鸭肝丁酰胆碱酯酶的纯化与酶学性质研究

目的:获得鸭肝丁酰胆碱酯酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法:采用丙酮脱脂、酸沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶层析方法,分离纯化鸭肝丁酰胆碱酯酶;采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子量测定。结果:从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的丁酰胆碱酯酶,纯化倍数为156.45倍,酶活回收率为23.60%,比活达17.21U/mg。酶相对分子量为388.85kDa,亚基相对分子量为64.70kDa。推测该酶由六个相同亚基构成。该酶最大紫外吸收为278nm。酶催化碘化硫代丁酰胆碱水解的最适pH为8.0,最适温度为35℃。该酶在pH3.0～10.0区域较稳定;在40℃以下处理1h,酶活力保持稳定。Zn2+、Mn2+和Cu2+对该酶具有显著的抑制作用。以碘化丁酰硫代胆碱为底物,测定该酶的表观Km为71.15μmol/L,没有过量底物抑制现象。结论:成功分离纯化获得丁酰胆碱酯酶,该酶具有较好的酸碱耐受性。     

甘薯叶过氧化物酶的分离纯化及其部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到过氧化物酶(POD)电泳纯制品。该酶比活力为91923.14U/mg,纯化倍数为255.69,回收率为1.59%。该酶分子量约为35kD,最适pH值为5.6,最适温度为60℃。该酶在20～50℃、pH4～8内稳定。以不同浓度H2O2为底物在pH7.2和25℃下测得该酶Km值为0.291mol/L。低浓度草酸、尿素、Li+、Na+、K+、Mg2+等对该酶有激活作用;SDS、KSCN、抗坏血酸(AsA)、Mn2+等对该酶有抑制作用;甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对POD均有一定抑制作用,其抑制作用强弱顺序为异丙醇>乙醇>甲醇>乙二醇。实验表明,该酶稳定性较强。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

鸭肝谷氨酸脱氢酶的纯化与酶学性质研究

目的：获得鸭肝谷氨酸脱氢酶纯品并对其酶学性质进行研究。方法：采用丙酮脱脂、重金属离子沉淀、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析方法,分离纯化鸭肝谷氨酸脱氢酶,用SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定和酶相对分子质量测定。结果：从鸭肝中分离纯化获得电泳纯的谷氨酸脱氢酶,纯化倍数为60.93 倍,酶活力回收率为11.02%,比活力达24.37U/mg。酶相对分子质量为371.41,亚基相对分子质量为61.60。推测该酶由6 个相同亚基构成。该酶对NADH 的Km 为53.19μmol/L,最适pH 值为10.0,最适反应温度为35℃。该酶在pH8.0 左右较稳定;在40℃以下酶活力保持稳定。Zn2+、Li+ 和Cu2+ 对该酶具有显著的抑制作用。结论：分离纯化获得谷氨酸脱氢酶,该酶具有较高应用价值。