米曲霉氨基酰化酶纯化方法的研究

比较了盐析法和有机溶剂沉淀法对于米曲霉氨基酰化酶的纯化效果。分别使用硫酸铵、无水乙醇和丙酮对米曲霉氨基酰化酶进行纯化，结果发现：有机溶剂沉淀法的纯化效果优于盐析法。采用丙酮二次沉淀法纯化的氨基酰化酶比酶活为93.20U／mg，纯化倍数为3．26：通过乙醇二次沉淀，得到的酶液比酶活为93.22U／mg，纯化倍数为3．10，而采用盐析法纯化的酶液的比酶活为56.01U／mg，纯化倍数为2.06。从酶的纯化效果方面考虑，丙酮沉淀法最佳，但从工业生产的可行性方面考虑，乙醇沉淀法较好。     

微生物产弹性蛋白酶制取方法的探讨

目的探讨微生物产弹性蛋白酶的制取方法。方法将产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中,摇床发酵培养后,离心收集发酵液,并经过硫酸铵盐析、DEAE-Sephadex A-25阴离子交换层析、SephadexG-75凝胶过滤层析等步骤纯化弹性蛋白酶。结果经过上述纯化步骤,弹性蛋白酶纯化倍数达到了33倍,回收率达到12%,酶蛋白比活达到了528 U/mg。结论此纯化工艺较为理想,获得了较纯的酶蛋白。     

梅奇酵母氨基甲酸乙酯酶分离纯化与酶学性质分析及其对葡萄酒香气的影响

为了研究梅奇酵母所产生氨基甲酸乙酯（Ethyl Carbamate,EC）酶的性质,通过硫酸铵盐析、离子交换层析的方法对EC酶进行分离纯化,并对纯化后EC酶的酶学性质进行了分析。结果表明,纯化后EC酶对比纯化前的酶活提高了约1.2倍。纯化后EC酶最适反应温度为35 ℃,在25~45 ℃之间热稳定性较强;最适pH为5.5,在pH5~6时该酶稳定性强,即酸稳定性强,碱稳定性较差。当乙醇体积分数为12%~14%时,EC酶具有一定酶活。底物特异性结果表明,该EC酶对EC及其前体物质（尿素）具有较高的降解能力,且对于成品葡萄酒挥发性香气成分影响不显著。     

一种简便易行的几丁质酶纯化法

传统的纯化微生物产几丁质酶的方法步骤繁琐、不易控制、得率较低。经过实验探索得出一种较简单、快速、并可批量处理的几丁质酶纯化法。将含有几丁质酶的发酵上清液与胶体几丁质混合后离心,几丁质酶随胶体几丁质沉降而与其他成分分离,用蒸馏水洗涤沉淀,再用蒸馏水重悬,放入30℃恒温箱温育72 h,胶体几丁质被完全水解,从而得到纯几丁质酶。此纯化方法条件温和,可保证纯化后的酶保持其生物活性。SDS-PAGE检测及比色法对其纯度检测表明几丁质酶纯化回收率达到88.53%。     

果胶内切酶在果胶化学结构解析上的应用

探讨了果胶内切酶在果胶化学结构解析上的实际应用。商品果胶酶经过Sepharose CL-6B凝胶柱层析分离纯化,得到纯化果胶内切酶。利用纯化果胶内切酶对果胶物质的化学结构进行分析比较。     

葡萄汁有孢汉逊酵母β-葡萄糖苷酶的提取与纯化

研究葡萄汁有孢汉逊酵母β-葡萄糖苷酶的提取纯化步骤,为其增香酿造特性的研究提供技术支持。首先将优选酵母细胞在振幅为80的超声波下破碎20 min,进行β-葡萄糖苷酶的酶活定位,然后对优选菌株的培养条件和糖苷酶的分离纯化条件进行优化。结果表明,供试酵母菌株的β-葡萄糖苷酶为胞外酶,其最佳培养及提取纯化工艺:酵母在28℃发酵培养基中振荡培养72 h,4℃10 000 r/min离心10 min,收集上清液,然后经80%硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose-FF阴离子交换层析与Sephacryl S-200凝胶过滤层析3步纯化,得到β-葡萄糖苷酶液。纯化后β-葡萄糖苷酶回收率为6.91%,比酶活由0.081 U/mg提高至1.998 U/mg,为纯化前的24.56倍,纯化效果明显。     

食品酶的生产及应用

<正>酶的生产与分离纯化酶的生产指通过人工操作而获得所需的酶技术过程,酶的生产方法可分为3种方法,分别为:提取分离法、生物合成法、化学合成法。提取分离法提取分离法是采用各种提取、分离、纯化技术从动植物器官、组织、细胞或微生物细胞中提取酶出来,再进行分离纯化的过程。在酶提取时应     

雅津蛋白桑多糖的分离纯化及生物活性研究

采用纤维素酶法提取桑叶多糖,通过单因素试验和正交试验,确定最优提取工艺参数;并采用Sephadex G-100型葡聚糖凝胶进行初级纯化,比较纯化前后多糖的抗氧化能力和α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,纤维素酶法提取的最优工艺为提取液pH 6.0、酶解温度50℃、酶浓度1.0%、酶反应时间50min;纯化后的桑叶多糖具有更高的总抗氧化能力、DPPH·和·OH清除能力;但纯化后的桑叶多糖对α-葡萄糖苷酶抑制效果低于纯化前的。优选得到的纤维素酶法提取桑叶多糖工艺具有较好的提取效果,且纯化后的桑叶多糖具有更强的抗氧化活性。     

幽门螺杆菌尿素酶的提取与纯化

采用2种方法分离纯化了幽门螺杆菌尿素酶。第1种方法是以 DEAE-sepharose FF离子交换剂和Superdex 200凝胶为分离介质,用 NaCl盐浓度梯度洗脱法从幽门螺杆菌超声上清液中提取纯化尿素酶抗原,所得到的纯化尿素酶经SDS-PAGE电泳分析,表明它具有很高的纯度,只含有分子质量为64 000 u和31 000 u两种蛋白成分,分别对应于幽门螺杆菌尿素酶的A、B两种亚基。第2种方法是以 DEAE-sepharose FF离子交换剂为分离介质,采用先去掉部分杂蛋白的方法纯化尿素酶,其中的去杂步骤操作简单、快捷且处理样品量大,大大减轻了后面纯化步骤的难度,适合于尿素酶的大量制备。纯化的尿素酶作为抗原采用ELISA间接法检测抗HP蛋黄免疫球蛋白(IgY),实验表明,其仍具有良好的抗原性,是HP主要抗原物质。应用纯化尿素酶抗原或纯化尿素酶抗原与超声粉碎抗原的混合抗原刺激蛋鸡应该能够产生抗HP效价更高的蛋黄免疫球蛋白,可以将其应用于保健或各种与HP相关的胃病的抗菌免疫治疗。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

鹅血中SOD的分离工艺及其抗氧化活性研究

对鹅血中SOD的纯化及抗氧化活性进行了研究.采用丙酮沉淀法对鹅血SOD进行初步纯化、Sephadex G-100进一步精制,并利用SDS-PAGE对酶的纯度检测和分子量测定.结果表明Sephadex G-100凝胶过滤层析对鹅血SOD具有较好的纯化作用,纯化后的鹩血SOD比活力从1 144.896U/mg提高到4 226.513U/mg,SDS-PAGE凝胶电泳显示单一条带,表明已达到电泳纯,且其亚基分子量约为16KD.纯化后的SOD对邻苯三酚自氧化抗氧化活性明显.     

玉米超氧化物歧化酶的提取与纯化工艺

为优化玉米超氧化物歧化酶(SOD)提取与纯化工艺。研究不同浸提条件及沉淀分离工艺对玉米SOD提取及纯化效果的影响。最佳诱导和浸提的原料与缓冲液配比分别为1∶1.5~1∶3、1∶2,最佳诱导和浸提时间分别为25 h~30 h、1.5 h。采用50、60℃分别处理15、10 min两次热变性除杂蛋白、丙酮沉淀SOD的纯化效果最好。DEAE-纤维素柱层析纯化后,SOD比活为1 699.7 U/mg,回收率为31%,纯化倍数为30.7。该方法高效且低毒污染少,适于工业化生产。     

黄粉虫中提取纯化超氧化歧化酶的工艺研究

本研究以黄粉虫粉为原料,经盐析沉淀,DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析和Sephadex G200凝胶过滤层析等纯化步骤,获得了其中的一种超氧化物歧化酶(SOD)。酶的纯化倍数为78.3倍。SDS-PAGE电泳显示为均一的蛋白谱带。经鉴定该酶为Cu.Zn-SOD。本研究为从黄粉虫中提取SOD提供了一种较好的工艺。     

两种纯化玉米超氧化物歧化酶方法的比较

本文利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用DEAE-52离子交换层析和金属螯合亲和层析分别纯化了SOD.其中经离子交换层析后的比活为3 304,纯化倍数为118,回收率为4.8%,基本达到电泳纯.经金属螯合亲和层析纯化后比活为8 597,纯化倍数为307,回收率为29.4%,达到了电泳纯.     

猪肝超氧化物歧化酶的分离纯化与初步表征

研究猪肝SOD的分离提取、纯化以及初步表征。以猪肝为原料,通过抽提液加热、丙酮沉淀和Sephadex G-200层析柱色谱提取、纯化Cu,Zn-SOD;在单因素试验的基础上,采用L(934)设计对提取工艺进行系统优化。结果表明:经过热变性,可以除去大部分杂蛋白,提高了SOD的比活力;最佳的提取条件是:在1.4%的盐浓度下,于70℃水浴中热变性10 min,然后加1.6倍体积的丙酮获得SOD粗沉淀;溶解后的粗酶液经Sephadex G-200层析柱纯化后,经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,HPLC检测显示为单一对称峰,均表明最终得到了高纯度的SOD;紫外-可见吸收光谱和ICP-MS分析结果均表明得到的是含铜、锌的SOD,即Cu,Zn-SOD;以邻苯三酚为底物,该酶的Km值为1.574,Vmax为0.268。     

大麦虫超氧化物歧化酶分离纯化及性质研究

目的：探讨大麦虫超氧化物歧化酶(SOD)分离纯化条件及其性质,为大麦虫利用提供科学依据。方法：以大麦虫为原料,经盐析沉淀、DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析等纯化, 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法对蛋白质的组分进行分离并确定其分子质量,原子吸收光谱仪鉴定酶的类型。结果：获得了一种酶比活力较高的大麦虫SOD,酶的纯化倍数为68.54倍,分子质量为37.30kD,属于含铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD),且在278nm波长处有紫外吸收峰,稳定性较好,最适温度为40℃,最适pH值为6.0,对H2O2、β-巯基乙醇试剂十分敏感,受氯仿-乙醇混合液(3:5,V/V)的影响较小。结论：大麦虫SOD具有较高的酶比活力,稳定性好,具有较高的利用价值。     

仙人掌SOD超声萃取与纯化工艺研究

以新鲜仙人掌为材料,去表面刺和蜡质、清洗、打浆、过滤、超声波处理、离心,得仙人掌粗酶液,再经硫酸铵盐析和Sephadex G-100柱层析,对仙人掌SOD初步纯化.超声波处理能够提高仙人掌SOD的提取率,超声波功率600W、温度40℃与时间20min的组合,所得SOD活力最高,达到215.6U/mL.硫酸铵饱和度40%和85%分别用于除杂质和沉淀SOD目标蛋白,有较好的纯化效果,Sephadex G-100能使SOD得到一定程度的纯化.     

玉米SOD的纯化与化学修饰

本文利用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤初步分离了玉米SOD,利用金属螯合亲和层析纯化了SOD。比活为8597,纯化倍数为307,回收率为29.4%,电泳后活性染色与蛋白染色均得到3个条带,达到了电泳纯。针对SOD稳定性较差的缺陷,进行了PEG修饰SOD研究。修饰率46%,SOD活性保持度为81%。修饰后的玉米SOD的温度稳定性、pH稳定性均明显提高,与天然SOD相比,PEG-SOD的胰蛋白酶酶切耐受性明显增强。结果表明,PEG修饰玉米SOD是可行的,PEG是一种较好的SOD化学修饰剂。     

黄棒菜超氧化物歧化酶(SOD)分离纯化的技术

以植物新品种黄棒菜为原料,研究料液比,浸提温度及pH,热变性温度及时间、丙酮加入量等因素对黄棒菜超氧化物歧化酶(SOD)提取效果的影响,利用正交试验与单因素试验优化提取工艺。结果表明,提取SOD的最佳条件为:料液比1︰3(g/mL),浸提温度0℃,pH 7.0,50℃热变性20 min,1.5倍酶液体积的丙酮,此时SOD纯化倍数可达3.17。经层析纯化及真空冷冻干燥,获得SOD成品。最佳条件下处理新鲜黄棒菜叶茎、叶片组织,测得SOD最终比活力分别为7662.23 U/mg,4897.39 U/mg,纯化倍数达17.55、23.08,叶茎更适于提取SOD。经电泳检测,黄棒菜SOD相对分子质量约80 kDa,据文献鉴定为Mn-SOD。试验结果为黄棒菜SOD的分离纯化及资源开发提供技术参考。     

两种野生乳菇中超氧化物岐化酶的研究

本文用不同的提取方法从松乳菇、红汁乳菇的干、鲜样品中提取超氧化物歧化酶(SuperoxideDismustase,SOD)。按四因素、四水平设计正交试验,经方差分析,选择SOD的最佳提取条件。通过同一波峰下紫外吸收值的不同对两种野生乳菇SOD含量做了比较。SOD的纯化采用硫酸铵分级分离和SephadexG-100柱层析,并经丙酮二次沉淀。鉴定了SOD的类型,发现松乳菇中含三种不同类型的SOD,Fe-SOD的含量相对较高。