酶法辅助聚二乙醇-200提取金银花叶中绿原酸的工艺优化

为了优化酶法辅助聚二乙醇（PEG）-200提取金银花叶中绿原酸的工艺,利用单因素试验确定PEG-200体积分数、料液比、酶解时间等关键影响因素,以绿原酸提取率为响应值进行响应面优化分析。结果表明,金银花叶中绿原酸用纤维素酶辅助PEG-200提取的最佳条件为纤维素酶添加量为2%,料液比1∶27（g∶mL）,PEG-200体积分数50%,pH 4,55 ℃酶解2.0 h,提取温度90 ℃,提取时间15 min,在该条件下,绿原酸提取率为6.59%。该工艺环境友好、条件温和、提取效率高,可用于工业化提取金银花叶中绿原酸。     

响应面优化金银花绿原酸提取工艺及抗氧化作用研究

为进一步开发利用金银花资源,采用响应面法优化金银花绿原酸提取工艺条件,分析绿原酸的抗氧化性。试验结果表明:绿原酸最佳提取条件为乙醇浓度69%、料液比1∶23(g/mL)、超声温度44℃、超声时间20 min,绿原酸提取率验证结果为6.20%。金银花绿原酸DPPH自由基半数清除率为21.09μg/mL,具有较强的抗氧化活性。金银花绿原酸与芦丁间具有一定的协同抗氧化作用,且复配体积比9∶1时协同系数SE为1.09,表明两者间协同增效作用明显。     

金银花过氧化物酶的三相分离纯化及酶学性质

采用三相分离法提取纯化金银花中过氧化物酶,结果表明最优纯化条件为pH?5.60、硫酸铵质量浓度39.49?g/100?mL、提取液与叔丁醇体积比1∶1.38,在该条件下纯化倍数为5.849,回收率为87.64%。金银花过氧化物酶比活力为1 021.6 U/mg,色素清除率为92%;酶学性质研究表明:金银花过氧化物酶最适温度为30℃,热稳定范围为10~40℃;最适pH值为5,pH值稳定范围为4~7。在金银花过氧化物酶催化的双底物酶促反应中,当H_2O_2浓度一定时,酶对愈创木酚的Km值为8.12?mmol/L,vmax值为1.71?mmol/(min·L)。当愈创木酚浓度一定时,H_2O_2的Km值为0.822?mmol/L,vmax值为1.38?mmol/(min·L)。金银花过氧化物酶与底物的亲和力由强到弱依次是邻苯三酚、邻苯二酚、联甲氧基苯胺、愈创木酚。Ca~(2+)、Cu~(2+)、Zn~(2+)对金银花过氧化物酶有激活作用,Mg~(2+)、Mn~(2+)、柠檬酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸、亚硫酸钠、偏重亚硫酸钠、十二烷基磺酸钠对金银花过氧化物酶有不同程度的抑制作用。     

西番莲果皮中果胶的复合酶法提取工艺研究

实验以西番莲果皮为原料,以酶解pH、酶解时间、酶解温度、酶浓度与液料比为单因素,分别研究了四种酶(纤维素酶、半纤维素酶、木质素酶、淀粉酶)对西番莲果皮中果胶提取的影响,并确定将纤维素酶、半纤维素酶与木质素酶三者进行复配,然后以酶解p H、酶解时间、酶解温度和液料比为因子进行四因素三水平正交实验,以优化复合酶酶解工艺,最后通过响应面实验,确定了复合酶的添加量。实验优选得复合酶最适配比和最适酶解提取条件为:将纤维素酶0.8 g/100 g、半纤维素酶1.2 g/100 g、木质素酶0.2 g/100 g进行复配,液料比为6∶1 m L/g,p H为4,提取温度40℃,提取3.5 h,此时西番莲果皮的果胶提取得率可以达到2.63%±0.021%。     

表面活性剂改善高固体系木质纤维素酶水解的研究

本研究以木质素磺酸钠为主要助剂,考察其对经金属氯盐预处理的桉木粉在高固体系纤维素酶水解中的影响。结果表明,木质素磺酸钠的加入对高固体系的酶水解效率有较大促进作用,当木质素磺酸钠加入量为0.4%时,酶水解效率可达93.72%,与未添加样相比,酶水解效率提高了12.5个百分点。为进一步提高酶水解效率,将木质素磺酸钠分别与CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）和吐温80两种表面活性剂复配,结果表明,表面活性剂复配对高固体系的酶水解效率均有协同促进作用;当m(CTAB)∶m(木质素硫酸钠)为1.5∶1时,酶水解效率可达99.56%;m(吐温80)∶m(木质素磺酸钠)为1∶1时,酶水解效率为99.98%,纤维素基本可完全水解为还原糖。     

外源添加物对桑椹果酒高级醇的影响

通过在桑椹果酒发酵过程中添加外源物质,探究其对桑椹果酒高级醇含量的影响。结果表明:酶制剂(果胶酶、糖化酶、纤维素酶)、金属离子(Mg~(2+)、Ca~(2+)、K~+)、除谷氨酸外的可同化氮源(精氨酸、丙氨酸、磷酸氢二铵)都能显著降低桑椹果酒高级醇含量,其中纤维素酶、Mg~(2+)、K~+降低高级醇效果最好。对纤维素酶、Mg~(2+)、K~+进行响应面优化,得到的最佳配比为纤维素酶0. 2 g/L、KCl 20. 02 mg/L、MgCl_220. 17 mg/L,此实验条件下桑椹果酒高级醇含量为282. 34 mg/L,与未添加外源物质相比,高级醇含量降低了13. 26%。     

一株瘤胃源产纤维素酶菌株的筛选、鉴定及其酶学特性研究

该研究从西藏黄牛瘤胃液中筛选一株高产纤维素酶的菌株,通过形态观察、生理生化试验和分子生物学技术对其进行鉴定,并对其酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产纤维素酶的菌株N30,并被鉴定为灿烂类芽孢杆菌(Paenibacillus lautus),其发酵72 h时,纤维素酶活力最高,为15.6 U/m L。该纤维素酶的最适反应温度为55℃,在10～35℃之间保持较高的酶活力,相对酶活力80%;最适反应pH值为4.5,在p H 3.5～9.0时相对酶活60%;金属离子Ag~(2+)、K~(+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)、Zn~(2+)、Co~(+)对纤维素酶活力有促进作用,而金属离子Cu~(2+)对纤维素酶活力有抑制作用。     

金银花叶有效成分的抗氧化活性研究

建立高效液相转换波长法,测定金银花叶粗分物中绿原酸、木犀草素和木犀草苷的含量,绿原酸占水相原液的含量为2.05%,木犀草素、木犀草素在金银花叶粗提物EA相中的含量分别为1.12%、0.57%。以抗坏血酸(Vc)为阳性对照的,用DPPH?法、FRAP法、ORAC法三种体外抗氧化方法来测定和评价金银花叶有效成分的抗氧化作用。结果表明：金银花叶粗提物、粗分物、绿原酸.、木犀草素及木犀草苷均具有良好的抗氧化性,其中木犀草素的抗氧化能力最强,其IC50值为0.01764 mg/mL,还原能力1751.8±13.9 mmol/L,ORAC值23817.44 μmol Trolox/g。其次为粗分30%乙醇洗脱相,其IC50值为0.02548 mg/mL,还原能力933.8±11.6 mmol/L,ORAC值10557.97 μmol Trolox/g,且各物质随着抗氧化剂浓度及纯度的增加,抗氧化性逐渐增强。因此对金银花叶有效成分在抗氧化方面的应用具有广阔的开发利用前景,可作为新型的高效无毒的抗氧化剂。     

经胆碱氨基酸水溶液预处理的水稻秸秆中残余木质素对多糖酶水解抑制作用的研究

本文通过考察牛血清蛋白(BSA)的添加量和不同纤维素酶用量下其添加与否对水稻秸秆残渣中多糖酶水解效率的影响,以及比较不同木质素含量的底物对纤维素酶催化行为的影响来探讨[胆碱][氨基酸]处理水稻秸秆残渣后其残留木质素对纤维素酶活性的抑制作用大小。结果发现,低酶量下,BSA的添加对纤维素和半纤维素的酶水解降解度有轻微的促进作用,分别最多提高5%及7%;而高纤维素酶用量时,其促进作用甚微。且经该类离子液体处理后的不同木质素含量的水稻秸秆基本上对酶蛋白皆无显著吸附和抑制作用。可见,该类离子液体可去除部分木质素以提高酶分子对多糖底物的可及性,此为多糖酶水解效率提高的关键因素,而该法所形成的残余木质素对酶蛋白的非特异吸附或抑制作用相对较弱。     

纤维素酶法提取金银花中绿原酸工艺优化及其抗氧化活性

利用纤维素酶法提取金银花中绿原酸并优化提取工艺;以维生素C为阳性对照,利用铁离子还原法和羟自由基清除试验确定所得金银花绿原酸提取液的体外抗氧化活性。结果表明,各因素对金银花绿原酸提取率的影响顺序为纤维素酶添加量＞提取温度＞提取时间＞pH值,在纤维素酶添加量0.4%、提取温度50℃、提取时间50 min、pH4.5的条件下,金银花绿原酸提取率最高,达到40.10 mg/g。所得绿原酸提取液有较好的体外抗氧化活性,铁离子还原能力高于维生素C,0.5 mg/mL的绿原酸提取液对羟自由基清除率达44.51%,高于相同浓度维生素C的羟自由基清除率（28.48%）。