玉米蛋白粉中黄体素、玉米黄素对乳腺癌细胞增殖的影响

研究玉米蛋白粉中黄体素、玉米黄素对乳腺癌细胞增殖的影响.体外培养MCF-7、SHZ细胞,培养时添加不同浓度的黄体素和玉米黄素,利用MTT法、HE染色法、扫描电镜等方法进行抗大鼠乳腺癌细胞增殖作用的研究.黄体素和玉米黄素对MCF-7细胞增殖的影响不显著,黄体素在体外对大鼠乳腺癌细胞的增殖效果也不明显,玉米黄素则在体外具有显著的抑制SHZ细胞增殖的作用.进一步研究表明:经玉米黄素作用的细胞在HE染色中,可见细胞核碎裂;扫描电镜可见细胞微绒毛消失,细胞膜表面呈现大量的凋亡小体.玉米蛋白粉中黄体素、玉米黄素对SHZ细胞生长的抑制作用具有较大的差异.     

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。     

麦胚凝集素的高效纯化工艺及其稳定性研究

通过单因素和正交试验确定了麦胚凝集素（WGA）的最佳提取条件（提取时间3.4h,甲酸浓度0.5mol/L,液料比10.15）,并建立了利用盐析分级、选择性热处理、部分水解甲壳素亲合层析和凝胶过滤层析对WGA进行高效纯化的工艺.研究了WGA的理化稳定性,发现WGA的活性随常压热处理温度、时间的增加而降低,而且对于湿热处理比干热处理更敏感.WGA在加压蒸汽处理（2.4kg/cm^2,20min）和挤压处理（145℃,140r/min）后完全丧失活性.WGA的活性在pH7.0～8.5范围内最高,在pH≤2.5或H≥11.0时完全丧失.WGA的活性随茶多酚浓度的增加而显著降低,在茶多酚浓度达到15g/L时完全丧失.     

麦胚凝集素的纯化及其与小麦根际促生细菌的亲和作用

植物凝集素可引导植物-微生物之间的相互识别,对植物根际促生细菌的定殖起着重要作用.采用石油醚和丙酮脱脂、甲酸抽提、硫酸铵盐析、热处理、甲壳素亲和层析的方法分离纯化麦胚凝集素(WGA),从小麦胚中纯化WGA的纯化倍数为115.9,血凝活力为6.8 mg/L,产率为0.566 mg/g.为检测WCA与小麦根际细菌的亲和性识别作用,依据Marshall法对纯化的WGA进行异硫氰酸荧光素(FITC)标记;用标记的WGA对小麦根际细茵染色,26株小麦根际促生细茵中23株具有FITc-WGA染色阳性.表明这些FITC-WGA染色阳性的菌株和WGA具有亲和性识别作用,揭示WGA可能影响定殖在小麦根际的促生细菌.     

反式脂肪酸与Ⅱ型糖尿病、心血管疾病的关系及作用机制

依据目前国内外有关反式脂肪酸TFA(trans fatty acids)的流行病学研究成果和一些相关研究报告指出,TFA与人类Ⅱ型糖尿病、心血管疾病有相关性.TFA对人体的病理效应在于,它对血脂、炎症因子、内皮细胞功能、胰岛素抵抗及免疫力等有重要影响.膳食中的TFA进入机体组织器官后,将与多不饱和脂肪酸竞争结合过氧化物酶体增殖物活化受体PPARs(peroxisome proliferation activatedreceptors),下调PPARs对机体的保护作用,降低脂肪酸代谢酶、细胞葡萄糖转运体基因的表达,降低胰岛素受体的敏感性,并增强炎症因子的表达,造成血脂异常,胰岛素抵抗,血管内皮重构,功能紊乱,进而诱发Ⅱ型糖尿病、心血管疾病.     

重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用研究

目的 研究重组人Ⅱ型胰蛋白酶的性质及初步应用.方法 用米氏方程和双倒数作图法确定米氏常数Km,Vmax值,BAEE法测定胰蛋白酶活性,将胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B及细胞消化.结果 重组人Ⅱ型胰蛋白酶最适反应温度30℃,最适pH 7.6,以BAEE为底物,Km和Vmax分别为12.7μmol/L和212.μmol/min.EDTA与PMSF抑制酶活性,高于50℃条件下易失活,与牛胰蛋白酶相比,重组人胰蛋白酶对羧肽酶原B有更高的激活效率,细胞消化方面二者效果基本相同.结论 温度及pH是影响酶稳定性的较大因素,重组人胰蛋白酶可替代牛胰蛋白酶用于激活羧肽酶原B和细胞消化.     

榛仁五肽对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用

本文以长白山榛仁五肽Ala-Trp-Asp-Pro-Glu(AWDPE)为研究对象,利用体外化学和细胞实验,研究AWDPE抗氧化活性及对HUVEC细胞氧化应激损伤的保护作用。结果显示:AWDPE浓度为1 mg/mL时对DPPH和ABTS自由基清除率分别达到63.38±2.44%和69.38±1.96%;实验范围内,不同浓度AWDPE对HUVEC细胞无生长抑制作用,亦无生长促进作用;与血管紧张素Ⅱ氧化损伤组相比,AWDPE保护组细胞活力高于AngⅡ损伤组1.51倍(p0.01);100μg/mL AWDPE保护组细胞内,LDH释放率为27.14±1.16%,为AngⅡ损伤组0.62倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,MDA含量为3.47±0.28 nmol/mg,为AngⅡ损伤组0.73倍;100μg/mL AWDPE保护组细胞内,CAT含量为2.34±0.11 U/mg,为AngⅡ损伤组1.39倍(p0.05);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,T-SOD含量为23.55±1.26 U/mg,为AngⅡ损伤组2.48倍(p0.01);500μg/mL AWDPE保护组细胞内,GSH-PX含量为33.9±2.75 nmol/L,为AngⅡ损伤组1.91倍(p0.01)。上述实验证明AWDPE五肽对HUVECs细胞氧化应激损伤具有显著的保护作用。     

μC/OS-Ⅱ在ARM核微处理器上的移植技巧

通过编写OS_CPU.H,OS_CPU.C.C,OS_CPU_A.S 3个文件和系统时钟函数OSTickISR(),实现了μC/OS-Ⅱ在ARM7TDM I核微处理器上的移植.该方法结合了ARM和μC/OS-Ⅱ的优越性能,可大大缩短项目开发周期,提高系统整体性能.     

聚硅酸氯化铝优化制备及降低纯碱生产中母液Ⅱ浊度的研究

采用复合法自制聚硅酸氯化铝(PASC)絮凝剂,并用其对纯碱生产中高浊度的母液Ⅱ(MⅡ)进行降浊实验研究.结果表明,当Si/Al保持合适的比例时,PASC对MⅡ降浊效果十分显著,可以解决由于MⅡ浊度高而带来的纯碱生产问题.     

苦荞麦蛋白质对乳腺癌细胞的增殖抑制作用

采用MTT 法、HE 染色法、扫描电镜法研究苦荞麦蛋白质(TBWSP31)对人乳腺癌Bcap37 细胞的增殖抑制作用。结果表明：TBWSP31 对人乳腺癌细胞株Bcap37 的生长有明显的抑制作用,并且存在时间效应和剂量效应。48h 和72h 的IC50 值分别为43.37、19.75μg/mL。HE 染色发现细胞经样品作用后,细胞变形,变小,细胞核固缩、裂解,细胞膜皱褶、卷曲和出泡,并且有细胞膜包裹的凋亡小体生成。扫描电镜下观察细胞表面超微结构,发现细胞出现典型的凋亡形态学特征,细胞表面微绒毛大量减少,有的甚至消失,细胞体积变小,细胞膜皱缩,表面凸起,形成了大量的小泡,有的成为凋亡小体。     

姜黄挥发油诱导肺癌细胞凋亡及机理研究

对姜黄挥发油诱导人肺癌A549细胞的凋亡影响及作用机制进行研究。采用二甲基噻唑蓝比色法(methl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测姜黄挥发油对A549的细胞增殖的抑制作用,采用吖啶橙(acridine orange,AO)染色法、流式细胞仪法、划痕和集落形成试验探究姜黄挥发油诱导细胞凋亡的作用机制。结果表明,姜黄挥发油以时间和剂量依赖性关系抑制癌细胞的增殖。姜黄挥发油浓度在100 mg/L时就能够使细胞结构发生变形,细胞核发生皱缩,同时与空白对照组相比,加入经不同浓度姜黄挥发油处理后的A549细胞,其早期和晚期凋亡细胞数量均有所增加,其迁移能力也受到了不同程度的抑制。     

菹草类胡萝卜素诱导Hela细胞凋亡的细胞学观察

本文研究了菹草类胡萝卜素提取物(CEPC)对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响,采用体外培养技术,用可见光显微镜、荧光倒置显微镜、透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察Hela细胞的形态变化。结果表明:分别用浓度为2.5、5、10μg/ml的CEPC处理Hela细胞,在可见光、荧光显微镜、电镜和LSCM下观察细胞形态,分别出现了细胞数量明显减少、皱缩变形、体积缩小、触角伸长,显示亮黄色荧光的细胞核呈现“新月状”、条状甚至碎片状,细胞膜表面绒毛减少,胞浆内空泡明显增多,细胞核染色体发生固缩,细胞中RNA的含量明显增加等典型的凋亡细胞形态特征。实验结果表明CEPC对Hela细胞的增殖具有明显的抑制作用并能有效地诱导Hela细胞凋亡。     

苦白蹄石油醚提取物对肿瘤细胞增殖与细胞周期的影响

以磺酰罗丹明染色法(SRB)法研究苦白蹄石油醚提取物(PEFO)体外对人肝癌细胞SMMC-7721、人胃癌细胞SGC-7901、人喉癌上皮细胞Hep-2三种人恶性肿瘤细胞增殖的影响。实验结果显示PEFO对三种肿瘤细胞都具有抑制作用,且呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)分别为58.74、74.13、83.18μg/mL,对人肝癌细胞SMMC-7721表现出较强的抑制作用。通过倒置相差显微镜、透射电镜观察到SMMC-7721细胞经PEFO处理后,其形态和细胞超微结构发生较大改变,细胞出现核皱缩、贴壁性差、细胞裂解等现象;且细胞线粒体发生肿胀,胞质内出现大量空泡化结构。流式细胞术检测结果发现SMMC-7721细胞经PEFO处理后,S期细胞减少,G0/G1期细胞增多,出现了G0/G1期阻滞。研究结果显示PEFO在体外能够抑制肿瘤细胞的增殖,并初步推断有可能是通过抑制肿瘤细胞有氧代谢和干预细胞周期来实现抗肿瘤作用的。     

鸡胸软骨Ⅱ型胶原免疫活性肽的制备及其性质

以水解度为指标,优化了中性蛋白酶酶解鸡胸软骨Ⅱ型胶原的条件,在此基础上制备不同水解度Ⅱ型胶原酶解复合物,并以淋巴细胞增殖率为指标对其免疫活性进行研究。结果表明,中性蛋白酶的酶解能力最强,其最佳酶解条件为：酶解温度50 ℃、pH 7.5、底物质量浓度25 mg/mL、加酶量40 U/mg、酶解时间150 min。当Ⅱ型胶原在水解度为18%时,其对淋巴细胞的增殖活性达到58.69%。Ⅱ型胶原酶解复合物的质量浓度对淋巴细胞的增殖率也有显著影响,当其质量浓度达到1 mg/mL时,对淋巴细胞增殖能力达到最大。免疫活性较高的Ⅱ型胶原酶解复合物的分子质量主要分布于1 000～180 D范围内,占其总含量的75.21%。     

甘蔗胚性细胞团诱导与增殖的相关因子研究

以甘蔗ROC22愈伤组织为材料,研究相关因子对甘蔗胚性细胞团诱导与增殖的效应.结果表明:2,4-D 3.0 mg/L较利于胚性细胞团的诱导,诱导率为30.33％; KT 0.5 mg/L对胚性细胞团的继代增殖较佳,培养25天后的增殖倍数为38.8倍；培养日龄为15天和第4代的胚性细胞团增殖倍数较高,分别为42.06倍和44.33倍；先暗培养再光照培养对胚性细胞团的继代增殖较好,培养25天后的增殖倍数为35.05倍.     

PEI对固定化增殖细胞性质的影响

以海藻酸钙为载体包埋黑曲霉AS0 0 2 3孢子 ,培养后得到的固定化增殖细胞用于生产低聚果糖 .利用材料试验仪研究了聚乙烯亚胺 (PEI)对固定化增殖细胞强度的影响 ,并研究了PEI对固定化增殖细胞酶活及最适 pH值的影响 .结果表明 ,经PEI处理后 ,尽管固定化增殖细胞酶活略有降低 ,最适 pH值由 5.5降至 4 .0 ,但凝胶强度有明显改善 .起始机械强度由 0 .0 6N/粒增加到 0 .2 79N/粒 ,而机械强度衰减率仅为未处理组的 9.2 7% .     

星点设计-响应面法优化WGA修饰柔红霉素-粉防己碱脂质体处方

目的采用响应面法优选出制备麦胚凝集素(WGA)修饰柔红霉素(DNR)-粉防己碱(TET)脂质体的最佳处方。方法采用薄膜分散-硫酸铵梯度法制备WGA修饰DNR-TET脂质体,以磷脂/胆固醇(EPC/Chol,摩尔比),磷脂/聚乙二醇2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(EPC/PEG 2000-DSPE,摩尔比),磷脂/柔红霉素(EPC/DNR,摩尔比)为自变量,以DNR和TET包封率的综合评分为因变量进行二次多项拟合。结果脂质体的最优处方为EPC/Chol=1.5,EPC/PEG 2000-DSPE=20,EPC/DNR=15,脂质体中DNR和TET包封率的综合评分为94.04%。结论星点设计-响应面法优选出了WGA修饰DNR-TET脂质体的最佳处方。     

樟芝提取物Fr.2组分对PDGF-BB活化CFSC-8B的抑制作用

为了探讨樟芝分离组分Fr.2对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的大鼠肝星状细胞(HSCs)的作用,建立PDGF-BB活化的CFSC-8B细胞模型,并对细胞增殖、迁移、细胞外基质表达及机制进行了研究。结果表明,10 ng/mL PDGF-BB作用48 h可诱导CFSC-8B细胞增殖;Fr.2的IC50值为56.46μg/mL;25μg/mL Fr.2显著抑制PDGF-BB刺激CFSC-8B细胞的增殖及其迁移,下调α-SMA、Collagen I(Col 1)、CollagenⅢ(Col 3)和Fibronectin(Fn)mRNA表达水平,并下调p-ERK、p-JNK、p-P38蛋白质表达。表明樟芝Fr.2可抑制PDGF-BB诱导的细胞增殖、迁移及细胞外基质的表达,其机制可能与抑制MAPK信号转导通路有关。     

凹凸棒土对废水中Pb(Ⅱ)吸附的初步研究

研究了凹凸棒土对重金属离子Pb(Ⅱ)的吸附性能.考察了平衡时间、凹凸棒土用量、pH等对Pb(Ⅱ)在凹凸棒土上吸附性能的影响.结果表明,凹凸棒土对Pb(Ⅱ)具有较强的吸附性能,在Pb(Ⅱ)质量浓度为9.375×10-3g/L,6 h时达到吸附平衡;凹凸棒土质量浓度在0.05 g/L时,吸附效果较好;Pb(Ⅱ)在凹凸棒土上的吸附受pH影响较大,在pH为6.5~9.5时吸附率达到最大.     

反相高效液相色谱法测定软骨中的Ⅱ型胶原蛋白

建立了高效液相色谱法测定软骨中Ⅱ型胶原蛋白的方法.以ZORBAX 300SB-C18为色谱分离柱,流动相:A为5%乙腈、0.05%TFA,B为80%乙腈(v/v),采用线形梯度洗脱;检测波长:220nm;流速:1mL/min,柱温:35℃:进样量:10μL.该方法对Ⅱ型胶原的检出限为0.02mg/mL,线性范围20～250μg/mL,样品测定的变异系数为0.51%,加标回收率为99.13%～100.06%.该方法具有快速准确、重现性好、所需样品用量少、易于自动化的优点,从而为Ⅱ型胶原提供了一种新的测定方法.