大鳞副泥鳅蛋白中血管紧张素转化酶抑制肽的计算机模拟评估

通过计算机模拟,预测大鳞副泥鳅生物活性以及其中血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽的作用位点.通过UniProtKB数据库和蛋白质氨基酸序列比对选择大鳞副泥鳅蛋白,使用BIOPEP分析工具进行活性分析筛选出3种大鳞副泥鳅蛋白,使用Peptide、ExPASy和Pr...     

大鳞副泥鳅蛋白ACE抑制肽的分离纯化与鉴定

目的:开发大鳞副泥鳅的ACE抑制肽。方法:采用超滤、葡聚糖凝胶(Sephadex G-15)和半制备型高效液相色谱等多种技术,从大鳞副泥鳅蛋白酶解产物中分离纯化制备了高活性的ACE抑制肽,并利用高效液相色谱质谱—串联质谱对其结构进行解析;利用抑制动力学分析纯化后ACE抑制肽的抑制模式。结果:高活性ACE抑制肽的氨基酸序列为Glu-Gly-His,相对分子质量345.2 Da,IC₅₀值为(17.89±3.28)μg/mL,纯化倍数为27.47。结论:大鳞副泥鳅抑制肽是一种竞争性的ACE抑制肽。     

大鳞副泥鳅蛋白制备ACE抑制肽的酶解方式研究

为开发大鳞副泥鳅蛋白血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,使用高效液相色谱法测定大鳞副泥鳅蛋白的氨基酸组成,考察泥鳅蛋白的单一酶解方式和复合酶解方式对产生ACE抑制肽的影响,并使用N-三(羟甲基)甲基甘氨酸十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳进一步证实不同酶解方式对泥鳅蛋白的水解效果。结果表明,大鳞副泥鳅蛋白富含疏水性氨基酸(39.823%)、支链氨基酸(18.102%)以及芳香族氨基酸(8.216%),是制备ACE抑制肽的良好来源。脯氨酸蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶和碱性蛋白酶单一酶解泥鳅蛋白,酶解产物的最高ACE抑制率分别是81.01%、64.91%和87.84%,最高水解度分别为1.48%、9.04%和28.29%。使用碱性蛋白酶与脯氨酸蛋白酶对大鳞副泥鳅蛋白进行分步酶解与同步酶解,同步酶解方式可以产生更高活性的ACE抑制肽,最高的ACE抑制率为90.14%,IC50为0.491 mg/mL。