类细菌素产生菌HF08的选育及其发酵条件的研究

通过滤纸片法从泡菜水中分离到 480株抗生物质产生菌 ,以杯碟法复筛 ,筛选到 1株类细菌素产生菌HF0 8,经鉴定为瑞士乳杆菌 (Lactobacillushelveticus)。HF0 8产类细菌素最适条件为 :以2 %葡萄糖为碳源 ,1 %蛋白胨和 0 5 %酵母膏为氮源 ,培养基起始pH5 5 ,3 7℃静置培养 48h。对该类细菌素生物学特性进行初步研究 ,发现用蛋白酶K处理发酵上清液后 ,抑菌活性丧失 ;该类细菌素具有较好的热稳定性 ,显示抑菌活性的pH值范围是 3 5～ 5 5。 0 0 0 2mol/LK+和Mn2 +对其有激活作用 ,Fe2 +、Cu2 +、Ca2 +有抑制作用 ,而Na+和Mg2 +对其影响不大。     

传统干酪中一株产Ⅱa类细菌素乳酸菌的分离与鉴定

从内蒙古传统干酪中分离到一株产抑菌活性物质的乳酸菌M-2,其对单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌等食品中常见致病菌和腐败菌都有抑制作用.排除有机酸、H2O2等的干扰后,仍有抑菌活性;进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后,其抑菌活性显著增强;用蛋白酶K处理后,其抑菌活性消失,因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质,进而确定乳酸菌M-2为细菌素产生菌.通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定.PCR扩增得到1675bp的16SrRNA序列,并将其通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比,同时,通过Bioedit 7.0和Treedrawing软件绘制系统发育树.结果显示,M-2的16S rRNA序列和数据库中的屎肠球菌SF菌株的序列的同源性为99.87%.在细菌系统发育分类学上,M-2菌株归属屎肠球菌(Enterococcus faecium).这与生理生化实验初步鉴定结果一致.根据细菌素的分类原则,将该细菌素归类为IIa类细菌素.     

产宽谱pH 细菌素乳酸菌的筛选鉴定、毒力检测及细菌素特性研究

采用琼脂扩散法从分离自川西高原奶渣的34株疑似乳酸球菌中筛选细菌素产生菌,初筛检测发酵上清液抑菌活性,复筛排除有机酸和H2O2干扰,检测蛋白酶敏感性,测定抑菌物质盐析液和粗提液抑菌活性,确定菌株SAU-2为细菌素产生菌。根据形态、生理生化指标和16S rDNA序列系统发育分析,将其鉴定为Enterococcus。肠球菌SAU-2溶血素表型阴性,agg、gelE、cylM、cylB、cylA、esp、efaAfm、cpd、cob、ccf、cyILL、cyILS、fsrB和hyLEfm等毒力因子基因型阴性,表明肠球菌SAU-2是安全的。所产细菌素可耐受121℃条件20min;在pH2.0～12.0有抑菌活性;对胰蛋白酶和蛋白酶K敏感,对木瓜蛋白酶和胃蛋白酶不敏感;主要对近缘乳酸菌和G+细菌有抑菌活性,除对1株铜绿假单胞菌和1株红酵母有抑菌活性外,对其余G－细菌和真菌无抑制作用。     

乳酸菌Ⅱ类细菌素生物合成及其代谢调控策略

乳酸菌细菌素是乳酸菌经由核糖体合成的具有抑菌活性的多肽类物质,其中乳酸菌Ⅱ类细菌素具有很强的热稳定性和抑菌活性,但是产量较低尚不能实现商业化生产。因此,了解和掌握乳酸菌Ⅱ类细菌素合成及其代谢调控机制,对解决商业化生产过程的技术瓶颈具有重要的意义。该文综述了目前Ⅱ类细菌素生物合成和降解途径,并从代谢调控角度提出提高Ⅱ类细菌素产量的可行性策略,为提高Ⅱ类细菌素产量提供新的途径和思路,也为Ⅱ类细菌素工业化生产奠定基础。     

产细菌素乳酸菌的鉴定及其特性研究

从婴儿粪便中分离获得能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,通过排除有机酸、过氧化氢的干扰试验,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性;通过蛋白酶K和胰蛋白酶试验,证明该菌株产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,是一种细菌素.初步提纯该细菌素,其抑菌活性较适pH范围为2～4,120℃热处理30 min后仍有70%的抑菌活性.经Trcine-SDS-PAGE试验分析该细菌素分子质量为4kDa.抑菌谱测定结果表明,该细菌素不仅对革兰氏阳性菌(单增李斯特氏菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等)有抑制作用,而且还抑制革兰氏阴性菌(大肠杆菌、沙门氏菌、恶臭假单胞菌、福氏志贺氏菌等),具有广谱的抑菌作用.通过菌落形态、生理生化特性试验和16S rRNA基因序列分析,鉴定该乳酸菌为植物乳杆菌,命名为Lactobacillus plantarum ZJ317.     

Ⅱ类细菌素的生物合成及其在食品领域的应用

乳酸菌细菌素是乳酸菌核糖体合成的具有抑菌或杀菌活性的多肽或者蛋白质。其中,Ⅱ类细菌素具有较宽的抑菌谱和较高的抑菌活性,然而,由于其自然条件下产量低且合成调控机理的研究较少,目前尚未实现规模化生产。为了解和掌握Ⅱ类细菌素的合成及调控机理,本文分类阐释此类细菌素几个亚群的编码基因结构、多肽结构,以及杀菌、免疫和调节机理,并阐述Ⅱ类细菌素在食品防腐和保鲜等方面的应用。     

清酒乳杆菌ZJ220产细菌素的研究

从生鲜牛乳中分离获得1株能够产生抑菌活性物质的菌株,在排除有机酸、过氧化氢的干扰后,该菌发酵上清液仍有明显的抑菌活性。以蛋白酶K、胃蛋白酶和胰蛋白酶处理发胶上清液后其抑菌活性消失,试验表明该菌株产生的抑菌活性物质具有蛋白质性质,初步确定为一种细菌素。经生理生化和16S rDNA鉴定该菌为清酒乳杆菌,命名为Lactobacillus sakei ZJ220。细菌素经疏水洗脱、离子交换、凝胶过滤3步法得到纯化。经Tricine-SDS-PAGE分析该细菌素分子质量为6.0 ku。抑菌谱测定结果表明,该细菌素不仅能抑制革兰氏阳性菌,而且能抑制革兰氏阴性菌。经不同酸、热处理,该细茵素仍有较好的抑菌活性。     

传统干酪中一株产IIa类细菌素乳酸菌的分离与鉴定

从内蒙古传统干酪中分离到一株产抑菌活性物质的乳酸菌M-2，其对单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌等食品中常见致病菌和腐败菌都有抑制作用。排除有机酸、H202等的干扰后，仍有抑菌活性：进一步硫酸铵沉淀、透析及浓缩处理后，其抑菌活性显著增强；用蛋白酶K处理后，其抑菌活性消失，因此确定该抑菌活性物质为蛋白类物质，进而确定乳酸菌M-2为细菌素产生菌。通过生理生化实验和16SrRNA基因序列分析对该菌株进行了鉴定。PCR扩增得到1675bp的16SrRNA序列，并将其通过BLAST软件在NCBI网站中进行同源性比，同时，通过Bioedit7．0和Treedrawing软件绘制系统发育树。结果显示，M-2的16SrRNA序列和数据库中的屎肠球菌SF菌株的序列的同源性为99．87％。在细菌系统发育分类学上，M-2菌株归属屎肠球菌（Enterococcus faecium）。这与生理生化实验初步鉴定结果一致。根据细菌素的分类原则，将该细菌素归类为IIa类细菌素。     

嗜酸乳杆菌产类细菌素Lactobacillin NX2-6的初步研究

从内蒙古传统乳制品酸马奶中筛选出1株产生具有广谱抑菌活性物质的嗜酸乳杆菌NX2-6。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株NX2-6所产生的类细菌素对金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌及米曲霉等真菌具有较强的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性明显下降,但仍具有较强的抑菌活性,对α-胰凝乳蛋白酶抗菌活性没有显著变化,因此表明该抗菌活性物质为蛋白类物质或非单一物质。在酸性条件下它具有很好的热稳定性,pH2.0时活性最强,中性或碱性条件下不具有抗菌活性,抑菌活性pH值范围在2.0-5.0。此抗菌物质不同于一般细菌素,属于类细菌素,命名为Lactobacillin NX2-6。菌株NX2-6产物在生防、食品具有潜在的应用价值。     

产类细菌素乳酸菌的筛选及其生物学特性研究

采用平板稀释和CO2厌氧培养技术,从多种发酵食品中分离出158株乳酸菌.通过牛津杯双层平板扩散试验,筛选出1株有明显抑菌活性的乳酸菌R-6,经初步鉴定为乳酸乳杆菌(Lactobacillus sp.).R-6发酵上清液用NaoH调节pH5.5,对指示菌Escherichi coil.仍有明显抑菌活性,过氧化氢酶作用后其抑菌效果基本不变,因此可以排除乳酸和过氧化氢的干扰;R-6培养液经胰蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性明显降低,且超过100℃热处理其抑菌活性迅速丧失,证实所产抑菌物质确系多肽类细菌素.该细菌素在酸性条件下活性较强,对革兰氏阴性菌(E.coil)抑菌作用较强,对革兰氏阳性菌(Bacillus subfilis 和 Staphlococcus aureus)也有明显抑制,显示出一定的抗菌广谱性.