鼠李糖乳酸杆菌对河豚肝脏中河豚毒素毒性的影响

以野生河豚肝脏中的河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）为研究对象,研究活化与热灭活处理的鼠李糖乳杆菌对其毒性的消减作用。将活化的与热灭活处理的鼠李糖乳杆菌作为材料对TTX进行脱除,采用酶联免疫吸附剂测定（enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA）、层析试纸检测和小鼠生物法分析TTX消减率的变化,采用气相色谱-质谱分析发酵处理后的肝脏二十碳五烯酸（eicosapentaenoic acid,EPA）与二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）含量变化。竞争性ELISA结果显示加热灭活后的鼠李糖乳杆菌对TTX的消减率高达82.16%;而未经灭活处理的鼠李糖乳杆菌对TTX的消减率为70.05%,表明热灭活处理的鼠李糖乳杆菌消减效果更佳。此外,经鼠李糖乳杆菌发酵7 d后野生河豚肝脏的TTX消减率为93.27%,气相色谱-质谱检测结果显示发酵后肝脏内的EPA与DHA含量分别减少了11.93%、22.50%。综上所述,鼠李糖乳杆菌能消减河豚肝脏中的TTX,经鼠李糖乳杆菌发酵处理后消减效果更佳,本研究结果可为河豚内脏组织的毒性消减提供参考。     

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）对过敏原原肌球蛋白免疫活性的消减作用

为探究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）对过敏原原肌球蛋白（tropomyosin,TM）免疫活性的影响,以富集纯化的TM为研究对象,利用植物乳杆菌的菌体、破碎内容物、菌体碎片、胞内酶提取液,以及去除蛋白、脂肪和脂磷壁酸、羧基酯化、氨基甲基化后的菌体分别水解TM 12～48 h,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、蛋白免疫印迹和竞争性酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）等方法测定免疫活性,利用表位多克隆抗体结合红外光谱技术研究植物乳杆菌对TM二级结构及其致敏表位的影响,以解析植物乳杆菌消减TM免疫活性的作用位点。免疫学分析结果发现,不同提取物水解TM 48 h后,菌体对TM免疫活性的消减率最高（76.9%）,而菌体碎片和氨基甲基化菌体的消减率最低,分别为60.7%、61.7%,表明植物乳杆菌对原肌球蛋白免疫活性有一定消减作用。红外光谱及ELISA结果显示植物乳杆菌各成分提取物会较大程度改变TM的二级结构并破坏其致敏表位,而氨基甲基化菌体和菌体碎片对TM的α-螺旋结构和致敏表位的破坏最小,且TM的折叠化结构较少,对TM免疫活性消减效果最差。此外,研究发现氨基可能是植物乳杆菌消减TM免疫活性的一个重要作用位点。本研究可为食物过敏原的活性控制及低致敏性水产加工制品的开发提供理论参考。     

乳酸菌肽聚糖的提取纯化及其对河豚毒素的毒性消减效果研究

乳酸菌中提取的肽聚糖已被发现对河豚毒素具有消减作用。但肽聚糖提取工艺复杂、效率低下,阻碍了毒素消减研究。该研究以具有A3α,A1γ,A4α三种类型肽聚糖的乳酸菌为原料,通过对磷壁酸去除条件、脂质去除试剂和蛋白质的酶解工艺进行优化获得高纯度肽聚糖,并采用小鼠生物法评价了纯化后的3种肽聚糖对河豚毒素(tetrodotoxin, TTX)的毒性消减效果。溶菌酶及扫描电镜结果显示,采用100 g/L三氯乙酸去除磷壁酸、50 g/L十二烷基硫酸钠溶液去除脂质、胰蛋白酶与链霉蛋白酶联用去除蛋白质后,3种肽聚糖呈现完整的球状形态,表明优化后的提取工艺对肽聚糖的球形结构完整性影响小。酶联免疫吸附法和小鼠生物法结果显示,纯化后的3种肽聚糖可以去除78%以上的TTX含量,并降低87%以上的毒性,消减效果均优于灭活菌株。由此可见,优化后的肽聚糖提取纯化工艺不会破坏肽聚糖消减TTX的主要组分,并能显著提高效率,为肽聚糖的工业化应用和毒素控制研究提供了理论基础。     

不同益生菌发酵剂对复合果蔬汁品质的影响

以沙棘、胡萝卜和黑枣为原料制备复合果蔬汁,分别接种植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及其组合（1∶1,体积比）进行发酵,比较复合果蔬汁发酵过程中乳酸菌总数、pH值、总酸、可溶性蛋白、还原糖、有机酸、总黄酮、总多酚和体外抗氧化活性等指标的变化。结果表明,植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌及其组合发酵复合果蔬汁中还原糖含量无显著差异。相比直接接种植物乳杆菌或鼠李糖乳杆菌单一菌种发酵复合果蔬汁,植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌耦合发酵可显著增加乳酸菌的菌落总数（P<0.05）,提高总酸、总黄酮、总多酚、乙酸和乳酸等物质的含量（P<0.05）,增加体外抗氧化活性（P<0.05）。     

体外评估乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响

该研究以商业菌株鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）LGG为阳性对照菌,体外评估实验室保藏的5株乳杆菌对巨噬细胞RAW264.7细胞活性、吞噬活性及免疫活性分子NO、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）与白细胞介素-10（IL-10）分泌水平的影响,以期从中筛选出具良好免疫调节作用的菌株。结果表明,鼠李糖乳杆菌260具有更优的免疫调节作用,在特定乳杆菌活菌浓度时,能显著提高巨噬细胞RAW264.7的细胞活性、吞噬活性及NO、TNF-α和IL-10的分泌水平（P＜0.05）。最高细胞增殖率为196.62%;最低乳酸脱氢酶（LDH）释放量为554.36 U/100 mL;最高吞噬活性为136.86%;最高NO分泌量为5.70 μmol/L;最高IL-10分泌量为15.56 pg/mL,最高TNF-α分泌量为50.98 pg/mL。     

鼠李糖乳杆菌LT22培养物主要活性物质的研究

对鼠李糖乳杆菌LT22株培养物中主要活性物质进行了检测,以期为该菌株的开发和利用提供试验数据。用最小二乘法绘制标准曲线得出乳酸、葡萄糖胺和粗肽聚糖质量浓度;用试管稀释法测定48～120h培养物的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:鼠李糖乳杆菌LT22株培养物中乳酸质量浓度为0.159g/mL;其培养物经破碎后粗肽聚糖质量浓度为0.51g/L,葡萄糖胺的质量浓度为0.0076g/L;MIC分别为1∶8,1∶16,1∶16,1∶8,1∶8;MBC分别为1∶4,1∶4,1∶8,1∶4,1∶4。     

鼠李糖乳杆菌对大鼠黄曲霉毒素B_1促排效果的评价

通过对连续低剂量摄入黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)的大鼠每日补充不同处理方式及不同菌体浓度的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosu),并根据大鼠血清生化及免疫等指标,确定鼠李糖乳杆菌降低大鼠体内AFB_1的能力及效果。大鼠(空白组除外)给予含50 μg/kg AFB_1的饲料,并分别灌胃0.5 mL不同处理方式及不同菌体浓度的鼠李糖乳杆菌菌液。以大鼠体质量、血清细胞免疫因子、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)等指标进行对比,探讨不同处理方式、不同菌体浓度的鼠李糖乳杆菌对大鼠生长状况及免疫调节作用的影响。结果表明:高剂量鼠李糖乳杆菌活菌对大鼠体内AFB_1的吸附能力随菌体浓度变化差异较明显,高剂量活菌维持大鼠健康状况、肝功能和免疫功能稳定的效果最佳;灭活鼠李糖乳杆菌对大鼠体内AFB_1有一定的吸附能力,在维持天冬氨酸转氨酶活力以及IgM、IgG质量浓度等指标稳定方面效果显著,但对细胞免疫因子效果不明显;低剂量鼠李糖乳杆菌发酵液对大鼠体内AFB_1的吸附效果较差,仅高剂量发酵液有一定的吸附作用。     

具有免疫调节功能的鼠李糖乳杆菌LV108对大鼠粪便菌群及其代谢物的影响

利用鼠李糖乳杆菌LV108干预由环磷酰胺建立的免疫低下模型大鼠，研究其对免疫低下大鼠的免疫调节作用，并探究其对大鼠粪便菌群及其代谢物的影响。结果表明，环磷酰胺建立的免疫低下模型大鼠血清中白细胞介素-2(Interleukin-2, IL-2)、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)、免疫球蛋白A(Immunoglobulin A, IgA)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G, IgG)及溶血素的水平以及吞噬指数和廓清指数显著低于对照组（P<0.05），脾淋巴细胞的增殖也显著降低（P<0.05）；鼠李糖乳杆菌LV108的干预显著提高了免疫低下大鼠血清中TNF-α、总IgG及溶血素的水平和廓清指数（P<0.05），并显著促进了脾淋巴细胞的增殖（P<0.05）；环磷酰胺显著降低了大鼠粪便中乳杆菌和双歧杆菌的数量（P<0.05），并显著提高了肠杆菌和肠球菌的数量（P<0.05），粪便中的丙氨酸、异亮氨酸、丁酸、琥珀酸、肌酸、β-葡萄糖和α-葡萄糖的含量均低于对照组；而鼠李糖乳杆菌LV108的干预使得大鼠...     

鼠李糖乳杆菌LGG上清液改善急性酒精性脂肪肝损伤研究

主要探讨了鼠李糖乳杆菌上清液对急性酒精引起的酒精性脂肪肝变性和肝损伤的作用。将C57BL/6N小鼠随机分为对照组、酒精组、鼠李糖乳杆菌上清液干预组和鼠李糖乳杆菌菌体细胞干预组,对小鼠进行急性酒精或等热量麦芽糊精灌胃后,通过检测血清和肝脏生化指标以及肝脏组织病理学的变化,评价鼠李糖乳杆菌上清液对小鼠酒精性肝损伤的影响。结果鼠李糖乳杆菌上清液能够改善肝脏脂肪堆积情况,降低肝脏中游离脂肪酸、甘油三酯含量以及血清转氨酶活性。表明益生菌鼠李糖乳杆菌上清液能够改善急性酒精引起的肝脏脂肪堆积和肝损伤。     

鼠李糖乳杆菌LT22对小鼠免疫功能的影响

取SPF小鼠120只,分成3批,每批分为4个组。对照组小鼠灌服灭菌水;实验1组灌服自制发酵培养基;实验2组灌服鼠李糖乳杆菌LT2237℃、48h培养物;实验3组灌服灭活的鼠李糖乳杆菌LT22培养物。所有小鼠均采用口腔灌服,0.5mL/只/d,连续接种7d或13d。通过测定巨噬细胞吞噬活性、T淋巴细胞数量、血清溶血素含量及器官指数来反映鼠李糖乳杆菌LT22对小鼠免疫功能的影响。结果表明:所有实验组均能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,均能促进IgM的生成及脾脏和胸腺的发育;实验2组能显著增加T淋巴细胞的数量及血清溶血素的含量。     

双亲灭活米曲霉原生质体融合中原生质体制备的研究

对双亲灭活米曲霉原生质体融合育种中原生质体制备的条件进行了研究,将菌丝的预处理与细胞壁的酶解合为一步,并讨论了DTT的加入量。结果表明,原生质体制备的最佳破壁酶为纤维素酶、溶壁酶、蜗牛酶3种酶混合浓度比为5:3:1;菌丝培养15h;酶解时加入3mol/L DTT;酶解2.5h;0.8mol/L NaCl作为渗压稳定剂。所得双亲菌株原生质体的融合率为3.31%。     

A Lallzyme MMX‐based rapid method for fission yeast protoplast preparation

Fungal cells including yeasts are surrounded by cell wall that counteracts turgor pressure and prevents cell lysis. Many yeast experiments, including genetic manipulation of sterile strains, morphogenesis studies, nucleic acid isolation and many others, require mechanical breakage or enzymatic removal of the cell wall. Some of these experiments require the generation of live cells lacking cell walls, called protoplasts, that can be maintained in osmostabilized medium. Enzymatic digestion of cell wall proteoglycans is a commonly used method of protoplast preparation. Currently existing protocols for fission yeast cell wall digestion are time consuming and not very efficient. We developed a new rapid method for fission yeast protoplast preparation that relies on digesting cell walls with Lallzyme MMX commercial enzyme mix, which produces protoplasts from all cells in less than 10 min. We demonstrate that these protoplasts can be utilized in three commonly used fission yeast protocols. Thus, we provide the fission yeast community with a robust and efficient plasmid extraction method, a new protocol for diploid generation and an assay for protoplast recovery that should be useful for studies of morphogenesis. Our method is potentially applicable to other yeasts and fungi. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.     

Microscopic visualization of Pulsed Electric Field induced changes on plant cellular level

The effects of Pulsed Electric Fields (PEF) on protoplasts from cultured tobacco cells (Nicotiana tabacum b.y.-2) in comparison to the changes on cultured plant cells with cell walls were visualised in order to study the direct impact of PEF on cell components and to clarify the influence of the cell wall on electroporation. Optical microscopic analyses were carried out and images were recorded during PEF treatment. Results showed higher sensitivity of protoplasts to electric fields related to cells with a cell wall. Protoplasts sizes were measured before and after different treatment intensities and protoplasts shrinkage was used as an indicator for cell rupture. It could be demonstrated that cell volume decrease is influenced by PEF intensity, initial cell size, cell orientation in the electric field and nucleus position.Industrial relevance: Since the beginning of the 20th century the relevance of Pulsed Electric Fields (PEF) technology in food- and biotechnology has increased substantially. However, the mechanism of membrane permeabilization and the PEF induced changes in cell structure remain poorly understood, diminishing the optimal use in food industry. In this study the direct effects of PEF on cultured plant cell material and influencing factors of the degree of membrane disintegration were visualized and identified. The development of new methods to examine cell vitality shall help to convert the basic knowledge into effective processes.     

甘薯渣中去氢表雄酮抑菌活性研究

为研究甘薯渣氢表雄酮(DHEA)的抑菌活性,本研究以马克斯克鲁维酵母、酿酒酵母、鼠李糖乳杆菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、炭疽杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌为供示菌,采用生长曲线、最小抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)、生长曲线、扫描电镜研究DHEA的抑菌作用。结果表明,DHEA对供试菌的抑菌效果依次为:马克斯克鲁维酵母>大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>炭疽杆菌>沙门氏菌>枯草芽孢杆菌>酿酒酵母>鼠李糖乳杆菌。最低抑制浓度(MIC)结果为:马克斯克鲁维酵母5.67 mg/mL,大肠杆菌9.82 mg/mL,金黄色葡萄球菌13.52 mg/mL,炭疽杆菌16.46 mg/mL,沙门氏菌17.68 mg/mL,枯草芽孢杆菌17.87 mg/mL,酿酒酵母20.82 mg/mL,鼠李糖乳杆菌无明显抑制作用。DHEA使供试菌生长周期缩短,并降低了菌体浓度;扫描电镜显示DHEA处理后菌体形态改变,细胞壁破裂,细胞内容物有溶出。研究表明,甘薯渣中DHEA对大部分细菌有抑制作用。     

Anti-inflammatory effect of lactobacilli bacteria on HepG2 cells is through cross-regulation of TLR4 and NOD2 signalling

Pathogen peptidoglycans are detected via host’s innate immune system. This course of action is executed by nucleotide-binding oligomerization domain (NOD) proteins, which have been identified inducing inflammation through nuclear factor-kappa B (NF-κB). Excessive stimulation of liver cells by endotoxin leds to severe inflammatory symptoms. In this research, seven strains of lactobacilli bacteria were prior processed into crude cell wall extracts, followed by testing if crude cell wall extracts could lessen pro-inflammatory processes launched by lipopolysaccharides. The results showed lactobacilli bacteria activated NOD2 expression in mild degrees, and did not lead to serious inflammation. Prior exposure of HepG2 cells to lactobacilli bacteria rendered them desensitized to subsequent LPS challenge. The mechanism by which lactobacilli bacteria attenuated inflammation might be because of the fact that lactobacilli bacteria induced interleukin-10, suppressor of cytokine signalling 1/3 and peroxisome proliferator-activated receptors alpha via NOD2-NF-κB pathway, and then cross-regulated Toll-like receptor 4 (TLR4) downstream signal transduction.     

真空微波干燥中微波强度对胡萝卜和南瓜中类胡萝卜素生物利用率的影响

为明确真空微波干燥过程中,微波强度对胡萝卜和南瓜中类胡萝卜素生物利用率的影响,本文采用静态体外模拟消化模型评价类胡萝卜素生物利用率的变化,采用透射电镜（TEM）和光学显微镜观察细胞壁微观结构的变化。结果表明,真空微波干燥后的胡萝卜和南瓜的细胞壁断裂,有色体结构破坏严重。经体外模拟消化,胡萝卜和南瓜消化液细胞结构破坏明显,细胞壁破裂严重,类胡萝卜素从细胞内部释放到消化液中的含量明显高于鲜样,且类胡萝卜素生物利用率随微波强度的增加呈现先升高后降低的趋势。当微波强度为9 W/g时,胡萝卜和南瓜中类胡萝卜素的生物利用率较高,其β-胡萝卜素生物利用率相比于鲜样分别显著提高了12.02、24.2倍（P<0.05）。由此可知,选择合适的微波强度有助于提高蔬菜中类胡萝卜素生物利用率。     

植物性多糖的强化提取

以新鲜南瓜为研究对象,用超声波和缓冻2种方法强化提取水溶性多糖。电子显微镜显示,植物细胞壁在超声波作用下产生了明显的褶皱,一些细胞破裂;植物细胞经过缓冻处理后,由于植物细胞内形成了晶粒较大的冰晶,从而使大部分植物细胞产生破碎作用。超声波和缓冻2种方法都能强化植物性多糖的提取,缓冻的效果优于超声波。