基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丁香酚

目的 采用免疫层析技术对丁香酚残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条的制备开展研究。方法 用柠檬酸三钠还原法制备胶体金纳米颗粒, 标记丁香酚单克隆抗体得到胶体金-丁香酚单克隆抗体复合物。以硝化纤维素膜为固相载体, 包被丁香酚-BSA偶联物为检测带(T带), 羊抗鼠IgG为质控带(C带), 建立了丁香酚的胶体金免疫层析快速检测试纸条。结果 胶体金免疫层析试纸条具有较高的灵敏度和特异性, 检出限为2.0 mg/L。结论 本研究所开发的胶体金免疫层析试纸条可作为快速测定丁香酚的可靠、低成本的方法。     

高灵敏黄曲霉毒素B1免疫层析定量检测法的建立

以胶体金为标记物,借助于胶体金读取仪,建立了高灵敏的定量检测黄曲霉毒素B_1的胶体金免疫层析方法。试纸条制备时,当标记溶液pH为6.0,检测线全抗原的使用浓度为1.5mg/mL,金标抗体浓度为4μg/mL、用量为1.2μL时,所建立方法的灵敏度为5.7ng/L。通过加速保存试验,结果显示该试纸条的保存期大于1年。该试纸条应用于实际谷物及酱油加标样本检测,证明该方法可满足食品快速检测的需要。     

胶体金免疫层析技术测定食品中黄原胶

目的:建立一种简便实用的胶体金免疫层析检测新方法,用于食品中黄原胶的快速筛查。方法:用黄原胶抗原标准品免疫新西兰大白兔,制备得到高效价的抗黄原胶多克隆抗体;采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,并将其与抗黄原胶多克隆抗体标记制得金标抗体;在硝酸纤维素膜检测线上,预包被黄原胶标准抗原,质控线上包被羊抗兔IgG,采用竞争法,制成黄原胶胶体金免疫层析检测试纸条,并对试纸条的特异性、敏感性和稳定性进行了试验。结果:该试纸条检测样品的敏感性为3g/kg。结论:研制出黄原胶胶体金免疫层析试纸条及其检测方法,该方法敏感性高、特异性强、操作简便,5min可出检测结果,可用于现场大量样品的快速检测。     

T-2毒素胶体金免疫层析快速检测试纸条的研制

应用胶体金免疫层析技术,研制出一种快速检测T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备20 nm胶体金,标记抗T-2毒素多克隆抗体并喷于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗兔二抗分别结合于硝酸纤维素膜上,经过试纸条层析条件优化,依次将样本垫、金标结合释放垫、硝酸纤维膜和吸水纸组装切割成胶体金试纸条。测试结果表明T-2毒素快速检测试纸条的灵敏度为50μg/L,检测时间为10 min,批内和批间重复性好,保存期为3个月。使用简单方便,非常适合现场快速检测T-2毒素。     

基于胶体金免疫层析技术的赤霉素快筛试纸条的研制

研制快速检测豆芽中赤霉素的快筛试纸条。采用免疫层析技术,以胶体金为标记物制备赤霉素单克隆抗体-胶体金偶联物,以竞争抑制模式制备赤霉素胶体金免疫层析试纸条。该试纸条对豆芽中赤霉素的检测限为100 μg/kg,灵敏度为98%,特异性为97%,假阴性率为2%,假阳性率为3%。该方法操作简便,具有较高的灵敏度和特异性,可广泛应用于豆芽中赤霉素残留的现场筛查和检测。     

纺织品中镉的胶体金免疫层析试纸条快速检测法

基于重金属镉单克隆抗体,研制了一种能简便快速筛查和检测纺织样品中镉的胶体金免疫层析试纸,优化了确定试纸的监测条件,并阐述该试纸的灵敏度、特异性和稳定性。结果表明,该试纸对纺织品中总镉含量和汗液中可萃取镉含量的检测限分别达到1 mg/kg和0.1 mg/kg,可在3~5 min内完成样品的定性或半定量测试;其灵敏度、特异性和稳定性均能满足实际样品的测试要求,适用于样品现场快速筛查和检测。     

氯化钙对花生中黄曲霉毒素B1提取及其快速检测结果的影响

以氯化钙为蛋白沉淀剂、黄曲霉毒素B1为靶标,探究了70％甲醇水（V/V）提取液中不同含量氯化钙对花生中黄曲霉毒素提取及其免疫检测结果的影响;采用样品加标回收的方法,研究比较了五种不同含量氯化钙对胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测结果的影响。研究结果表明,样品经含1％CaCl2（m／V）的甲醇水处理后,用胶体金免疫层析试纸条检测时,试纸条T线颜色梯度变化,不同浓度加标回收率等参数均得到明显改善,前处理效果显著;选取20份花生实际样品,经过这种前处理之后,进行胶体金免疫层析试纸条和ELISA检测,同时将其检测结果与免疫亲和层析高效液相色谱法（IAC-HPLC）进行比对,胶体金免疫层析试纸条与IAC-HPLC检测结果符合率为90％,间接竞争ELISA与IAC-HPLC检测结果相关系数达0．996,表明本研究所改进的样品前处理方法能提高免疫检测准确度,具有很好的应用性。     

T-2毒素快速定量检测试纸条的研究

为研制一种快速定量检测玉米中T-2毒素含量的胶体金试纸条,对T-2毒素单克隆抗体进行标记并对胶体金试纸条性能进行研究。用胶体金标记T-2毒素单克隆抗体,通过测定加入不同量碳酸钾后吸光度值的变化,确定标记的最佳p H值,通过与抗原进行正交试验确定最佳组合条件,应用胶体金定量读数仪通过检测线和对照线的对比,检测试纸条的性能。结果表明,单克隆抗体标记的最佳pH值为8.5,最佳标记浓度为20μg/m L,抗原的包被浓度为0.5 mg/mL,羊抗鼠IgG的包被浓度为1.0 mg/mL,试纸条检测T-2毒素标准品的检测限为5μg/kg。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条检测方法可得出具体数据,与常见真菌毒素无交叉反应,回收率在77%～117.6%之间,批内和批间重复性检测变异系数小于10%,玉米中T-2毒素的检测结果与高效液相法检测结果一致。T-2毒素胶体金快速定量检测试纸条可用于玉米中T-2毒素含量的快速定量检测。     

胶体金试纸条法快速筛查小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

以抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)单克隆抗体为基础,建立了胶体金免疫层析试纸条检测方法,用于小麦和玉米中DON的快速检测。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗DON单抗并喷于玻璃纤维垫上,DON-BSA和驴抗鼠二抗均匀划于NC膜上检测线和质控线位置,依次将样本垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装切割成试纸条并装入检测卡中。测试结果表明:该胶体金试纸条对纯标准品和人工污染样品的检测灵敏度分别为100μg/kg和500μg/kg,与除15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇外的21种生物毒素均无交叉反应,重复性和稳定性均良好,对实际样品的检测结果与液相色谱串联三重四级杆质谱(LC-MS/MS)比对结果相符。该检测方法非常适合用于现场的快速筛查,具有良好的应用前景。     

高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

胶体金免疫层析技术快速检测谷物中3种真菌毒素的研究

目的应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)的三联检测卡。方法优化胶体金溶液p H值、金标抗体量及抗原包被量制备3种胶体金试纸条,将试纸条组装成检测卡,研究该卡的检测限、准确度、特异性和稳定性。结果 AFB_1、ZEN和DON 3种试纸条的胶体金溶液最适p H值分别为7.5、7.5和7.0,金标抗体量分别为4.2、7.2和9.6μg/ml,抗原包被量分别为1.0、1.4和0.8 mg/ml。检测卡的检测结果与仪器检测结果基本一致,重复性较好,与结构类似物及其他霉菌毒素无交叉反应,在室温条件下可以保存12个月。结论该三联检测卡操作简便、快速、准确、稳定,且能同时检测3种真菌毒素,在谷物的现场检测中有较好的应用前景。     

胶体金免疫层析法定量检测烟叶中霜霉威残留

【背景和目的】利用胶体金免疫层析技术研制霜霉威定量检测试纸条,并探究其在烟叶样品中的应用。【方法】将霜霉威单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制备金标抗体,优化试纸条反应材料,构建霜霉威免疫层析定量试纸条,验证该试纸条的检出限、定量限、准确性和特异性。【结果】（1）所研制的霜霉威定量试纸条的检测范围为1.25～20 mg/kg,检出限和定量限分别为1.187 mg/kg和3.147 mg/kg;加标回收率84.7%～116.7%,相对标准偏差5.3%～10.9%。（2）可特异性识别霜霉威,对烟草中常用杀菌剂无交叉反应。（3）试纸条检测结果与高效液相色谱-串联质谱法检测结果的相对误差在4.3%～20.1%,R2=0.9898。【结论】该试纸条具有操作方便、检测时间短、准确性高、特异性强的优点,可作为霜霉威残留现场检测的有效手段。     

乳品中多种抗生素残留胶体金检测方法研究

研究用于牛奶和奶粉中多种抗生素残留同时检测的胶体金免疫层析试纸条。基于胶体金免疫层析技术,搭建抗原包被体系和胶体金标记抗体体系,优化检测方法,考察胶体金快速检测试纸条的检测灵敏度、特异性、准确度和实际样本适应性。试纸条可同时检测卡那霉素、红霉素、林可霉素3种药物在牛奶、奶粉中的残留,检测限分别为50.0,20.0和75.0μg/L,假阳性率和假阴性率均为0,样本无需前处理,检测操作简单,10 min内实现3种药物同时检测。采用胶体金试纸条和液相色谱串联质谱法对20份牛奶和奶粉盲样进行比对试验,阳性样品全部检出,2种方法测定结果一致。建立的胶体金免疫层析技术及试纸条检测准确可靠,适用于现场大批量样本的快速检测和筛选。     

快速检测沙门氏菌的荧光免疫试纸的研制

研制一种基于低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条,用于沙门氏菌快速、高敏、兼顾定性及精准定量的检测。采用低噪声激发式荧光染料作为标记,采用免疫层析技术,制备靶向于沙门氏菌的免疫层析试纸条。检测时,采用专用便携式低噪声激发式荧光扫描仪分别扫描质控线和检测线,以检测线荧光强度检测值实现样本的定性及定量检测,并对免疫层析试纸条各项性能进行评价。低噪声激发式荧光沙门氏菌免疫层析检测试纸条制备成功,免疫层析试纸条性能检测结果显示,该试纸条特异性强、灵敏度高、检测限可达到0.5×10~3 CFU/mL,是一种新型快速高效稳定的检测方法。该免疫层析试纸条可适用于食品及病理样本中沙门氏菌初筛和即时检测。     

一种快速检测呕吐毒素的胶体金试纸条

利用胶体金免疫层析法,研制了一种能够快速检测黄豆中呕吐毒素含量的试纸条。通过试验,胶体金试纸条对呕吐毒素的检测限是1μg/g,对玉米赤霉烯酮毒素、黄曲霉毒素B1、赭曲毒素A等无交叉反应,假阳性率和假阴性率均为0,检测时间为10min。试纸条能够准确、可靠、简便、快速地检测黄豆中残留的呕吐毒素,适合大量样品的现场检测。     

量子点标记免疫层析试纸条快速检测谷物中赭曲霉毒素A

目的:根据竞争抑制免疫层析原理,构建一种基于量子点标记的免疫层析试纸条用于检测谷物中赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)的残留量。方法:通过活化酯法将羧基功能化的量子点(Quantum dot,QD)与赭曲霉毒素A多克隆抗体(Antibody,Ab)偶联制备量子点抗体偶联物(QD-Ab);通过分别添加不同量的QD-Ab和工作液,优化量子点标记免疫层析试纸条的工作条件;通过商品化试剂盒验证该方法的有效性。结果:当QD与Ab的摩尔比为1:10时,QD-Ab荧光特性最佳;在QD-Ab和工作液添加量分别为1、10 μL时,量子点标记免疫层析试纸条结果最佳;量子点标记免疫层析试纸条的检测限为0.5 μg/L,谷物样品中的检测限为5 μg/kg,整个检测过程不超过10 min;量子点标记免疫层析试纸条特异性良好且具有有效性。结论:该方法操作简便、检测快速、结果准确灵敏,易于判断,可以满足谷物中赭曲霉毒素A残留量现场快速检测的要求。     

时间分辨荧光免疫层析试纸条在油料饼粕黄曲霉毒素B_1检测中的应用

采用黄曲霉毒素时间分辨荧光免疫层析试纸条及配套的时间分辨荧光速测仪,对油料饼粕中黄曲霉毒素B1的快速检测进行了应用研究。该时间分辨荧光免疫分析技术是基于时间分辨荧光免疫层析试纸条和载有Eu（Ⅲ）标记特异性单克隆抗体的样品瓶建立的检测技术。时间分辨荧光速测仪可内置标准曲线,直接输出检测结果。对6种油料饼粕做黄曲霉毒素B1添加回收率实验,回收率在70%~120%之间,批间、批内变异系数〈15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术与液相色谱-串联质谱法相比,检测结果相对误差〈15%。时间分辨荧光免疫层析试纸条检测技术测定快速、准确,技术稳定、可靠,设备经济、小型,适用于大批量油料饼粕样品的快速检测和风险评估。     

铅胶体金免疫层析试纸条研制及其在小龙虾中的应用

目的 利用胶体金免疫层析技术对重金属铅检测试纸条进行研制,并探究其在小龙虾样品中的应用。方法 使用胶体金和重金属铅单克隆抗体制备免疫探针。优化反应体系,构建重金属铅免疫层析检测试纸条。验证该试纸条的检测限、特异性、准确性和稳定性,并对小龙虾样品进行检测。结果 所研制的重金属铅胶体金免疫层析试纸条的检测限为6 ng/mL,检测时间为15 min。该试纸条可特异性识别铅,而对其他常见重金属无交叉反应。结论 本实验研制的试纸条性能良好,能够准确判定小龙虾中重金属铅是否超标。     

胶体金免疫层析法快速检测动物源性食品中土霉素残留

为建立用于快速检测食品中土霉素残留的胶体金免疫层析试纸条。本试验用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,胶体金粒径选用20 nm,经鉴定将制备成功的胶体金溶液与土霉素多克隆抗体结合得到金标抗体。优化金标抗体的制备条件,经鉴定金标抗体制备成功。将检测抗原（1.0 mg/mL）和羊抗鼠二抗（0.75 mg/mL）分别作为检测线和质控线包被在硝酸纤维素膜（NC膜）上,金标抗体按一定浓度包被在玻璃纤维垫上,对样品垫和吸收垫进行裁剪处理,通过上述预处理将每部分依次叠加粘贴至底板,制成胶体金试纸条。结果表明,土霉素胶体金试纸条的检出限为25 μg/L;土霉素胶体金免疫层析试纸条与其他常见兽药（非本族兽药）无交叉反应。该试纸条具有较强特异性、检测时间短、操作方便等优点,可作为土霉素残留现场检查的有效手段。     

牛奶中黄曲霉毒素M1胶体金试纸条的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测牛奶中黄曲霉毒素M1的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,单克隆抗体胶体金标记物的制备并冻干成微孔试剂,样品吸收垫和反应膜的制备,试纸条的组装。所研制的黄曲霉毒素M1快速检测试纸条的检测限为0.3μg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率为0。试纸条使用简单方便,适合进行现场快速检测牛奶中残留的黄曲霉毒素M1。