拮抗细菌对烟草花叶病毒(TMV)的抑制作用研究

从发生烟草花叶病毒(TMV)的烟田耕作层土样中分离到对TMV有拮抗作用的菌株By33和By88。生物测定试验表明,By33和By88的无菌发酵液对TMV的体外抑制作用分别为81.81%和83.29%,涂抹菌液24 h后接种TMV,仍有73.01%和66.98%的预防作用。硫酸铵沉淀无菌发酵液、PBS透析获得拮抗蛋白;拮抗蛋白对TMV的体外抑制作用分别为85.38%和87.47%,并且在274.00 nm处有明显的蛋白吸收峰,为典型的蛋白质吸收光谱。此外,通过叶圆片法和透析法生物测定表明,抗病毒蛋白与TMV粒子结合作用为不可逆,有抑制TMV在烟株体内复制的作用。     

烟草青枯病菌浸注烟苗的显症反应与对杂草根部带菌检测

为查明杂草根在青枯菌病害循环中的作用;用烟草青枯菌液浸注接种烟苗叶片后产生枯斑的迟早及扩展程度取决于接种体浓度,菌液浓度愈高,烟株枯死就愈快.用42种杂草根处理液接种烟苗后显症速率有很大差异,胜红蓟、牛繁缕等7种根处理液接种后2～3 d叶片出现枯斑,10 d内烟株枯死;千金子、看麦娘等27种根处理液接种后5～7 d叶片出现枯斑,11～20d烟株枯死;座地菊、小蓬草等8种根处理液接种10 d后只在叶片上出现黄斑-枯斑;病斑不扩展,镜检可见溢菌.用8种杂草根处理液涂抹在改良的SM-1平板上培养分离,胜红蓟和牛繁缕检出菌量104cfu/g根,千金子、看麦娘等4种检出103cfu/g根～102cfu/g根,座地菊和小蓬草未分离出青枯菌.结果表明杂草根处理液接种烟苗后显症迟早、枯死快慢与在改良的SM-1平板上分离菌量之间呈负相关.此法可用于烟草青枯病的侵染源带菌检测.     

拮抗TMV菌株By33产抗病毒蛋白分离纯化及发酵特性研究

从烟田耕层土壤分离获得对TMV有拮抗作用的菌株By33.其无菌发酵液对TMV的体外钝化作用为81.81%,涂抹菌液24 h后接种,仍有73.01%的防效;硫酸铵沉淀获得的活性蛋蛋白对TMV体外钝化作用为85.35%.粗提蛋白液经PEG浓缩、凝胶过滤和柱层析分离纯化,再经SDS-PAGE电泳确定该蛋白分子量为27.5 KDa,对TMV的钝化效果为80.8%.NB培养基在仞始pH6.5、温度30℃、通气最150 mL/500 mL、180 r/min发酵培养48 h,产物活性最高.     

两株根际促生细菌对TMV的生防作用研究

烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）是危害烟草的主要病毒之一,其寄主范围广、侵染力和抗逆性强,尚无有效的抗病毒药剂。利用植物根际促生细菌（PGPR）对寄主的促生以及对病毒的钝化作用进行病毒病早期预防,是控制TMV的有效途径。本文对筛选到的两株PGPR菌株Sa和Sk进行了菌株鉴定及促生和防病作用研究。结果表明:Sa为芽孢杆菌属（Bacillus sp.）、Sk为假单胞菌属（Pseudomonas sp.）。在霍格兰氏营养液中添加Sa、Sk的发酵上清液,能显著促进烟苗的根系发育和茎叶生长;“半叶法”试验结果显示Sa、Sk的发酵上清液能在体外钝化TMV,并且Sa的粗蛋白溶液、去蛋白上清、蛋白失活后的粗蛋白溶液对TMV的抑制效果分别为85.2%、83.1%、36.2%,说明Sa的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要包括蛋白和非蛋白两类;Sk的粗蛋白溶液、去蛋白上清抑制TMV的效果分别为88.0%、0%,说明Sk的发酵物中对TMV起钝化作用的活性物质主要为蛋白类。利用TMV30B侵染性克隆,观察到Sa、Sk发酵上清液能显著抑制病毒的初侵染。室内栽培烟株喷施Sa、Sk发酵上清后,对TMV的防效分别为27.71%和18.55%。芽孢杆菌Sa生防效果好于Sk,具备抗病毒剂的开发潜力。      

烟草野火病拮抗生防菌的筛选、鉴定与应用

为筛选出烟草野火病拮抗生防菌,开发防治烟草野火病的新型生物农药,降低烟叶农药残留,提高烟叶的安全性,从烟田采集的健康烟草叶片经平板划线法分离和纯化后得到287个细菌分离物,从中筛选到14个对烟草细菌性野火病有抑制作用的拮抗生防菌,测得其中具有较强抑制作用的菌株抑菌带宽度为9.3 mm,经16S rDNA序列鉴定,该菌属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。烟草叶片经该拮抗菌液诱导后接种,叶片内主要防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性均显著增强。防效测定表明:施用生防剂后接种野火病菌的处理,拮抗菌株防治效果达97.54%,对照农用链霉素防治效果为41.44%。先接种野火病菌后施生防剂的处理,拮抗菌株防治效果达51.40%,对照农用链霉素防治效果为50.69%。说明该拮抗菌株的预防效果高于当前生产上使用的农用链霉素,且其预防效果优于治疗效果。     

抗烟草疫霉活性木霉与芽孢杆菌共培养体系的构建与优化

为减轻化学药剂防治烟草疫霉带来的弊端,提高生防菌剂效果,通过琼脂糖扩散法筛选抗性木霉并构建木霉和枯草芽孢杆菌Tpb55共培养体系,采用菌丝生长速率法评价了种间互作防治烟草疫霉的效果,利用单因素法优化共培养体系的培养基成分和发酵条件,并通过盆栽试验验证其对烟草黑胫病的防治效果。结果表明,棘孢木霉HG1具有良好的抗烟草疫霉活性,与枯草芽孢杆菌Tpb55的共培养体系如下:HG1(10⁶CFU/mL)接种量为2%,与Tpb55(10⁶CFU/mL)接种比例为10:1,采用序列共培养方式,即先接种HG1,24h后接种Tpb55。优化后的最适培养基成分为木糖10 g/L,蛋白胨和酵母粉(质量比为2:1)5g/L;最佳发酵为温度25℃,初始pH7.5,转速140r/min。共培养发酵液盆栽防病效果显著优于单培养,防治效果达到74.72%。该体系发酵后能够明显提升两株生防菌抑制烟草疫霉的活性,并对烟草黑胫病具有显著防病效果,为后续多菌株共发酵生防菌剂的开发提供基础。     

纳米银对烟草花叶病毒(TMV)的抗性及作用机理

为了开发安全、高效、低毒的新型生物源抗烟草花叶病毒(TMV)药剂,用壳寡糖和壳寡糖席夫碱分别合成了壳寡糖纳米银(cos-Ag)和壳寡糖席夫碱纳米银(简称席夫碱纳米银,S-cos-Ag),并在珊西烟草和普通烟草品种秦烟96上进行了枯斑试验和与抗病性相关指标的测定。结果表明:1S-cos-Ag稀释30倍处理对TMV具有较好的预防和治疗效果,能够显著地减少感染TMV叶片的枯斑数目,预防效果达78.33%;2S-cos-Ag稀释30倍处理能够不同程度地提高烟草叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,同时叶绿素和可溶性蛋白含量也有明显增加,而丙二醛(MDA)含量有所下降。说明S-cos-Ag稀释30倍处理能够较好地诱导烟草对TMV产生抗性,提高烟草免疫力,从而减轻TMV对烟草的侵害。     

植物源抗病毒剂VFB-1防治烟草花叶病毒病研究

以植物源抗病毒剂VFB为基础,经配方改造和工艺改进,优化出了植物源抗病毒剂VFB-1。为探究VFB-1对烟草花叶病的防治作用,本研究采用半叶枯斑法测定了VFB-1对TMV的体外钝化、初侵染和复制增殖抑制活性;采用盆栽法和田间小区试验评价了VFB-1对烟草花叶病毒病的预防及治疗效果。结果表明,VFB-1对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用,钝化30min后,抑制率达82.77%;对TMV的初侵染和复制增殖具有较好的抑制作用,24 h的抑制率分别达到69.80%和54.07%?盆栽药效试验中,VFB-1100倍稀释液的预防效果为70.23%,治疗效果为35.70%;田间药效试验表明,VFB-1对烟草花叶病毒病有较好的预防和治疗作用,其200倍稀释液药后21d的预防效果仍为40%以上,400倍液的预防效果明显高于VFB,且与病毒A(20%吗啉胍·乙铜WP)相当;其200倍液14d的治疗效果显著高于VFB(200倍稀释液)和病毒A(400倍稀释液)处理。可见,植物源抗病毒剂VFB-1对TMV具有良好的预防和治疗效果,开发前景良好?     

两株烟草根际拮抗菌的生防和促生效果研究

使用植物根际促生细菌(PGPR)来防治土传病害是目前生物防治的研究热点。在温室内进行盆栽试验以研究从烟株根际筛选出的两株生防细菌对烟草黑胫病的防治和促生效果,试验设4个处理,分别为接种生防菌YC0573、YC0136、药剂对照(甲霜灵锰锌)和发病对照。结果表明,温室条件下YC0573和YC0136的防治效果分别达到90.9%和95.4%,均高于甲霜灵锰锌(86.4%);接种生防菌的烟株生长状况明显好于对照烟株。对不同生长期烟株叶片叶绿素含量、电解质相对渗透率以及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化氢酶等系统抗性相关指标进行测定,结果显示,两株拮抗菌可诱导烟株产生系统抗性(ISR),增强对病害的防御力,并且能有效防治烟草黑胫病,促进烟株生长,具有良好的应用潜力。     

壳寡糖膦酸酯对烟草花叶病毒抗性及其机理的初步研究

为开发新的生物源抗烟草花叶病毒(TMV)剂,对合成的5种壳寡糖膦酸酯进行了抗性盆栽试验研究,通过心叶烟的鉴定发现,5种药剂对TMV都具有显著的抗病效果,其中浓度为200 μg·mL-1的COS-P-3处理效果最佳,达到了90.79％的枯斑抑制率,分别比市售药剂二(辛基胺乙基)甘氨酸盐和宁南霉素提高51.8％和24.0％,显著提高了预防效果.用筛选出的抗病毒剂处理豫烟5号,烟草叶片的叶绿素含量比接种对照明显提高,而同时超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均有不同程度的提高.结果表明,新型壳寡糖膦酸酯COS-P-3通过诱导烟草防卫反应、提高防御酶活性,保护叶片中叶绿体合成,从而减轻病毒的侵害.