甲烷氧化菌素模拟酶催化显色法检测小麦粉中过氧化钙

该文基于过氧化钙(CaO₂)与硫酸反应生成过氧化氢(H₂O₂),H₂O₂在甲烷氧化菌素(methanobactin,Mb)模拟酶的催化下,以KI为增敏剂,可快速氧化季胺[4,4’-(对二甲氨基)-二苯基甲烷]显色,测定溶液在462 nm处的吸光度,建立快速、简便的模拟酶催化显色法检测小麦粉中CaO₂。研究铜合甲烷氧化菌素(Mb-Cu)浓度、季胺用量、KI用量、反应温度、pH值以及反应时间对显色的影响。结果表明,Mb-Cu浓度4.5×10^-5mol/L、季胺用量60 μL,、KI用量12 μL、反应温度50℃、反应时间10 min时,CaO₂浓度在0～10 mg/L时与462 nm处吸光度呈线性关系,线性方程为y=0.078 1x+0.019 6,相关系数R²=0.997 6。该方法检出限为1.82×10^-2mg/L(相当于2.25 mg/kg小麦粉),平均加标回收率为9...     

基于纳米材料的免疫传感器法快速检测水产品中的呋喃西林代谢物

目的建立纳米免疫传感器法快速检测水产品中呋喃西林代谢物的分析方法。方法采用电沉积法,在0~1.5 V电位区间内扫描3圈,将纳米金负载到玻碳电极上,依次将壳聚糖包埋的羧基化多壁碳纳米管修饰液和呋喃西林代谢物抗体滴涂在电极表面,制得呋喃西林代谢物抗体/纳米金/壳聚糖/羧基化多壁碳纳米管修饰的纳米免疫传感器,利用循环伏安法(扫描电位:-0.2~0.6V)对免疫传感器的性能进行表征,差分脉冲伏安法(扫描电位:-0.2~0.6V)对水产品中呋喃西林代谢物进行检测。结果最佳检测条件为:修饰材料体积比为1:1、底液pH为7.0、抗体固载量为600 ng、孵育温度为37℃、时间为30 min。在此条件下,该传感器的免疫响应电流与呋喃西林代谢物的浓度在(1.0~8.0)×10^-8mol/L的范围内具有良好的线性关系,相关系数r²为0.99548,检出限为2×10^-10mol/L(S/N=3),加标回收率为95.18%~99.44%。结论该方法具有较高的灵敏度、较好的特异性和重现性,可用于水产品中呋喃西林代谢物的快速检测。     

基于单质碘诱导银包金核壳纳米颗粒形变的过氧化氢和葡萄糖检测方法研究

目的 建立基于单质碘（I2）诱导银包金核壳纳米颗粒(Au@Ag NPs)形变的比色传感器检测过氧化氢(hydrogen peroxide，H2O2)和葡萄糖的方法。方法 在钼酸铵的催化下，H2O2氧化碘化钾产生I2诱导Au@Ag NPs形成Au-AgI异质结，其溶液的颜色由橙色变为蓝紫色，从而实现H2O2的比色法检测；基于葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOx)催化葡萄糖氧化生成H2O2来间接测定葡萄糖的含量。结果 0.8×10-3 mol/L碘化钾、0.8×10-3 mol/L钼酸铵、pH 4、反应时间40 min为最佳检测条件；H2O2和葡萄糖浓度线性范围分别为30~200 μmol/L和150~300 μmol/L。以饮料为实际样品，通过标准加入法测定葡萄糖的含量，加标样品的回收率范围在96%~103%。结论 该方法操作简单、检测快速，可用于饮料样品中葡萄糖的可视化检测，并具有较高的准确度。 关键词:单质碘；银包金核壳纳米颗粒；过氧化氢；葡萄糖；高灵敏检测     

葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌纸及抗菌性研究

葡萄糖氧化酶是氧化葡萄糖的专一催化酶,具有脱氧、杀菌的功能。通过定性和定量抗菌实验方法研究了葡萄糖/葡萄糖氧化酶体系在以淀粉作为载体和不混合淀粉时施涂于纸张表面的抗菌效果。定性抗菌实验表明,葡萄糖/葡萄糖氧化酶抗菌纸具有良好的抗菌效果。而定量检测结果表明,pH等于5.5时,35℃反应10min,不添加淀粉时,葡萄糖氧化酶最小的抑菌浓度约为70U/m2,葡萄糖足量时,酶用量越高,抗菌率越好;添加0.7g/m2淀粉后,最小抑菌浓度提高到约650U/m2。淀粉对葡萄糖/葡萄糖氧化酶体系的抗菌效果有较大影响,主要原因是淀粉能够促进细菌的繁殖。     

电沉积法构建AChE/COD@AuNPs共固定化酶生物传感器差分脉冲伏安法快速检测有机磷农药

有机磷农药残留危害环境和人类健康。本文采用电沉积法将乙酰胆碱酯酶(AChE)与胆碱氧化酶(COD)固定化,共修饰于裸金电极表面,构建新型固定化酶生物传感器。通过电子显微镜对固定化酶形貌进行表征,结果表明：当固定化酶生物传感器上,乙酰胆碱酯酶与乙酰胆碱氧化酶的共修饰层数为2层,修饰圈数为35圈,在氯化乙酰胆碱浓度为2 mmol/L,pH 7.8的检测体系中,该生物传感器能够识别有机磷农药信号,且检测性能尚佳。传感器在有机磷农药质量浓度为10^-9～10-7mg/L时电流响应良好,工作曲线方程为y=0.0468x+1.2124(R²=0.9985),最低检出限1.15×10^-11 mg/L(S/N=3)。本研究为现场快速检测有机磷农药提供了新的研究方法。     

FAD核酸适配体生物传感器的制备及其葡萄糖检测的应用

以纳米金（gold nanoparticles,AuNPs）为主体,甲烷氧化菌素（methanobactin,Mb）和黄素腺嘌呤二核苷酸（flavin adenine dinucleotide,FAD）为配体构建FAD核酸适配体传感器。利用AuNPs颗粒较强的吸附能力,将Mb包裹于纳米颗粒上,形成稳定的Mb-AuNPs结构体。采用滴涂法将Mb-AuNPs结构体修饰于裸金电极表面,借助Mb结构中的—COOH与FAD牢固结合,将FAD引入Mb-AuNPs结构体上,提高对葡萄糖的识别能力,从而构建具备葡萄糖氧化酶活性的新型核酸适配体生物传感器。通过循环伏安法及时间-电流曲线法探讨其应用于葡萄糖检测的可行性。在温度25 ℃、pH 7.2时,葡萄糖浓度为10～200 μmol/L,与该生物传感器的响应电流存在良好的线性关系,R2为0.997 91,检出限为4.22×10－8 mol/L（RSN=3）。该核酸适配体传感器具有制备简单、价格低廉、易于操作、可快速检测等优点。     

金磁微粒模拟酶检测食品中的葡萄糖

采用水热法制备Fe3O4纳米粒子,并通过对其表面氨基化与金纳米粒子自组装方法构建金磁微粒（Fe3O4@Au）,并表征其性能。在其具有模拟过氧化物酶活性的基础上结合葡萄糖在葡萄糖氧化酶作用下产生H2O2,并与过氧化物酶底物二胺盐产生显色反应的原理,建立可视化检测葡萄糖含量的简便方法,并优化葡萄糖检测体系,并对其选择性和回收率进行分析。结果表明,氨基化的Fe3O4纳米粒子可以有效固载金纳米粒子,Fe3O4@Au饱和磁化强度为43 emu/g。检测体系最优工艺组合为：Fe3O4@Au混悬液质量浓度0.15 g/mL、温度70 ℃、时间50 min。在优化条件下,葡萄糖在1～20 mmol/L范围内具有良好的线性关系,线性相关系数R2为0.992 5,检出限为2.45 μmol/L,加标回收率在96%～104%之间,并具有良好的选择性和稳定性。本研究将拓宽纳米材料模拟酶在食品检测的应用并为葡萄糖检测方法的改进提供一种新的思路。     

一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法

采用SBA-40C型生物传感分析仪建立了一种葡萄糖氧化酶活力的快速测定方法。利用生物传感分析仪检测葡萄糖质量浓度的工作原理,葡萄糖氧化酶专一性地与β-D-葡萄糖反应,产生的过氧化氢在过氧化氢电极表面上发生电子转移,内置电子元件将电信号转变为数字信号,用已知活性单位的葡萄糖氧化酶作为测定标准定标后,即可在仪器上直接测出待测样品的葡萄糖氧化酶活性单位。结果表明:利用生物传感分析仪测定葡萄糖氧化酶活力时,缓冲液最佳p H为6.5,测定时间20 s,操作周期小于60 s,连续10次测定RSD值为0.63%,0~100 U/m L的范围内线性良好,r=0.999 1。该方法专一性高、简便、快速、准确、重复性好,适用于样品数目较多的葡萄糖氧化酶活力的快速测定。     

一种检测葡萄糖氧化酶活力的新方法

在葡萄糖氧化酶研发生产过程中,需要对发酵液进行酶活力检测。目前常用的方法有滴定法、电化学法和连续分光光度法,但这些方法均因其独立重复实验误差较大而缺乏实用性。因此建立一种操作简单、快速、重现性好、成本低的检测方法,是葡萄糖氧化酶研发生产中亟待解决的问题。该项研究在生产实践中,开发建立了一种新的葡萄糖氧化酶活性测定方法:碘-淀粉分光光度法。以β-D-葡萄糖为底物,利用葡萄糖氧化酶特异性催化作用,生成中间产物过氧化氢,再通过碘-淀粉分光光度法定量测定过氧化氢含量,进而计算葡萄糖氧化酶活力。结果表明:反应体系在葡萄糖氧化酶浓度为0.1～0.5 U/mL范围时,检测平行性良好,独立重复实验酶活力计算结果相对偏差小于5%,在统计学分析误差范围内。     

基于硫代胆碱调控SERS基底检测茶叶中痕量氧乐果

以维多利亚蓝B(victoria blue B,VBB)为探针分子，利用表面增强拉曼散射(surface enhanced Raman scattering,SERS)结合酶催化反应构建氧乐果快速检测方法。结果表明，在水浴温度为37℃，将乙酰胆碱酯酶活化15 min，再进行酶催化反应15 min，反应后静置10 min，滴加金纳米溶胶后再静置15 min，在检测体系中乙酰胆碱酯酶、碘化乙酰硫代胆碱、金纳米溶胶、VBB的浓度分别为5μg/mL、5μmol/L、0.195μg/mL、0.25μmol/L条件下，建立的检测体系在1 614 cm^-1处的SERS吸收峰值△I与3.5 ng/L～403.5 ng/L的氧乐果浓度呈良好的线性关系，相关系数为R2=0.995 8，检出限为1.90×10-4ng/L。当常见离子和农药在体系中共存时，对氧乐果的测定不产生干扰，说明体系稳定性良好。加标回收率为99.02%，相对标准偏差为1.17%。     

基于CdTe/CdS量子点荧光淬灭方法检测自来水和果汁中汞离子

本文基于巯基乙酸修饰的核壳型CdTe/CdS量子点建立了Hg2+的检测方法。对检测条件进行优化并利用荧光光谱仪和紫外-可见吸收光谱仪对量子点荧光强度进行表征。结果表明:在Tris-HCl缓冲溶液浓度为0.05 mol/L,pH8.0,室温反应15 min的条件下,不同浓度Hg2+(10-6~10-4 mol/L)对量子点具有较好的荧光猝灭效果,且随着Hg2+溶液浓度增加,其对量子点的荧光猝灭效果逐渐增强。该方法对Hg2+的理论检出限为2.667 nmol/L,低于自来水检测标准;对果汁样品中Hg2+的检测灵敏度为2.0×10-5 mol/L。因此,本研究为果汁体系中重金属的检测提供了一种新的思路和方法。     

草鱼胰蛋白酶的亲和纯化及酶学性质

从草鱼肝胰腺中提取胰蛋白酶,经匀浆、硫酸铵分级沉淀、透析得到胰蛋白酶粗酶液,通过BTI-Sepharose亲和层析一步纯化得到电泳纯的草鱼胰蛋白酶,并进一步研究该胰蛋白酶的酶学性质。结果表明：草鱼胰蛋白酶的分子质量约为27 kDa,米氏常数Km为3.4×10－5 mol/L;最适反应温度为60 ℃,在低于60 ℃条件下稳定;最适pH值为9.5,酸碱耐受范围为pH 6.0～12.0;Ba2＋、Mg2＋、Fe2＋在0～10 mmol/L范围内对该酶具有一定激活作用,而乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA）、K＋在0～10 mmol/L范围内对该酶有一定抑制作用,EDTA较K＋对酶的抑制作用更明显。     

亚甲基蓝及其代谢产物与牛血清白蛋白相互作用的研究

采用多种光谱法研究了亚甲基蓝(MB)及其代谢产物天青B(AZB)与牛血清白蛋白(BSA)之间的共同作用机制。实验结果表明,MB和AZB对BSA的荧光猝灭均为静态猝灭。298K时MB和AZB与BSA的结合常数分别为1.71×10⁵ L/mol和8.83×10⁴ L/mol。由熵和焓推断,MB和AZB与BSA的作用力类型均主要为静电作用。位点竞争实验结果表明MB和AZB均结合在BSA的SiteⅠ。紫外-可见吸收光谱法实验结果表明,MB和AZB诱导BSA的构象改变。三者共存时,AZB会与MB竞争结合BSA,减小MB与BSA作用的猝灭常数和结合常数,改变MB与BSA的作用力类型。     

芦荟多酚氧化酶特性的研究

研究了芦荟多酚氧化酶的基本性质。以邻苯二酚为底物,采用分光光度法在4 10nm处测定芦荟多酚氧化酶的活性,研究了温度、pH值、底物浓度以及酶浓度对其活性的影响,并建立了酶促褐变反应动力学方程。实验结果表明,芦荟多酚氧化酶的最适温度为4 0℃,最适pH值为6 5 ,其酶促褐变反应动力学符合米氏方程所描述的单底物酶促反应动力学,相应的动力学参数Km=0 2 8mol/L ,Vmax=2 32×10 -2 U/min。文中还研究了利用蛋白酶抑制褐变的方法,以芦荟多酚氧化酶液(mL)∶木瓜蛋白酶(mL ,浓度0 5mg/mL) =5∶1的比例向芦荟多酚氧化酶粗酶液中添加木瓜蛋白酶,在5 5℃、pH5 7条件下,水解10min可较好地抑制多酚氧化酶的活性,从而抑制芦荟的酶促褐变。     

共振光散射法测定食品中锌含量

基于在pH8.5氯化铵-氨水缓冲溶液中,Zn2+与邻菲啰啉和亮黄发生反应,可使共振光散射显著增强,建立共振光散射法测定锌的新方法。考察测定影响因素,确定最佳测定条件为10mL比色管中加入pH8.5氯化铵-氨水缓冲溶液1.0mL、1.0×10-4mol/L邻菲啰啉溶液1.5mL和5.0×10-5mol/L亮黄溶液0.8mL,反应温度30℃,反应时间4min;最大共振光散射峰位于359.4nm,共振散射光强度增加值与Zn2+质量浓度在0～10μg/L范围内线性关系良好,方法的检出限为0.11μg/L,对样品进行测定,相对标准偏差为0.96%～1.71%(n＝5),平均回收率为98.00%～102.67%。本方法可用于测定香蕉、黄瓜和紫菜中锌含量,结果与原子吸收光谱法一致。     

聚硫堇修饰的一次性葡萄糖生物传感器的研制

研制了一种用于食品中葡萄糖快速检测的一次性电化学酶传感器。通过循环伏安法将电子媒介体硫堇电聚合在丝网印刷碳(SPCE)电极上,然后用壳聚糖二氧化硅溶胶凝胶包埋葡萄糖氧化酶,涂布于已修饰硫堇的丝网印刷碳电极表面,制成了新型葡萄糖生物传感器。实验表明该传感器响应快、灵敏度高、稳定性好,在对葡萄糖测定中表现出良好的响应特性,并具有抗柠檬酸、抗坏血酸、苯甲酸钠、蔗糖、果糖等干扰的特点。在葡萄糖浓度为5.2×10-5～2.5×10-3mol/L,酶电极的响应电流的变化值与葡萄糖的浓度呈良好的线性关系,线性方程为Y=0.049 01+2.729 32x,最低检出限为4.96×10-6mol/L。     

表面增强拉曼光谱法灵敏检测亚硫酸根离子

通过可控自组装途径,开发一种基于4-巯基苯硼酸（4-mercaptoboric acid,4-MPBA）探针的表面增强拉曼散射（surface-enhanced Raman scattering,SERS）芯片的超灵敏亚硫酸根离子（SO32－）定量技术。该技术借助SO32－到SO42－的氧化转化特性,利用Lewis酸碱配位原理,建立基于特征峰1 382 cm－1与1 070 cm－1的比率型定量检测方程。该比率定量策略排除了SERS基底不均匀导致的检测误差,有效提高检测信号获取的可靠性,检出限低至5×10－8 mol/L,并在5×10－8～1×10－3 mol/L的浓度范围内呈良好线性关系（R2＝0.997 4）。检测到白糖中SO32－含量为1.42 mg/kg,加标回收率在98.38%～107.82%之间,说明该方法对于实际样品中SO32－的痕量检测具有极大优势。     

酶催化分光光度法测定L-酪氨酸

利用L-酪氨酸对酶催化体系的抑制作用,建立了一种操作简便、灵敏的分析L-酪氨酸的新方法。优化了该抑制体系的实验条件,L-酪氨酸5.0×10-7mol/L~1.0×10-4mol/L浓度范围内与抑制率有较好的线性关系,检出限为2.6×10-7mol/L。将浓度为2.0×10-5mol/L的L-酪氨酸进行11次平行测定,其RSD为2.1%。该法已成功的应用于啤酒、葡萄酒中L-酪氨酸含量的测定。     

抗坏血酸在聚对苯二酚/铜复合膜修饰电极上电催化氧化行为的探究

利用电沉积法制备了聚对苯二酚/铜(PHQ/Cu)复合膜修饰电极,并采用循坏伏安法探究了抗坏血酸(AA)在该电极上的电催化氧化行为。结果表明,与裸电极、PHQ修饰电极相比,PHQ/Cu复合膜修饰电极对AA具有更好的催化作用,表明两种修饰剂对AA的电催化氧化有良好的协同催化作用;在0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=4.35)中,AA的氧化峰电流与其浓度在5×10-4~1.0×10-1 mol/L范围内呈良好的线性关系,线性方程为lgI=0.7364lgc+1.6932,R2=0.9959,检出限为2.0×10-5 mol/L。该复合膜修饰电极在冰箱内贮存9 h,其电化学信号基本保持不变,且共存物几乎不干扰AA的测定,表明电极具有良好的稳定性和较强的抗干扰能力,可以用于饮料中AA含量的测定,回收率在95.5%~109.1%之间。     

激光诱导荧光结合磁分离检测CP4-EPSPS基因

建立一种激光诱导荧光结合磁分离的检测技术，用于在线检测CP4-5-烯醇丙酮酸酯-3-磷酸合酶基因（CP4-5-enol acetate-3-phosphate synthase gene，CP4-EPSPS）。以氨基磁纳米粒子（magnetic nanoparticles，MNPs）为载体修饰cDNA，构建捕获基因探针，并设计FAM荧光标记的信号基因探针（sDNA）。在目的基因CP4-EPSPS（tDNA）存在的情况下，cDNA和sDNA通过碱基互补配对原则与tDNA结合形成双链结构。该结构通过毛细管时被磁场富集分离，然后在激光诱导荧光检测器的作用下在线检测其荧光信号。通过对MNPs质量浓度、捕获探针浓度、牛血清白蛋白质量浓度进行考察，在优化的实验条件下，在1.0×10－11～2.0×10－7?mol/L范围内，CP4-EPSPS基因浓度与荧光峰面积呈良好线性关系，检出限为4.0×10－12?mol/L（RSN=3），该方法成功应用于转基因大豆的聚合酶链式反应扩增产物的检测。