豆豉纤溶酶纳米脂质体的肠吸收效率研究

采用外翻肠囊法和大鼠在体单向灌注法,以肠吸收速率(Ka)和表观渗透系数(Papp)为指标,考察豆豉纤溶酶纳米脂质体的小肠吸收部位及效率。结果显示,由外翻肠囊法测得豆豉纤溶酶纳米脂质体的回肠段Ka和Papp分别为3.25×10-2μg/s和2.355×10-6cm/s,且吸收速率随着浓度的升高而降低,最终出现饱饮现象。由大鼠在体单向灌注法测得的Ka和Papp分别为(1.49±0.22×10-3)μg/s和(7.90±1.46)×10-5cm/s。上述两种方法均表现出豆豉纤溶酶纳米脂质体在回肠的吸收效率为最高,这可能与回肠中大量存在Peyer’s淋巴结有关,而Peyer’s淋巴结中存在的M细胞可能导致饱饮现象。     

外翻肠囊法考察复合红花籽油的肠吸收特性

该研究旨在初步考察复合红花籽油的肠吸收特性。采用外翻肠囊法对其肠吸收部位、时间、给药浓度进行研究，通过气相色谱-质谱法（GC-MS）测定肠收集液中亚油酸（Linoleic Acid，LA）及α-亚麻酸（α-Linolenic Acid，ALA）含量，通过计算吸收转运参数、吸收速率参数分析其肠道转运机制。不同肠段中，其主要成分LA与ALA均能在十二指肠（LA：2.71 mg；ALA：1.60 mg）与空肠（LA：1.89 mg；ALA：1.43 mg）中被检出，通过计算不同部位透过药量（M）、药物吸收转化率（A）和药物剩余百分数（R），结果显示十二指肠段中LA、ALA的M高于空肠段，A与空肠段接近，R低于空肠段，因此十二指肠为最佳吸收肠段。在120 min时，LA和ALA的Pappi（瞬时表观渗透系数）皆高于其他时间点，因此最佳吸收转运时间为120 min。在给药倍数为2.0倍时，肠囊液中的LA和ALA浓度最高，分别为0.35、0.19 mg/mL，因此最佳给药浓度为200 mg/mL。结果表明复合红花籽油的肠吸收特性可能为具有时间与浓度依赖性的被动运输模式且在十二指肠段中单向转运。     

胶束化对Caco-2上皮细胞叶黄素吸收和转运的影响

本试验为研究胶束化促进叶黄素肠上皮细胞转运的特性,采用体外消化模型探究胶束化处理对叶黄素生物利用度的影响以及Caco-2细胞模型测定胶束化对叶黄素肠细胞摄取、表观渗透系数和细胞内吞的影响。结果显示:随浓度升高胶束化叶黄素生物可给率先增大后减小,浓度为6×10-5 mol/L时胶束化叶黄素的生物可给率最高,是叶黄素单体的1.42倍;叶黄素胶束化显著促进了其细胞吸收量,细胞内积累量是单体的2.6倍。表观渗透系数(P_app)测定表明胶束化叶黄素累积转运分数大于1.5%,且被动扩散为其跨膜输送主要途径;胶束化后,P_app(B→A)与P_app(A→B)比值明显降低。进一步通过细胞内吞抑制实验发现制霉菌素(Nystain)、3-羟基-2-萘甲酸[(3,4-二羟基苯基)亚甲基]酰肼(Dynasore)均能抑制胶束化叶黄素的转运(P<0.05),而5-(N-乙基-N-异丙基)阿米洛利(EIPA)无显著抑制作用(P>0.05)。以上研究结果表明,胶束化处理显著促进了叶黄素的生物利用度,其在肠细胞中的跨膜吸收途径以被动扩散为主,兼具网格蛋白介导和小窝/脂筏蛋白介导的细胞内吞途径。     

基于Caco-2细胞单层与大鼠小肠模型的大豆皂苷Ⅰ和Ⅱ经上皮传递的变化研究

利用Caco-2细胞单层与大鼠小肠模型研究大豆皂苷Ⅰ和Ⅱ的吸收变化与机制。在Caco-2细胞单层中,大豆皂苷Ⅰ和Ⅱ从肠腔侧到基底侧的表观渗透系数（apparent permeability coefficients,Papp）随时间的延长趋向平稳,前120 min近似线性,且随浓度增大,斜率减小,Papp值分别为（1.02×10－6～3.41×10－6）cm/s和（0.9×10－6～3.05×10－6） cm/s;传递的饱和性、双侧Papp比率＞1.5以及线粒体呼吸链抑制剂叠氮化钠的抑制作用表明了两者的主动转运机制。抑制剂维拉帕米没有提高大豆皂苷Ⅰ和Ⅱ的吸收,排除了p-糖蛋白介导的外排;吸收促进剂按照冰片＞脱氧胆酸钠＞卡波姆934P＞聚山梨酯80的强弱提高两者的吸收,壳聚糖则未能加强渗透。跨膜转运也表现出组织差异性：两者在大鼠空肠的Papp是十二指肠和回肠的2 倍多。因此,控制的传递应能提高大豆皂苷Ⅰ和Ⅱ的小肠吸收以便两者实施它们的生理功能。     

大鼠肠粘膜组织鲜味受体传感动力学研究

鲜味受体不仅存在于味蕾组织,也存在于肠黏膜等组织中。本研究以SD大鼠为研究材料,通过固定化肠黏膜组织制成传感器,对代表性鲜味物质:谷氨酸钠、肌苷酸二钠、鸟苷酸二钠进行了受体传感动力学测定。结果表明,鲜味受体与配体呈现出与酶-底物相似的双曲线动力学特征。通过双倒数作图法,求出分别与其受体作用的激活常数K为:K_a=1.136×10-13 mol/L,K_b=1.443×10-13 mol/L,K_c=2.080×10-13 mol/L。说明肠粘膜组织对这三种鲜味物质的传感敏感性排序为:谷氨酸钠、肌苷酸二钠、鸟苷酸二纳。根据这3种鲜味成分的动力学特性,计算出谷氨酸钠、肌苷酸二钠、鸟苷酸二钠平均每个细胞上的受体个数分别为:2.30、2.89、4.16/cell;由此看出K越低,说明激活细胞内的活性越高,则信号越敏感,则达到受体-配体饱和时平均每个细胞上受体数目越少。谷氨酸钠、肌苷酸二难、鸟苷酸二钠信号放大倍数分别为:N₁=1.9055×104,N₂=1.6642×104,N₃=6.0799×103。此结果和所得到的活性常数与平均每个细胞上的受体数量相对应,说明配体与受体作用产生的信号输出的效率越高,则信号放大倍数也越大。综上,该传感器可定量化描述肠粘膜组织中的受体对相应配体的传感作用(激活常数)、效应受体个数和细胞信号级联放大作用,动力学参数可以为评价肠黏膜系统的各种受体对相应配体的传感活性及生理作用提供评价方法和科学依据。     

应用前沿亲和色谱评价5 种知母糖苷类化合物的α-淀粉酶抑制活性

以硅胶为载体,制备α-淀粉酶亲和色谱柱,以线扫循环伏安法为检测方法,评价知母提取物的α-淀粉酶抑制活性。首先考察固定化条件对固定化酶的影响以及亲和色谱柱的稳定性。其次利用前沿亲和色谱检测5 种知母糖苷类化合物（新芒果苷、芒果苷、知母皂苷AⅡ、知母皂苷BⅡ、知母皂苷BⅢ）的α-淀粉酶亲和力。最后检测化合物的α-淀粉酶抑制活性。结果表明5 种化合物的α-淀粉酶结合力大小排序为：新芒果苷（Kd＝0.230 5 μmol/L）＞芒果苷（Kd＝0.299 5 μmol/L）＞知母皂苷BⅡ（Kd＝0.312 4 μmol/L）＞知母皂苷BⅢ （Kd＝0.316 2 μmol/L）＞知母皂苷AⅡ（Kd＝0.453 3 μmol/L）,其排序结果与样品的α-淀粉酶抑制活性一致。说明前沿亲和色谱可以用来定量检测化合物的α-淀粉酶抑制活性,且可根据亲和力的大小将化合物的抑制活性进行排序。     

海洋鱼低聚肽螯合铁的小肠吸收特性研究

目的：探究海洋鱼低聚肽螯合铁(MCOP-Fe)的小肠吸收特性,并与传统补铁剂硫酸亚铁(FeSO₄)进行比较。方法 ：建立体外大鼠外翻肠囊模型,选取雌性Sprague Dawley大鼠40只,随机分为8组【低、中、高剂量(3,5,10μg/mL)MCOP-Fe组;低、中、高(3,5,10μg/mL)FeSO₄组;10μg/mL MCOP-Fe+500μg/mL植酸组;10μg/mL FeSO₄+500μg/mL植酸组】,用肠道单位面积铁累计吸收率Q评价不同肠段吸收铁的效力。结果：1)中、低、高浓度MCOP-Fe组在十二指肠、空肠及回肠的Q值随浓度呈现梯度增加,而FeSO₄组没有类似的趋势;2)中、低浓度FeSO₄组的Q值几乎都有高于MCOP-Fe组的趋势,而在高浓度时相反;3)添加500μg/mL植酸后,高浓度MCOP-Fe组和FeSO₄组Q值均有下降,高浓度FeSO₄组下降更为显著(P<0.05)。结论：在3～10μg/mL剂量...     

大豆皂苷I与II及苷元B对黄曲霉毒素B1和苯并芘突变效应的拮抗

本研究确认了大豆皂苷I与II及苷元B对黄曲霉毒素B1和苯并芘的抗突变作用。Ames试验中，除了最小剂量时大豆皂苷I与II未能显著抑制移码突变外，3个受试物均明显抑制黄曲霉毒素B1和苯并芘诱发的TA98和TA100回复突变。而且，除了最小剂量时大豆皂苷I与II未能显著抑制苯并芘与DNA的结合外，3个受试物均明显抑制人肝癌（HepG2）及支气管上皮（BEAS-2B）细胞中突变剂与DNA加合物的形成。大体上，苷元B比大豆皂苷I与II更有效地抑制移码与碱基置换突变和加合物的形成。因此，3个食源活性成分不仅抑制基因突变同时也拮抗突变剂诱导的DNA损害。     

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的：研究霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP）的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法：通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果：DHP在质量浓度为25、50、100 μg/mL和200 μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论：DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。     

UPLC法测定大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量

目的：建立同时测定大豆制品及相关制剂中4种大豆异黄酮类化合物大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素含量的超高效液相色谱法。方法：色谱柱：Acquity UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm,1.7μm),流动相：A为体积分数0.2%甲酸溶液,B为乙腈,梯度洗脱;流速：0.4mL/min;检测波长：254nm,柱温：30℃。结果：线性范围：大豆苷0.625～40.0mg/L(r=1.000),染料木苷0.625～40.0mg/L(r=0.9999),大豆苷元0.04～2.56mg/L(r=0.9997),染料木素0.04～2.56mg/L(r=0.9996)。大豆和Natrol? soy isoflavones中大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素平均回收率为98.5%～99.8%。结论：本方法简便、快速、灵敏、准确,适用于大豆制品及相关制剂中大豆异黄酮含量测定。     

基于还原氧化石墨烯的电化学适配体传感器对黄曲霉毒素M1的检测

本实验基于还原氧化石墨烯（RGO）构建了一种用于黄曲霉毒素M₁（AFM₁）检测的电化学适配体传感器。采用红枣汁还原氧化石墨烯（GO）制备RGO,RGO通过滴涂法修饰在玻碳电极（GCE）表面,利用电沉积法将纳米金修饰在RGO/GCE上,AFM₁的适配体（Apt）通过Au-S键固定在AuNPs/RGO/GCE电极表面用于靶标AFM₁的捕获。当AFM₁存在时,AFM₁与适配体特异性结合形成AFM₁-Apt复合物,该复合物阻碍了电子的传递,导致电化学信号减弱。对RGO的制备条件进行优化,利用差示脉冲伏安法（DPV）监测电极表面的电化学信号,并对不同类型的毒素（黄曲霉毒素B₁、黄曲霉毒素B₂、赭曲霉毒素A和伏马毒素B₁）、不同浓度的AFM₁（1×10?7~5×10?4 ng/mL）以及羊乳样品进行检测以确定电化学适配体传感器的特异性、灵敏性和实用性。结果表明,GO:红枣汁=2:1（V:V）,pH=11时所制备的RGO的导电能力最强。传感器的电信号与AFM₁浓度的对数呈线性关系,检测范围为1×10?7~5×10?4 ng/mL,检测限为3.3×10?5 pg/mL,同时所建立的方法仅对AFM₁的检测有响应,而对干扰毒素无响应,说明电化学适配体传感器的特异性良好。使用建立的AFM₁电化学适配体传感器对羊奶中的AFM₁含量进行测定,发现所构建的传感器具有很高的灵敏性和良好的选择性,有望应用于食品工业中真菌毒素的快速、准确检测当中。     

益生菌复合制剂对头孢曲松钠作用小鼠的抗氧化指标、细胞因子及肠道菌群的影响

目的:探究长双歧杆菌BB536和乳双歧杆菌HN019组成的益生菌复合制剂对头孢曲松钠引起的肠道菌群失调的改善效果。方法:头孢曲松钠（2 mg/g）连续灌胃小鼠5 d,构建肠道菌群失调模型小鼠,然后随机分为模型组,益生菌复合制剂低剂量组（2×105 CFU/g）、中剂量组（4×105 CFU/g）、高剂量组（1.2×106 CFU/g）,另设正常鼠为对照组,第6 d起各剂量组灌胃相应剂量的益生菌复合制剂,对照组和模型组灌胃等体积的生理盐水,连续灌胃30 d。灌胃结束后无菌收集小鼠粪便对肠道菌群计数,并进行16S rDNA高通量测序分析菌群的多样性以及结构,测定血清中白细胞介素2（Interleukin-2,IL-2）、白细胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、白细胞介素1β（Interleukin-1β,IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）水平,测定空肠和肝脏中丙二醛（Malondialdehyde,MDA）、总超氧化物歧化酶（Total Superoxide Dismutase,T-SOD）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）和谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-PX）水平。结果:给药头孢曲松钠后,血清中IL-2、IL-6、IL-1β和TNF-α水平有上升趋势,空肠中MDA水平显著上升（P<0.05）且T-SOD水平显著下降（P<0.05）,在高剂量的益生菌复合制剂的干预下,IL-6和IL-1β水平显著降低（P<0.05）,IL-2和TNF-α水平极显著降低（P<0.01）,此外空肠和肝脏中的MDA水平均明显下降、T-SOD水平显著提高（P<0.05）,GSH-PX水平极显著提高（P<0.01）,空肠中GSH水平极显著提高（P<0.01）。在肠道微生物方面,抗生素造损后再灌胃益生菌复合制剂,与灌胃益生菌复合制剂前相比小鼠粪便中肠球菌和肠杆菌数量降低,乳杆菌和双歧杆菌数量提高,微生物多样性分析结果表明各剂量组与模型组相比微生物丰富度有所恢复,且中、高剂量组预测的肠道功能与对照组相比更为接近。结论:益生菌复合制剂可以促进抗氧化物质产生,降低细胞因子水平,促进有益菌的繁殖,提高肠道菌群的丰富度,改善了由头孢曲松钠引起的肠道菌群失调状态。     

Behaviour of soyasapogenol B under optimised hydrolysis and ESI mass spec conditions

Soyasaponins are oleanane triterpenoids found in soy (Glycine max Merr). The analysis of the main aglycone (soyasapogenol B) is hampered by inconsistent ion fragmentation patterns produced during MS analysis. The greatest (p < 0.05) increase in soyasapogenol B during acid hydrolysis HCl (5% (v/v)) was at 100 °C (84.59 ± 4.73 μg/ml), followed by 120 °C (69.82 ± 6.20 μg/ml) and 80 °C (46.54 ± 6.41 μg/ml). The capillary temperature (LC–ESI-MS) of 220 °C produced the greatest (p < 0.05) intensity of soyasapogenol B ion. Temperatures between 200 and 250 °C consisted the optimum temperature range for analysing soyasapogenol B. At low capillary temperatures (<200 °C), the soyasapogenol B ion ([M?H]^? = 457.4) was converted to an ion m/z at 441, while, at temperatures ?250 °C the soyasapogenol B ion produced ions m/z at 440 and 437. We report an analysis procedure for detecting intact soyasapogenol B molecular ion without the typical fragmentation reported in the literature.     

传统汤饭中面片的微波干燥动力学模型的建立

以新疆传统汤饭中的面片为原料,研究微波功率、火力及装载量对其干燥特性的影响,以面片在微波干燥过程中的干基含水率、干燥失水速率及水分比的变化趋势,得出面片在微波干燥过程中的失水规律。结果表明:微波功率越大,火力越大,装载量越小,干基含水率下降越快,干燥速率及水分比变化越大,并通过绘制LnMR-t及Ln（?LnMR）?Lnt的关系曲线,表明Page方程能较好反映面片微波干燥规律,得出不同微波功率（G）下Page方程:ln（?lnMR）₁=8.3519×10?3G+8.1588×10?6G2?1.5967+（0.45334+2.9425×10?3G?2.285×10?6G2）lnt;不同微波火力（H）下Page方程为ln（?lnMR）₂=2.1635×10?2H?6.44063×10?5H2?4.39914+（1.4709?4.7125×10?3H+2.0625×10?5H2）lnt;不同载物量（S）下Page方程为:ln（?lnMR）₃=4.8846×10?2S?4.7936×10?4S2?1.57847+（0.12282+2.71275×10?2S?1.319375×10?4S2）lnt,并结合面片感官品质及工厂生产确定功率、火力、面片载物量分别取550 W、60%、100 g为较好的微波干燥组合,通过验证该模型具有较强的可行性,为面片微波干燥加工工艺提供技术支持。     

甲烷氧化菌素-铜配合物模拟过氧化物酶检测面粉中的过氧化钙

通过紫外分光光度计检测CaO₂在288 nm处吸光值的变化,建立了一种快速、准确的Mb-Cu模拟过氧化物酶法来检测面粉中的CaO₂,并讨论了Mb-Cu浓度、反应温度、pH、反应时间对催化过程的影响。结果表明,当Mb-Cu浓度为3.9×10?6 mol/L、反应温度为60 ℃、反应时间为180 s时,CaO₂在浓度为0～8 mg/L时与288 nm处吸光度的变化值呈线性关系,线性方程为y=0.00643+0.02117x,R2=0.99281。方法的检出限为1.82×10?2 mg/L,平均加标回收率为98.2%～100.6%,相对标准偏差RSD为0.49%～1.32%。此方法快速、准确,可用于对实际样品的测量。     

白杨素及其衍生物在Caco-2细胞模型中的转运规律

目的 研究白杨素（chrysin,ChR）及其衍生物6,8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素（dFMAChR）在人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型的转运规律.方法 建立精确灵敏、重复性好的ChR及dFMAChR的高效液相色谱（HPLC）检测方法;MTT（四甲基偶氮唑盐）法测定ChR和dFMAChR对Caco-2细胞的毒性作用.体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;确定ChR和dFMAChR转运的最佳pH条件.评价时间、浓度对dFMAChR和ChR的双向转运的影响,计算转运速率及表观渗透系数（Papp）,并与阳性对照药普萘洛尔进行比较.结果 ChR和dFMAChR的转运最佳介质pH分别为6.0和6.5,两者的转运无论是Apical侧（A侧）到Basolateral侧（B侧）还是B侧到A侧,均具有时间依赖性和浓度依赖性.ChR和dFMAChR的平均Papp （A-B）分别是（1.60±0.15）×10-6 cm/s和（10.63±0.35）×10-6 cm/s,平均Papp （B-A）分别是（1.22±0.17）×10-6 cm/s和（10.43±0.28）×10-6 cm/s,两者Papp （A-B） ＞Papp （B-A）,且Papp （A-B） /Papp（B-A） ＜2.结论 在Caco-2模型中,dFMAChR和ChR均由被动扩散方式转运,dFMAChR的转运速率明显高于ChR,吸收接近普萘洛尔,属于吸收良好的化合物.     

菊芋微波真空干燥过程的水分扩散特性及模型拟合

为了探究菊芋微波真空干燥过程中水分变化规律,本文考察了不同微波强度对菊芋干燥特性的影响。采用Weibull分布函数和Dincer模型对干燥曲线进行拟合,并结合尺度参数(α)、形状参数(β)、滞后因子(G)、干燥系数(S)等分析了干燥过程的传热、传质机制。结果表明:除1.28 W/g外,菊芋整个干燥过程分为升速、恒速和降速3个阶段,且微波强度越大,最大干燥速率愈高,升速阶段历时越短。β介于1.314～2.175之间,表明干燥过程并非完全由内部扩散主导。G为1.043～1.188,且随微波强度增大而减小。毕渥数(Bi)介于0.179～5.762之间,说明干燥过程物料温度变化由内部导热和边界对流换热共同控制。基于Weibull分布函数、Dincer模型和Fick第二定律得到的水分扩散系数分别为D_cal=5.922×10?8～2.717×10?7 m2/s、D_eff=7.570×10?7～1.799×10?5 m2/s、D*_eff =2.353×10?9～7.546×10?9 m2/s;同样微波强度下,其大小依次为:D_eff>D_cal>D*_eff。2.32 W/g下,干燥样品亮度(L*值)最大,为69.05。微波强度愈大,样品色泽参数a*和b*值越小。SEM图片显示:适宜的微波强度下,干燥菊芋细胞结构规则,部分区域含有孔洞;1.28 W/g样品的细胞皱缩明显,而高微波强度下(2.70和3.04 W/g)干燥样品部分组织结构坍塌,细胞内物质外泄。     

Survival and in vivo adhesion of human isolates Lactobacillus gasseri LF221 and K7 in weaned piglets and their effects on coliforms, clostridia and lactobacilli viable counts in faeces and mucosa

In in vivo study on 24 weaned piglets (8 per group), the survival rates of human isolates Lactobacillus gasseri K7 and LF221 were quantified by selective enumeration on MRS agar with rifampicin, and the presence of both strains in intestinal mucosa was examined. Faeces from individual animals were analysed for the number (cfu/g) of coliforms, lactobacilli, clostridia and both of the two probiotic strains during 2-weeks probiotic application period (5 x 10(10) cfu of individual strain/day) and 1 week after the probiotic treatment was ceased. Samples of duodenum, jejunum and ileum of sacrificed animals (5th or 20th day) were also examined microbiologically. A great variability in the microflora of faeces and mucosa was observed even between equally treated animals. The survival of both Lb. gasseri strains was established by their detection in the faeces (2.5 x 10(5) to 3.3 x 10(5) cfu of K7 strain/g faeces; 4.5 x 10(5) to 5 x 10(5) cfu of LF221 strain/g). In two animals, the LF221 or K7 viable cells were found in the faeces 6 d after ceasing probiotic application. In both animals from the group fed with Lb. gasseri K7 that were sacrificed 5 d after weaning, the presence of K7 strain was found either in the mucosa of duodenum (140 cfu/10 cm2) and jejunum (170 cfu/10 cm2) or in the ileum (1600 cfu/10 cm2). LF221 cells were detected in the ileal mucosa of one piglet (820 cfu/10 cm2). The results demonstrated the capability of both tested strains of in vivo adhesion to intestinal mucosa and of temporary colonisation of the piglets' intestine.