高产胞外多糖沙棘根瘤内生细菌的筛选、鉴定及其发酵条件优化

目的:从6株产胞外多糖的沙棘根瘤内生细菌中,筛选出高产胞外多糖的菌株,并对其进行鉴定和发酵条件优化。方法:利用苯酚-硫酸法联合DNS法测定菌株胞外多糖产量,筛选高产胞外多糖菌株;利用形态学观察、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析法对高产胞外多糖菌株进行鉴定;利用单因素实验法优化产多糖的发酵培养基与发酵条件,并利用正交实验法进一步优化培养基中蔗糖、KNO₃、KH₂PO₄的最适添加量。结果:筛选得到一株高产胞外多糖菌株TT207,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。经条件优化,确定其高产胞外多糖的最优培养基组分为蔗糖50 g/L,KNO₃ 10 g/L,KH₂PO₄ 8 g/L;最佳发酵条件为:培养时间48 h,培养温度34℃,初始pH6.5,接种量4%,装液量70 mL/250 mL,摇床转速140 r/min。利用优化后的发酵条件,菌株胞外多糖产量提高了6.04倍。结论:高产胞外多糖菌株枯草芽孢杆菌TT207在最优发酵条件下,胞外多糖产量达到12.39 mg/mL,是一株具有开发潜力的胞外多糖生产菌株。     

产α-葡萄糖苷酶抑制剂罗汉果内生菌株的筛选鉴定及发酵条件优化

采用对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷（PNPG）法,从罗汉果内生菌中筛选高产α-葡萄糖苷酶抑制剂（α-GI）的菌株,对该菌株进行形态观察和分子生物学鉴定。以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标,利用单因素试验及正交试验进行发酵条件优化,进一步用有机溶剂萃取发酵液后进行活性部位追踪。结果表明,从罗汉果内生菌中筛选出一株高产α-GI的菌株,编号为PD-14,被鉴定为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,该菌株产α-GI的最佳发酵条件为初始pH值7,装液量100 mL/250 mL,发酵时间4 d,发酵温度30 ℃,接种量7%。此优化条件下,菌株PD-14发酵原液对α-葡萄糖苷酶的抑制率达到91.05%,是优化前的1.5倍。α-GI为胞外产物,萃取后筛选到活性部位为正丁醇相和水相,α-葡萄糖苷酶抑制率分别为77.61%和76.70%。     

罗汉果内生菌中乙醇降解菌株的筛选及其发酵条件优化

通过传统培养分离法从广西龙胜县的罗汉果植株中分离内生菌,通过乙醇耐受性测定和重铬酸钾-硫酸法从中筛选出对乙醇具有降解活性的菌株,通过形态观察及分子生物学技术对其进行鉴定,并以乙醇降解率为评价指标,采用单因素试验及正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明,从罗汉果中分离得到68株内生菌,从中筛选到1株乙醇降解活性较高的菌株G-1,并被鉴定为尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,其降解乙醇的最优发酵条件为马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基,初始pH值6.0,接种量7%,装液量200 mL/500 mL,发酵温度32 ℃,130 r/min条件下振荡培养3 d。在此优化条件下,乙醇降解率为29.77%,表明罗汉果内生菌具有降解乙醇的潜力。     

产胞外多糖乳杆菌的菌种鉴定及其发酵条件优化

采用苯酚-硫酸法从45株乳酸菌中筛选得到1株产胞外多糖的乳酸菌NM18,对其进行形态特征观察为杆状细菌,通过16S rDNA基因序列分析对该菌株进行了菌种鉴定,PCR扩增得到1478 bp序列,PCR产物序列通过Blast软件在NCBI网站中进行同源性比较,通过MEGA 5.0软件绘制系统发育树,菌株NM18鉴定为植物乳杆菌。通过单因素试验和正交试验确定其最佳发酵条件:初始pH值6.5、发酵温度37℃、发酵时间34 h、最佳接种量1.5%,此条件下菌株NM18的胞外多糖合成量为206.8 mg/L,与基础培养基相比胞外多糖合成量提高15.2%。     

Plackett-Burman和Box-Behnken试验优化嗜热链球菌Q4F8产胞外多糖工艺

嗜热链球菌Q4F8是通过诱变筛选获得的产胞外多糖突变株,为实现工业化应用,对其发酵工艺进行优化,以提高胞外多糖产量。本研究以GM17为基础培养基,通过单因素筛选试验、响应面优化中的Plackett-Burman试验和Box-Behnken试验分析法对培养基和培养条件进行优化。结果表明,影响嗜热链球菌合成胞外多糖的因素主次顺序为pH值＞培养温度＞乳糖质量分数。其最佳工艺参数为pH 6.90、培养温度42 ℃和乳糖质量分数1.51%,且在该条件下胞外多糖产量达到191.47 mg/L,较原始菌株提高了1.3 倍。通过对原始菌株Q4进行复合诱变筛选及培养条件和培养基优化,使菌株胞外多糖产量显著提高（P＜0.01）,为该菌株和其他链球菌的工业化发酵提供参考,其胞外多糖具有较好抑菌能力,为功能性乳酸菌的开发和利用提供应用潜能。     

罗汉果内生菌中产环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选及产酶条件优化

从罗汉果内生菌中筛选高产环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）的菌株进行菌种鉴定,并对其产酶条件进行优化。利用CGTase快速筛选法从罗汉果内生菌中筛选获得一株高产CGTase的菌株,编号为ND-6,经形态学和分子生物学鉴定其为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。通过单因素和正交试验优化得到其产CGTase条件为1.0%环糊精作碳源,1.0%蛋白胨作氮源,初始pH值为8.0,装液量70 mL/250 mL,发酵温度40 ℃。在此优化条件下,菌株所产CGTase酶活达到9 753 U/mL,是优化前的1.43倍。     

一株高产胞外多糖乳酸菌的分离鉴定及其产胞外多糖的研究

该研究从自然发酵剁辣椒中分离筛选一株高产胞外多糖的乳酸菌,经形态观察、生理生化试验及分子生物学对其进行鉴定,并探索菌株产胞外多糖的最佳碳源和最佳培养时间。结果表明,筛选并鉴定得到一株高产胞外多糖的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）Y-20。菌株Y-20产胞外多糖的最佳碳源为麦芽糖,且在MRS培养基中培养16 h时,OD600 nm值达到最大（3.62）,胞外多糖产量达到最高,为242.95 mg/L。     

副球菌TH21-44 胞外多糖的发酵条件优化及其乳化性能

针对分离筛选的一株产胞外多糖菌株TH21-44，通过形态观察、生理生化试验和16S rRNA 基因系统发育分析进行种属鉴定，采用单因素和响应面法优化胞外多糖的发酵条件，并分析胞外多糖的乳化性能。结果表明，菌株TH21-44 为副球菌（Paracoccus sp.）；最佳产糖条件为pH7.1、接种量6.1%、温度28 ℃、葡萄糖7.2 g/L、酵母浸粉3.0 g/L、K2HPO4·3H2O 0.3 g/L、MgSO4·7H2O 0.05 g/L 及丙酮酸钠0.3 g/L，该条件下胞外多糖产量为188.89 μg/mL，是优化前的3.18 倍；所产胞外多糖具有良好的乳化性能，对葵花油24 h 时的乳化能力为69.62%，优于吐温80。该研究为微生物胞外多糖的菌物资源开发和应用提供了依据和参考。     

产抗氧化胞外多糖海洋细菌的筛选及发酵产糖培养基优化

从连云港海域分离海洋细菌,并从中筛选获得一株产抗氧化活性较强的胞外多糖的细菌菌株OST23a。通过形态学、生理生化鉴定及16S rRNA 分析,将菌株OST23a 鉴定为Bacillus subtilis。采用单因素试验确定菌株OST23a 发酵产胞外多糖的最佳碳、氮源和金属离子分别为正己烷、酵母提取物和CaCl2。采用正交试验确定了菌株OST23a 产胞外多糖培养基的配方为：正己烷1.5%、酵母提取物0.1%、K2HPO4 0.3%、KH2PO4 0.1%、CaCl20.1%。菌株在该培养基产胞外多糖可达到9.06mg/L。     

产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定

乳酸菌胞外多糖具有优良的功能性质。根据产胞外多糖乳酸菌的性质,开发了菌落拉丝法作为产胞外多糖乳酸菌的简便初筛方法。以分离菌落在MRS筛选培养基上的拉丝长度为初筛指标,以胞外多糖产量(硫酸-苯酚法)为复筛指标,从自然发酵酸乳和自然发酵蔬菜中分离得到了3株胞外多糖产量较高的乳酸菌,经API细菌鉴定系统鉴定,分别被鉴定为短乳杆菌BT0898、植物乳杆菌NYC30和鼠李糖乳杆菌YHOC137。     

无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白的分离鉴定和抗菌作用的研究

对无花果内生菌WHG1及其胞外蛋白进行分离鉴定,并探讨其抗菌作用。通过形态和生理生化特性及16sRNA序列分析方法鉴定菌株。采用滤纸片和牛津杯法抑菌实验研究其抗菌作用。用80%硫酸铵盐析,Sephadex G-100凝胶层析,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱分离纯化内生菌的胞外抗菌蛋白,通过SDS-PAGE电泳测定其分子质量。WHG1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),它对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、酵母菌、黑曲霉等5种食源性致病菌和食品中常见污染菌均有较强的拮抗作用。WHG1胞外蛋白对大肠埃希氏菌和黑曲霉有较强的抗菌作用,该抗菌蛋白分子质量25～53ku。无花果内生菌WHG1具有产胞外抗菌蛋白的特性。     

来宾酒糟酸菜中降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定及发酵工艺研究

该研究采用钙溶圈法及MRS-胆固醇培养基从来宾酒糟酸菜汁中分离筛选具有降胆固醇能力的乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,同时对其耐酸性、耐胆盐性能进行研究,并以胆固醇去除率为考察指标,通过单因素试验及正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选得1株具有去除胆固醇能力的乳酸菌,编号为XL-02,经鉴定,菌株XL-02为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其具有较好的耐酸能力和胆盐耐受性。在pH2.0的酸性环境下培养24 h,菌株存活率为3.14%;在胆盐含量为0.3%条件下培养24 h,菌株存活率为12.17%。菌株XL-02去除胆固醇的最优发酵条件为以MRS液体培养基为发酵培养基,初始pH值6.0,接种量4%,发酵温度39 ℃,发酵时间72 h。在此优化条件下,胆固醇去除率为（61.56±0.08）%。     

Some taxonomical characteristics of encapsulated Lactobacillus sp. KPB-167B isolated from kefir grains and characterization of its extracellular polysaccharide

A capsular polysaccharide-producing strain KPB-167B isolated from kefir grains was identified as a homofermentative Lactobacillus. The carbohydrate fermentation pattern and DNA base composition of the strain were different from those of other capsular Lactobacillus species previously isolated from kefir grains. The polysaccharide produced by Lactobacillus sp. KPB-167B was found similar to kefiran by 13C-NMR and methylation analysis. Lactobacillus sp. KPB-167B could grow and produce capsular polysaccharide in MRSL medium with better yield than L. kefiranofaciens, which suggested that it is suitable for kefiran production.     

高产酸扣囊复膜酵母的筛选与培养基配方优化

该研究对10种不同的米酒曲和黄酒曲中的高产酸酵母菌进行了分离、筛选及鉴定,并以酵母菌的生物量为评价指标,采用单因素试验和响应面法,对菌株的液态发酵培养基进行优化。结果表明,经过分子生物学鉴定,共分离获得6株扣囊复膜酵母（Saccharomycopsis fibuligera）。通过菌株产酸能力和耐受性的比较,筛选到一株产酸率高、耐高温和乙醇能力强的扣囊复膜酵母菌株3-1,其总酸（以乳酸计）产量达5.4 g/L。最佳培养基配方为：糖蜜7.5 g/L,葡萄糖7.7 g/L,大豆蛋白胨1.7 g/L,酵母浸粉1.7 g/L。在此优化条件下,菌株3-1的生物量达2.45×108个/mL,总菌数比对照培养基提高了63.3%。     

糖胁迫下鲁氏接合酵母的代谢指纹分析

以高糖渗透压培养基（高渗培养条件,糖质量分数80%）和基本培养基分别培养鲁氏接合酵母,采用紫外-可见分光光度计测定其生长OD值的变化,采用硅烷化衍生-气相色谱-质谱联用技术检测酵母胞内物质成分,采用顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术检测胞外物质成分,并用主成分分析（principal components analysis,PCA）、正交偏最小二乘方判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）模型对其分析。结果表明,高渗培养条件下鲁氏接合酵母呈对数生长,在对数期取样,测得胞外物质共36?种;基本培养条件下的鲁氏接合酵母测得胞外物质共47?种;基本培养条件下的酿酒酵母测得胞外物质共45?种。在高渗环境下,鲁氏接合酵母以醇类、酯类居多,没有产生酮类化合物。PCA模型可以完全把3?个样本分开,说明差异性显著。PLS-DA模型的R2、Q2都接近1,说明可信度较高,并通过VIP（variable importance in the projection）值挑选出高渗培养条件下鲁氏接合酵母的特征性物质7-辛烯酸乙酯、3-（甲硫基）丙基乙酸酯、2-十三烷醇、十五烷酸-3-甲基丁酯、9-癸烯酸乙酯、3-（甲硫基）-1-丙醇、2-癸醇。鲁氏接合酵母胞内物质共检测出83?种,高渗培养条件和基本培养条件下鲁氏接合酵母相同物质有23?种,高渗培养条件下鲁氏接合酵母差异性物质有27?种,差异性物质说明鲁氏接合酵母能够耐高渗透压,会产生一些糖类、醇类、酸类等物质来保护细胞使其能够在高渗培养条件下生长,这些物质涉及糖代谢、能量代谢等。研究结果为今后研究鲁氏接合酵母耐高糖渗透压方面提供理论依据。     

白酒糟纤维素降解菌的分离筛选及发酵条件优化

该试验将松针腐殖土样品在酒糟富集培养基中富集,采用刚果红染色和滤纸崩解初筛,3,5-二硝基水杨酸（DNS）法复筛筛选高酶活的纤维素降解菌,对其进行分子生物学鉴定,并对其产酶条件进行优化,结果表明,筛选得到一株高酶活的纤维素降解菌M5,经ITS rDNA序列分析鉴定为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）。其在发酵温度20 ℃、初始pH值为3、酒糟为碳源、牛肉膏为氮源,发酵5 d时羧甲基纤维素（CMC）酶活为9.17 U/mL,滤纸酶活为3.50 U/mL;菌株M5所产的纤维素酶的最适反应温度为55 ℃。     

柳州酸笋中降亚硝酸盐乳酸菌的筛选及鉴定

为了获得适用于柳州酸笋发酵的降亚硝酸盐乳酸菌,利用MRS培养基对柳州酸笋中的乳酸菌进行分离、纯化及鉴定,并探讨影响菌株降解亚硝酸盐能力的因素。结果表明,共分离获得22株乳酸菌,用盐酸萘乙二胺法对这22株乳酸菌进行降亚硝酸盐能力测试,得到一株降解能力较强的乳酸菌LC-3-3,经分子生物学鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）;该菌株在以葡萄糖为碳源（20 g/L）、蛋白胨为氮源（10 g/L）、接种量为6%、pH值为6.0、温度为37 ℃的条件下,亚硝酸盐的降解率为76.58%,降解效果较好。     

产紫红色素菌株的筛选及诱变

以土壤和3种水果为样品,马铃薯-抗生素培养基为基质,采用稀释平板法分离产紫红色素的菌株,并以产紫红色素菌株为出发菌株进行紫外诱变.结果表明:从苹果表面上获得1株产紫红色素的真菌,通过个体形态和菌落特征初步分析为镰孢茵属菌株(fusarium sp.),该菌以马铃薯-蔗糖(35%)为基质发酵,获得胞内紫红色素OD值为0.790,胞外色素OD值为0.538,该突变菌株获得其胞内紫红色素OD值为0.895,胞外色素OD值为0.503,且该突变菌株产生色素的速度要快于出发菌株1 d.