酸组成、分子质量分布和疏水性的影响。结论:超声波处理可显著提高β-乳球蛋白酶解产物的DPPH自由基清除率、ABTS·清除能力和Fe2+络合能力。随着超声时间的延长,β-乳球蛋白酶解产物抗氧化活性呈先增加后降低的趋势。扫频超声波处理可以提高β-LG酶解产物的疏水性,并且显著增加多肽中的疏水性氨基酸的含量。扫频超声处理10~60 min有利于分子质量为200~2000 u多肽的生成,从而提高其酶解产物的抗氧化活性。粒径分布表明短时间的超声处理(<30 min)引起β-LG粒径减小,大分子蛋白的结构疏松,分子间的疏水性作用力增加;长时间(60~90 min)的超声处理则引起大分子蛋白聚集,疏水性作用力降低,蛋白颗粒粒径增大。     

半固态酶解法制备全谷物多肽及其抗氧化、ACE抑制活性的研究

以燕麦、荞麦为原料,通过半固态酶解法制备谷物多肽并以液态酶解作为对照组研究其抗氧化、降血压能力。通过凯氏定氮法测定酶解产物中多肽含量,通过总抗氧化能力（Ferric ion reducing antioxidant power,FRAP法）、羟自由基清除能力及体外血管紧张素转换酶（Angiotensin I converting enzyme, ACE）活性抑制实验测定酶解产物抗氧化及降血压能力。结果表明,以酶解产物中多肽含量、抗氧化和ACE抑制活性为指标确定了燕麦、荞麦半固态酶解最佳工艺参数分别为:酶解时间3 h,酶添加量为3.75%;酶解时间为1 h,酶添加量为2.50%,在此条件下,燕麦、荞麦所得酶解产物中多肽含量为7.03%和6.35%。1 mg/mL燕麦、荞麦多肽（半固态酶解组）羟自由基清除率为61.34%、69.33%,总抗氧化能力相当于（0.53±0.03） mmol/L和（0.48±0.01） mmol/L的FeSO₄,ACE抑制率为80.27%、77.60%。半固态酶解组的多肽含量及抗氧化、ACE抑制能力均显著高于液态酶解组。采用半固态酶解工艺,既可以提高谷物肽含量,又可提高其抗氧化、ACE抑制活性,为谷物高值化加工和功能性食品配料领域的应用提供理论支持。     

超声辅助复合酶法提取小龙虾虾壳蛋白及其性质研究

目的 为了提高副产物虾壳中蛋白的提取率,并探究虾壳蛋白的功能活性,以实现低值虾壳的高值化利用,为其进一步在食品药品领域的应用提供数据依据。方法 以小龙虾虾壳为原料,在单因素的基础上,以加酶量、复合酶比例、酶解时间和超声时间为响应变量,蛋白提取率为响应值,采用响应面Box-Behnken试验设计优化超声辅助复合酶法提取小龙虾壳蛋白的最佳工艺。进一步比较复合酶解与单酶酶解制备的多肽的抗氧化活性、抗血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）活性和氨基酸成分组成,研究酶解虾壳蛋白多肽的功能性质。结果 加酶量12000 U,复合比0.65,酶解时间2.8 h,超声时间30 min,该最优条件下的蛋白质提取率为90.41%,与预测值相对误差为1.2%。与单酶酶解液相比,复合酶解液的抗氧化能力和ACE抑制能力均显著增强,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl -2-picrylhydrazyl,DPPH)和2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（2,2''-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS）的EC50值分别为4.38 mg/mL和3.66 mg/mL,最大的ACE抑制率达（44.93±0.89）%,且具有竞争性抑制模式。氨基酸组分分析发现酶解制备的虾壳多肽中必需氨基酸和疏水性氨基酸含量丰富,分别占氨基酸总量的43.06%和33.52%,从而表现出抗氧化活性和抗ACE活性。结论 该研究有效提高了虾壳蛋白的提取率,并可为虾壳功能活性肽的制备及在食品中的开发应用提供理论基础。     

贻贝盐溶蛋白特性分析及其ACE抑制肽的酶法制备

以贻贝为原料提取盐溶性蛋白,首先研究盐溶性蛋白的分子质量分布、粒度分布和变性温度等性质,然后比较其3?种蛋白酶（胰蛋白酶、中性蛋白酶和胰酶）酶解产物的血管紧张素转化酶（angiotensin converting enzyme,ACE）抑制活性,筛选出ACE抑制活性较高的胰蛋白酶酶解物,其IC50值为215.96?μg/mL。利用质谱对胰蛋白酶酶解物中的多肽氨基酸序列进行鉴定,利用多肽序列与ACE的对接分数初步筛选出11?个分值大于180?分的多肽序列,通过氨基酸组成结合情况和两者间氢键等相互作用,进一步筛选活性肽并阐述抑制活性机理,最终推测出LYDIDVAK和WIAEEADK是活性较高的抑制肽。     

扫频超声处理对玉米醇溶蛋白酶解特性的影响

为了探索扫频超声技术促进蛋白质酶解反应的效果,提高酶解产物的血管紧张素转换酶(ACE)相对抑制活性,利用扫频超声处理玉米醇溶蛋白,进行单因素考察来寻找最佳扫频超声工作模式、超声预处理参数和最佳酶解条件.在最佳的超声预处理及最佳的酶解条件下,ACE抑制率为48.48％、水解度为11.20％,酶解产物的IC50值为3.77mg/L,比常规酶解(无超声处理)降低了31.20％,产品得率为66.15％,比常规酶解提高了14.39％.这表明扫频超声预处理能够有效地促进玉米醇溶蛋白的酶解反应,提高产物的ACE相对抑制活性.     

特异性蛋白酶酶解虾副产物制备ACE抑制肽

ACE抑制肽构效关系(QSAR)的研究认为小肽C末端氨基酸的疏水性和其ACE抑制活性之间呈正相关关系。针对性地选择胰凝乳蛋白酶和脯氨酸蛋白酶两步酶解虾副产物制备ACE抑制肽。在一定温度、pH和加酶量条件下,以蛋白质的水解度和ACE抑制率为指标,确定胰凝乳蛋白酶、脯氨酸蛋白酶的最佳酶解时间均为4h。两步酶解产物ACE抑制的IC50值为1.645mg protein/mL。经透析后,得到0~500u(组分1)和500~1000u(组分2)两个组分,组分1和组分2的IC50值分别降为0.333mg peptide/mL和1.320mg peptide/mL。质谱分析结果表明组分1中含有10个肽,分别由5~14个氨基酸组成;组分2中含有15个肽,分别由7~14个氨基酸组成。25个已知序列多肽中有22个多肽的羧基端是脯氨酸或芳香族氨基酸,与预期相符。     

鱼鳞明胶ACE抑制肽的制备及其活性研究

利用Alcalase 2.4L酶解鱼鳞明胶制备具有血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性的降血压肽,通过超滤处理富集得到具有较高活性的ACE抑制肽,并对该组分进行分子量分布、氨基酸组成分析及抗消化性研究。结果表明:水解明胶6 h所得水解物的ACE抑制活性最高,其IC50为0.56 mg/mL,水解度为15.54%;超滤膜处理分离后,分子量小于5 kDa的多肽组分Ⅱ的ACE抑制活性最高,其回收率达90%以上;多肽中对ACE抑制活性贡献大的脯氨酸、羟脯氨酸、色氨酸等疏水性氨基酸的保存率高;体外消化实验显示,该抑制肽在胃肠道消化酶作用下能保持较好的ACE抑制活性。     

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

超声波-离子液体耦合预处理制备蚕蛹蛋白质ACE抑制肽的工艺优化

为提高蚕蛹蛋白质酶解产物的ACE抑制活性,利用超声波-离子液体耦合法对蚕蛹蛋白质进行预处理。以酶解产物ACE抑制活性为指标,采用单因素结合响应面分析法,研究超声波-离子液体耦合预处理蚕蛹蛋白质的工艺条件,并通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究预处理前后蚕蛹蛋白质及其酶解产物相对分子质量的变化。结果表明,各因素对酶解产物ACE抑制活性的影响程度由大到小依次为:液料比、超声波功率、预处理时间。确定最佳预处理工艺条件为:液料比27.2 mL/g,处理时间31.9 min,超声波功率406.8 W。在此优化条件下,蚕蛹蛋白质酶解产物的ACE抑制率为75.7%(IC50=0.071 mg/mL)。与未处理、超声波预处理的相比,超声波-离子液体耦合预处理在制备蚕蛹蛋白质ACE抑制肽上具有明显优势。超声波-离子液体耦合预处理后,蚕蛹蛋白质的分子质量无明显变化,但其酶解产物的分子质量(1.43 ku)变小。     

扫频超声波预处理对麦胚蛋白制备ACE抑制肽的影响

研究了扫频式超声波预处理对小麦胚芽蛋白制备ACE抑制肽的影响。以ACE抑制活性和水解度为指标,为了提高蛋白质酶解制备ACE抑制肽的反应效率,改善酶解物的ACE抑制活性,考察了超声频率、扫频周期、上、下振板间距、超声时间和料液浓度对小麦胚芽蛋白预处理效果的影响。试验结果表明,在超声波总功率600 W/30 L、料液初始温度35℃和超声波每工作250 s间歇5 s的前提下,扫频式超声波预处理麦胚蛋白的最佳条件是:上、下振板的超声波频率分别为(24±2)k Hz和(68±2)k Hz、扫频周期170 ms、振板间距5 cm、超声波时间140 min、料液质量浓度1.0 g/100 m L。在此条件下,酶解产物的ACE抑制率可达到36.50%,半数抑制剂浓度IC50为0.53 mg/m L,产物转化率77.5%±2.8%。超声波预处理对麦胚蛋白的水解度和酶解产物的转化率没有明显影响,而使其水解产物的ACE抑制活性显著提高。扫频式超声波的预处理效果优于定频式超声波。     

蚕蛹蛋白及其水解产物中氨基酸组成分析

采用FMOC-OPA柱前衍生化-高效液相色谱法测定蚕蛹蛋白及水解液氨基酸含量,同时测定血管紧张素转化酶(ACE)抑制活性,研究蚕蛹蛋白水解后氨基酸组成的改变及对ACE抑制活性的影响。结果表明:水解液10kD以下组分(SN2)中疏水性氨基酸含量为49.15%,显著高于10kD以上组分(SN1)中的40.55%及蚕蛹蛋白中的45.21%,其中对ACE抑制活性影响较大的脯氨酸、芳香族氨基酸含量为7.75%和19.20%,高于SN1中的5.62%和13.59%及蚕蛹蛋白中的7.42%和15.81%,并且SN2中ACE抑制率为47.6%显著高于SN1和蚕蛹蛋白中的抑制率,表明水解后疏水性氨基酸组成的改变与ACE抑制活性的变化趋势相同,且ACE抑制活性主要集中于SN2。     

动植物源蛋白体外消化产物结构性质及ACE抑制活性

为揭示动植物源蛋白对于血压调节功能上的差异是否由蛋白肽的血管紧张素转化酶（angiotensin conversion enzyme,ACE）抑制活性所引起,动植物蛋白经体外消化后,对蛋白肽的ACE活性抑制进行研究。采用胃蛋白酶-胰蛋白酶两步消化法,水解植物蛋白（大米、燕麦、大豆、豌豆）、红肉蛋白（猪肉、牛肉）和白肉蛋白（鸡肉）。测定所获蛋白肽的水解度、分子质量分布、氨基酸组成及其ACE抑制率。结果表明,随着蛋白质水解度的增加和分子质量的减小,3类蛋白消化产物的ACE活性抑制率均相应增大。其中,植物蛋白消化产物ACE抑制率最高（60.41%）,红肉蛋白最低（40.13%）。对蛋白质消化产物的氨基酸组成进行分析,结果表明,植物蛋白和白肉蛋白消化产物的疏水性氨基酸含量均显著高于红肉蛋白。3类蛋白中消化产物的疏水性氨基酸含量越高,则ACE抑制活性越高,说明疏水性氨基酸含量高可能是植物蛋白肽具有高的ACE抑制活性的主要原因之一。     

大鳞副泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的酶解方式研究

为开发大鳞副泥鳅蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,使用高效液相色谱法测定大鳞副泥鳅蛋白的氨基酸组成,考察泥鳅蛋白的单一酶解方式和复合酶解方式对产生ACE抑制肽的影响,并使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证实不同酶解方式对泥鳅蛋白的水解效果。结果表明,大鳞副泥鳅蛋白富含疏水性氨基酸(39.823%)、支链氨基酸(18.102%)以及芳香族氨基酸(8.216%),是制备ACE抑制肽的良好来源。脯氨酸蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶单一酶解泥鳅蛋白,酶解产物的最高ACE抑制率分别是81.01%、64.91%和87.84%,最高水解度分别为1.48%、9.04%和28.29%。使用碱性蛋白酶与脯氨酸蛋白酶对大鳞副泥鳅蛋白进行分步酶解与同步酶解,同步酶解方式可以产生更高活性的ACE抑制肽,最高的ACE抑制率为90.14%,IC50为0.491 mg/mL。