红酒对酪氨酸酶抑制作用的研究

通过研究红酒对酪氨酸酶的抑制作用,发现红酒对该酶具有良好的抑制作用.红酒中的多酚成分是抑制酪氨酸酶的重要活性物质,对酪氨陵酶的半抑制浓度(IC50)为0.14mg/L～0.18mg/L,抑制动力学类型为非竞争型.同时,通过测量红酒面膜原液中多酚含量及对酪氨酸酶的抑制活性,对市售红酒面膜产品的真伪及功效进行了鉴别和评价.     

羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶的抑制作用研究

目的:研究羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用和对结构的影响。方法:提取羊栖菜多糖并测定含量,以L-DOPA为底物,在475nm处测定吸光度,观察羊栖菜多糖提取物对酪氨酸酶二酚酶活力的影响;测定羊栖菜多糖作用下酪氨酸酶内源荧光和ANS结合的荧光的变化,以判断对酶结构的影响情况。结果:羊栖菜多糖提取物对蘑菇酪氨酸酶有明显的抑制作用,可以导致酪氨酸酶的二酚酶活力下降。羊栖菜多糖使二酚酶活力下降一半时的抑制剂浓度(IC50)为(2.16±0.37)mg/mL。羊栖菜多糖对酪氨酸酶的抑制作用是一个可逆过程,抑制类型为混合型抑制。通过动力学分析,测得羊栖菜多糖对酪氨酸酶的抑制常数(Ki)为(4.34±0.56)mg/mL。荧光测定结果表明,羊栖菜多糖的结合引起酪氨酸酶三级结构的明显改变。结论:羊栖菜多糖与酪氨酸酶的结合引起酶结构的变化,并以混合抑制的方式可逆抑制酪氨酸酶的二酚酶活性。本实验为进一步研究和设计新型酪氨酸酶抑制剂奠定科学基础。     

白藜芦醇对酪氨酸酶体外抑制活性的动力学研究

在30℃,pH 6.8的Na2HPO4-NaH2PO4的缓冲体系中,采用酶促动力学方法,研究了白藜芦醇对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制作用。结果表明,白藜芦醇对酪氨酸酶、单酚酶和二酚酶均有抑制作用,对单酚酶抑制活性的IC50值(抑制率达到50%时的白藜芦醇质量浓度)约为5.1mg/mL,对二酚酶抑制活性的IC50值约为5.6 mg/mL。此外,白藜芦醇可延长单酚酶的迟滞效应,8 mg/mL的白藜芦醇能使迟滞时间从22 s延长至62 s,而对二酚酶则无此迟滞作用。Lineweav-er-Burk图分析表明,白藜芦醇对酪氨酸酶的抑制作用为混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为3.4 mg/mL和35.98 mg/mL。     

庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶抑制效应

目的:通过研究庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的影响,探讨其抑制机制和动力学,为其开发和利用奠定基础.方法:运用酶动力学研究方法,探讨效应物对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应、抑制机理和抑制类型,并测定抑制常数.结果:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶具有可逆抑制作用,庚酸-3,4-二羟基苯酯的抑制效应显著大于3,4-二羟基苯甲酸己酯,前者IC50为305 μmol/L,而后者测不到IC50.庚酸-3,4-二羟基苯酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶具有竞争抑制作用,其抑制常数KI为171.4μmol/L,而3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力具有反竞争抑制作用,抑制常数KIS为389μmol/L.结论:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶的作用效应截然不同,显示了酶抑制剂的构象关系.     

红花黄酮提取物对酪氨酸酶的抑制作用

研究红花黄酮提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用。以L-酪氨酸为底物,对红花黄酮提取物抑制酪氨酸酶活性进行动力学研究。结果表明：在试验浓度范围内,红花黄酮提取物对酪氨酸酶均具有抑制性,且当红花黄酮提取物浓度为3.0mg/mL时,抑制率达到最大值78.03%;IC50值为0.834mg/mL,抑制常数KI为0.036mg/mL,KIS为0.0064mg/mL。研究表明,红花黄酮提取物对酪氨酸酶有显著的抑制作用,酶抑制类型为可逆的混合型抑制。     

异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理

异鼠李素是沙棘果实和美白类中草药白蒺藜、白鲜皮的主要黄酮类活性成分,具有广泛的药理活性。酪氨酸酶是人体细胞产生黑色素和果蔬褐变的关键酶。本文研究了异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理。以L-多巴为底物,测定异鼠李素对酪氨酸酶二酚酶活性的IC50、抑制类型和抑制常数。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断,并计算相应的抑制常数(KI和KIS)。实验结果显示,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力抑制效果显著,IC50为25μmol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为20.1μmol/L,KIS为108.6 mol/L。总之,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力有很好的抑制作用,是值得进一步研究的美白类候选药物和防止果蔬褐变的食品添加剂。     

儿茶素对马铃薯酪氨酸酶的抑制作用

采用分光光度计法测定酶液加入量、底物浓度、温度、pH 值对酶活力的影响,确定最适反应条件。在30℃、pH6.8 的Na2HPO4-NaH2PO4 缓冲体系中,采用酶动力学方法研究儿茶素对马铃薯酪氨酸酶的抑制效应。结果表明：反应最适条件为酶液加入量0.5mL、底物浓度2mmol/L、温度30℃、pH6.8。儿茶素对马铃薯酪氨酸酶有抑制作用,抑制率达到50% 的儿茶素质量浓度(IC50)约为0.27mg/mL;Lineweaver-Burk 图显示儿茶素对马铃薯酪氨酸酶的抑制作用表现为竞争型抑制,抑制常数(KI)为0.16mg/mL。     

辣木叶多酚抗酶促褐变效果及其评价

研究辣木叶多酚对酪氨酸酶二酚酶活力的抑制作用及对苹果切片的抗酶促褐变效果。在多巴测活体系中,通过改变底物浓度和酶量,研究辣木叶多酚对酪氨酸酶的抑制效果、机制及类型。结果表明,辣木叶多酚对酪氨酸酶抑制作用明显,半抑制率IC_(50)为6.67μg/mL,其对酪氨酸酶二酚酶的抑制作用为可逆的混合竞争型抑制,其抑制常数K_I、K_(IS)分别为1.51 mg/mL和7.82 mg/mL。通过对多项指标的检测和方差分析,发现辣木多酚对苹果的保鲜有差异显著(p0.05)。在苹果低温储藏期间,辣木多酚能调控POD活性,降低苹果切片的褐变程度,同时能有效提高蔗糖含量和抗坏血酸含量,而对蛋白含量和GSH含量影响不大。研究有望为开发新式辣木叶多酚高效酪氨酸酶抑制剂提供一定的理论依据。     

对香豆酸、阿魏酸和低聚糖阿魏酸酯对酪氨酸酶的抑制效果

通过测定酶的稳态活力、迟滞时间和动力学参数,研究对香豆酸、阿魏酸及低聚糖阿魏酸酯对酪氨酸酶的抑制效果。结果表明,3种物质对酪氨酸酶单酚酶活性均有抑制作用,其中对香豆酸的抑制作用最强,其次为低聚糖阿魏酸酯和阿魏酸。对香豆酸、低聚糖阿魏酸酯和阿魏酸对单酚酶的IC_(50)值分别为0.75,3.20,9.30 mmol/L。对香豆酸和阿魏酸抑制二酚酶活性,IC_(50)值分别为4.3,12.7mmol/L;但低聚糖阿魏酸酯对二酚酶活力没有影响。对香豆酸能明显延长单酚酶反应的迟滞时间,阿魏酸影响很小,而低聚糖阿魏酸酯则缩短迟滞时间。动力学研究结果显示,阿魏酸和低聚糖阿魏酸酯对单酚酶的抑制作用表现为混合性抑制,而对香豆酸为竞争性抑制。     

甘薯叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用

为探究甘薯叶提取物对酪氨酸酶活性的影响,利用不同极性溶剂萃取甘薯叶乙醇提取物,分别得到石油醚层、三氯甲烷层、乙酸乙酯层及正丁醇层萃取物,并采用多巴速率氧化法考察不同溶剂提取物对酪氨酸酶的抑制作用。结果表明,甘薯叶提取物中存在能抑制酪氨酸酶活性的物质,其中甘薯叶正丁醇萃取物对酪氨酸酶的抑制作用最明显,根据正丁醇萃取物抑制酪氨酸酶的Lineweaver-Burk双倒数拟合方程可得,甘薯叶提取物对酪氨酸酶的抑制作用是可逆过程,其抑制类型是混合型,KI与KIS分别为0.198、0.209 mg/mL,即甘薯叶提取物与游离酶的结合程度大于与酶-底物络合物的结合。     

沙棘黄酮对酪氨酸酶活力抑制作用的研究

研究沙棘黄酮对酪氨酸酶活性的抑制作用。实验测定了沙棘黄酮分别在温度、pH、时间、底物浓度、酶液加入量等因素条件下对酪氨酸酶活力的影响。结果显示,沙棘黄酮对酪氨酸酶活性的抑制率随着时间的延长,底物浓度的增加,酶量的增加而增强,而且在35℃及pH7.1时沙棘黄酮对酪氨酸酶活力的抑制作用最强可达到47.45%。说明沙棘黄酮对酪氨酸酶的活性具有较强的抑制作用。     

Inhibitory Mechanism and Kinetics Study of Apple Polyphenols on the Activity of Tyrosinase

Tyrosinase is the key enzyme in the biosynthesis of melanin. In order to investigate the effect of apple polyphenols on tyrosinase activity, the enzyme kinetic method was used. The concentration of apple polyphenols, which caused the tyrosinase activity to be lost by 50%, was 1.0 mg ml^?1 for monophenolase and 0.9 mg ml^?1 for disphenolase. When the concentration of apple polyphenols was 2.0 mg ml^?1, the lag time before reaction of monophenolase was extended from 1.2 to 4.5 min. Inhibition kinetics analysis suggested that apple polyphenols were reversible and mixed inhibitors for tyrosinase with an inhibition equilibrium constant 2.3 mmol l^?1. The results indicated that apple polyphenols were ideal tyrosinase inhibitors and could be used in food and cosmetics.     

银耳多糖醇沉级分对酪氨酸酶的抑制作用

采用分步醇沉法得到4种银耳多糖级分--STP 20、STP 40、STP 60、STP 80,分析其得率、纯度和相对分子质量及纯化STP 60的单糖组成,研究其对酪氨酸酶的抑制作用及作用类型。结果表明,STP 60的得率和纯度均为最高,分别为19.28%和81.12%;4种银耳多糖级分均具有一定酪氨酸酶抑制作用,其中STP 60的抑酶作用最大,质量浓度1 mg/mL时对酪氨酸酶活性的抑制率为37.55%;STP 60对酪氨酸酶的抑制作用属于非竞争性可逆抑制。银耳多糖在美白类化妆品中具有潜在应用价值。     

文冠果壳皂苷提取物抑制酪氨酸酶活性的研究

分别采用70％的乙醇溶液、蒸馏水2种浸提液提取文冠果壳中的皂苷,并测定其含量以确定最佳提取溶剂.通过对酪氨酸酶催化L-多巴氧化速率的测定研究了文冠果壳粉的乙醇提取液对体外酪氨酸酶活性的抑制作用.结果表明,皂苷粗提液对酪氨酸酶的抑制率与浓度呈非线性变化,随着浓度的增加,抑制剂对酪氨酸酶活性的抑制率先增加后趋于平稳.当皂苷质量浓度为0.36 mg/mL,抑制率可达到64.6％.通过酶抑制作用的Lineweaver-Burk图,分析结果显示,文冠果壳皂苷粗提液对酪氨酸酶的抑制作用类型为非竞争性抑制.上述研究为进一步开发文冠果壳中的美白成分提供了依据,同时又实现了废物利用,提高了农产品的经济价值.     

槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用与分子机理

本文以L-多巴为底物,采用酶抑制动力学法研究了槲皮素对酪氨酸酶的抑制作用大小及类型,并采用荧光光谱技术分析其与酪氨酸酶的猝灭作用类型、结合位点、作用力类型。在此基础上,进一步利用柔性分子对接技术分析槲皮素对酪氨酸酶的抑制机理。结果表明,槲皮素对酪氨酸酶具有抑制作用,抑制常数KI为36 m M,以竞争性抑制剂形式抑制酪氨酸酶活性,是一种可逆性抑制剂;槲皮素以1:1比例通过氢键和疏水作用力结合于酪氨酸酶活性中心,且对酪氨酸酶的荧光产生静态淬灭作用,具有氢键及疏水作用力;分子对接结果验证了以上实验结论:槲皮素占据了酪氨酸酶活性中心,且与活性中心部位的Asn260和Gly62残基形成了强烈的氢键作用,同时伴有疏水作用共同稳定复合物的结构。     

黑曲霉胺氧化酶的粗酶液酶学特性及降解生物胺的研究

选取黑曲霉SPFJ05为实验菌种,诱导其产生胺氧化酶。对诱导的黑曲霉菌体破碎后得到含有胺氧化酶的粗酶液,研究粗酶的部分酶学性质并用粗酶液对自制酱油和市售酱油进行处理。实验结果表明,粗酶的最适温度为35 ℃;最适pH值为7.0;1.0 mmol/L的Cu2+对酶活有激活作用;常见的抑制剂乙二胺四乙酸（EDTA）和巯基乙醇对酶活有明显抑制效果;底物特异性方面,该酶对正己胺的降解率最大为116%,对尸胺的降解率最差为16%。粗酶液对自制酱油中总生物胺的降解率达到78.29%,对市售酱油中总生物胺的降解率达到69.50%。该实验为发酵酱制品中生物胺的去除提供了新的途径。     

不同水解方法对藜麦皂苷抑菌活性及酪氨酸酶抑制作用的影响

本实验以藜麦麸皮为材料,通过双相酸水解法、直接酸解法、酶解法三种方法去处理藜麦麸皮,并利用正丁醇萃取获得藜麦低级性皂苷。经过最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）、最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration,MBC）及纸片法测定抑菌活性;并用酪氨酸酶抑制实验推测其抑制黑色素作用。最后用液相色谱质谱/质谱联用法（liquid chromatography electrospray ionisation tandem mass spectrometry,LC-MS/MS）和高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）来对抑菌和抑制酪氨酸酶活性效果最好的化合物进行定性定量分析。结果表明：经过双相酸水解转化的化合物活性最好,对金黄色葡萄球菌和沙氏肠炎杆菌的MIC=0.60 mg/mL,MBC=1.20 mg/mL,对表皮葡萄球菌的MIC=0.30 mg/mL,MBC=1.20 mg/mL;对铜绿假单胞菌有一定的抑制作用。0.5 mg/mL的转化物对酪氨酸酶的抑制率达到68.09%。根据LC-MS/MS及HPLC可知,经正丁醇萃取的水解后的化合物为皂苷。经过两相酸解后,部分皂苷发生了水解反应,造成了化合物极性的降低。利用双相酸水解法从藜麦麸皮中萃取藜麦皂苷元提高了化合物的活性,增强了皂苷的抑菌和酪氨酸酶抑制作用,并且提取率明显高于直接酸解法和酶解法。     

Inhibitory effects of cinnamic acid and its derivatives on the diphenolase activity of mushroom (Agaricus bisporus) tyrosinase

The effects of cinnamic acid and its derivatives (2-hydroxycinnamic acid, 4-hydroxycinnamic acid and 4-methoxycinnamic acid) on the activity of mushroom tyrosinase have been studied. Results showed that cinnamic acid, 4-hydroxycinnamic acid and 4-methoxycinnamic acid strongly inhibited the diphenolase activity of mushroom tyrosinase and the inhibition was reversible. The IC₅₀ values were estimated to be 2.10, 0.50 and 0.42 mM, respectively. 2-Hydroxycinnamic acid had no inhibitory effect on the diphenolase activity of the enzyme. Kinetic analyses showed that the inhibition type of cinnamic acid and 4-methoxycinnamic acid was noncompetitive with the constants (K_I) determined to be 1.994 and 0.458 mM, respectively. The inhibition type of 4-hydroxycinnamic acid was competitive, with the inhibition constant (K_I) was 0.244 mM.     

根霉酯化酶用于酱油增香的优化研究

以豆粕和小麦为主要原料,采用固态低盐原池淋浇发酵法生产基础酱油,对基础酱油使用根霉酯化酶进行增香,通过单因素试验和响应面分析,研究了酯化酶用量、酯化温度和时间对酱油感官和理化质量的影响,结果表明：添加根霉酯化酶能显著提高基础酱油中挥发酯的含量,使酱油滋味醇厚,香气浓郁。优化后的酱油增香工艺条件为：根霉酯化酶1.0%、酯化温度45℃、时间为72h,该条件下酱油总挥发酯的含量为7.512mg/100ml,较基础酱油增加36.3%。