免疫磁珠高通量自动净化-超高效液相色谱法快速测定饲料中玉米赤霉烯酮

采用免疫磁珠净化饲料原料及其产品中的玉米赤霉烯酮,实现玉米赤霉烯酮的自动富集、清洗和洗脱,结合超高效液相色谱对玉米赤霉烯酮进行分析测试。本文对饲料样品稀释液进行了优化。根据3倍信噪比的峰响应值,本方法玉米赤霉烯酮的检出限为4.5 μg/kg,定量限为15.0 μg/kg,在10~500 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数（R2）为0.99993。玉米赤霉烯酮在鸡饲料和猪饲料样品中的加标回收率为92.6%~112.9%,相对标准偏差为1.0%~8.8%。对同一饲料基质进行连续4天同一浓度的加标实验,回收率为97.0%~98.9%,日间精密度在5.7%~5.9%。使用本方法与免疫亲和柱法进行比较,检测了19种饲料样品,t检验显示本方法与免疫亲和柱法无显著性差异。免疫磁珠自动净化法可同时净化24个样品,无需人员手动操作,减少实验误差,提高检测效率,满足饲料中玉米赤霉烯酮的日常检测要求。     

原料乳中玉米赤霉烯酮胶体金免疫试纸条检测方法的建立

采用柠檬酸三钠法合成胶体金,与抗玉米赤霉烯酮单抗(ZEA-m Ab)制成抗体-胶体金标记物,包被于胶体金结合垫上。玉米赤霉烯酮半抗原和蛋白的偶联物(ZEA-BSA)和羊抗鼠Ig G分别喷涂于硝酸纤维素膜作为检测线(T线)和质控线(C线),建立原料乳中玉米赤霉烯酮(ZEA)的胶体金免疫试纸条检测法。结果显示,试纸条的灵敏度为30n g/m L,与其他毒素无交叉反应,10 min内即可肉眼观察结果。检测添加有玉米赤霉烯酮的原料乳样品,该试纸条的检测限为50 ng/m L。方法可用于原料乳中玉米赤霉烯酮的快速检测。     

玉米赤霉烯酮时间分辨荧光试纸条的制备及特性研究（网络首发、推荐阅读）

研究制备一种基于时间分辨荧光免疫层析法的玉米赤霉烯酮（ZEN）快速定量检测试纸条。采用铕纳米微球作为荧光探针,标记抗ZEN的单克隆抗体,应用竞争抑制原理建立免疫层析定量方法并对其进行方法学考核。结果表明：ZEN荧光试纸条的灵敏度为0.1 ng/mL,线性范围为0.1~5.0 ng/mL,玉米、小麦阴性样品的加标回收率在93.45%~112.20%之间,对于同一个样品5次重复测定的变异系数小于15%。ZEN快速定量检测试纸条具有灵敏度高、反应时间短、准确定量、稳定性好等技术特点,适用于谷物及制品中玉米赤霉烯酮的快速定量检测。     

玉米油中玉米赤霉烯酮胶体金快速检测条法和高效液相色谱检测法的比较

目的 建立胶体金快速检测条法测定玉米油中玉米赤霉烯酮含量的分析方法, 并与高效液相色谱法作比对。方法 分别运用胶体金快速检测条法和免疫亲和层析净化高效液相色谱检测法对14个玉米油中玉米赤霉烯酮的含量进行检测。结果 对实验结果进行成对样本t-检验, 发现2种实验方法所得出的结果在95%的置信水平上无显著差异。同时运用胶体金快速检测条法对每个样品进行6次重复实验, 分析其变异系数范围在2.9%~6.3%, 说明此种方法的重复性较好。结论 胶体金检测条法可以作为玉米油中玉米赤霉烯酮的快速检测方法。     

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法检测小麦中玉米赤霉烯酮

用50 ml乙腈-水(体积比90:10)萃取小麦试样,提取液稀释过滤后经含有玉米赤霉烯酮特异性抗体的Zearala Test免疫亲和柱层析净化,甲醇1.5 ml洗脱,洗脱液用C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm)分离,流动相为乙腈-水(体积比60∶40)混合溶液,流速为1.0 ml/min,采用荧光检测小麦中玉米赤霉烯酮.试验结果表明,玉米赤霉烯酮质量浓度在10.0～500.0 μg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系,方法的检出限(3S/N)为5.0 μg/L.应用此方法分析小麦加标样品,试样的平均回收率为83.7％～86.5％,测定值的相对标准偏差均小于5.0％,符合小麦中玉米赤霉烯酮的检测要求.     

高效液相色谱法对玉米中玉米赤霉烯酮的测定

研究了高效液相色谱法测定玉米中玉米赤霉烯酮的方法.样品借鉴了GB/T 19540-2004中提取玉米赤霉烯酮的方法,通过Oasis HLB净化柱对提取液净化,以agilent extent C18色谱柱为分离柱,乙腈-水(V水:V乙腈=55:45)为流动相进行荧光检测(λex=235 nm,λem=460 nm).玉米赤霉烯酮的质量浓度在12～2 400μ/kg范围内呈良好线性,相关系数为0.9994,对添加高、中、低3个浓度玉米赤霉烯酮的玉米样品进行加标回收试验,平均回收率分别为96.736%、93.839%、86.240%,变异系数在1%～10%之间,最低检测限为10μ/kg.此方法对玉米中玉米赤霉烯酮的检测是可行的,且可给谷物中玉米赤霉烯酮检测方法优化提供参考.     

免疫磁珠高通量自动净化-超高效液相色谱法测定粮食中玉米赤霉烯酮

基于免疫磁珠高通量自动净化的前处理方法,使用超高效液相色谱仪对粮食中玉米赤霉烯酮的含量进行测定。首先将免疫磁珠与玉米赤霉烯酮的反应时间、样品提取液和不同粮食基质的净化效果进行优化。经方法验证,超高效液相色谱的检出限和定量限分别为3.5 μg/kg和12.0 μg/kg。在优化条件下,全麦粉和玉米全粉阴性样品的3 个添加水平的加标回收率在99.04%～109.26%之间,变异系数不大于6.88%。玉米全粉、全麦粉、糙米粉、小麦粉等粮食基质中玉米赤霉烯酮成分的国家有证标准物质或质控样品的测定结果在标准值及其扩展不确定度范围内,变异系数不大于3.54%,测定结果较为满意。采用Bland-Altman法对免疫磁珠净化法和免疫亲和柱净化法之间的差异进行分析,结果显示这2 种净化方法的差异在可接受范围内,因此,这2 种方法在净化和富集粮食中玉米赤霉烯酮时可互相代替使用。免疫磁珠净化方法配套使用的真菌毒素全自动净化仪可同时净化10～24 个样品,平均每个样品的净化时间约为2～3 min,实现粮食中玉米赤霉烯酮的高通量自动净化。超高效液相色谱分析速度快、灵敏度高、准确性高,可用于检测粮食中玉米赤霉烯酮的含量。     

谷物中玉米赤霉烯酮残留的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、针对谷物中玉米赤霉烯酮残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出玉米赤霉烯酮胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对谷物中玉米赤霉烯酮的检测限为100μg/kg,灵敏度为99%,特异性为94%,假阴性率为1%,假阳性率为6%,检测时间为10 min。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于现场快速检测谷物中的玉米赤霉烯酮。     

免疫快速同步检测玉米中五种真菌毒素胶体金试纸条的构建和应用

玉米作为重要的粮食和饲料来源，容易受到多种真菌毒素的污染，给居民健康和养殖业造成严重的危害。本文优化了适合五种真菌毒素（黄曲霉毒素B1、伏马毒素、T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇和玉米赤霉烯酮）同时提取的样品前处理方法，并构建了五检测线胶体金试纸条，检测结果可以通过肉眼定性，结合Image J软件可以进行定量分析，并应用于实际玉米样品检测。结果表明，最佳提取条件为90%乙腈/水，涡旋20 min，样品的添加回收率为71.9%-113.3%，相对标准偏差为0.9%-7.5%；测定基质添加样品建立标准曲线，通过肉眼判定得到五种真菌毒素的消线值分别为80.0、1000.0、100.0、400.0和200.0 μg/kg；结合Image J 软件提取多重检测试纸条的检测线灰度值，结果表明当AFB1、FB1、T-2、DON和ZEN的浓度为8.0、20.0、10.0、40.0、20.0 μg/kg时，各真菌毒素浓度对应的检测线显色值比空白对照显色值低。最后，通过检测11个实际玉米样品，结果表明部分玉米样品受到了不同程度的AFB1、DON和ZEN的污染。因此，本研究开发的免疫快速同步检测玉米中五种真菌毒素胶体金试纸条可以用于玉米中真菌毒素的现场快速筛查。     

玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研制

目的 应用胶体金免疫层析技术, 研制一种玉米等谷物中玉米赤霉烯酮残留免疫胶体金快速检测试剂板。方法 将制备的羊抗鼠IgG、人工结合抗原和金标抗体三者经过反复调试优化, 以适宜浓度和包被量分别包被到硝酸纤维素膜和胶体金结合垫上。包被后的硝酸纤维素膜和样品垫、胶体金结合垫、吸水垫及其他辅料组装成试纸条。结果 该试剂板的最低检测限为100 μg/kg, 整个检测过程仅15 min, 与其他霉菌毒素无交叉反应。结论 该试剂板可用于玉米赤霉烯酮残留快速检测。     

电子鼻融合BP神经网络预测玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B1含量模型研究

为探究玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B_1的无损快速定量测定方法,用电子鼻对7级不同霉变程度玉米样品进行检测,并用理化分析方法分别测定霉变玉米中的玉米赤霉烯酮与黄曲霉毒素B_1含量;在提取电子鼻响应信号的积分值作为特征参量的前提下,采用BP神经网络建立不同霉变程度下玉米样品中的玉米赤霉烯酮与黄曲霉毒素B_1含量的预测模型。同时,为了获得较为可靠的BP神经网络预测模型,在神经网络结构不变的条件下,对比分析了不同训练集、测试集构建的预测模型。结果发现在各预测模型的70组测试样本中,相对误差控制在5%以内的样本数量都在60个以上,最大相对误差控制在15%以内,从而证明了BP神经网络预测模型的有效性、可靠性。该研究为实施玉米霉变毒素的快速无损检测提供了一种途径。     

Development of a Simultaneous Lateral Flow Strip Test for the Rapid and Simple Detection of Deoxynivalenol and Zearalenone

The objective of this study was to develop a 1‐step simultaneous lateral flow strip test for the rapid and simple detection of deoxynivalenol (DON) and zearalenone (ZEA) in grains. Two monoclonal antibodies (MAbs) against DON and ZEA were respectively conjugated with gold nanoparticles and used to develop a lateral flow strip test for a single toxin and multiple toxins. First, individual lateral flow strips for a single toxin were optimized, and their conditions were used to develop a simultaneous lateral flow strip for multiple toxins. Limits of detection of both lateral flow strip tests for DON and ZEA were the same (DON: 50 ng/mL, ZEA: 1 ng/mL). Both methods showed cross‐reactivity for α‐zearalenol and β‐zearalenol, but no cross‐reaction to other mycotoxins. The results can be completed obtained within 15 min. The cut‐off values of the simultaneous lateral flow strip for the spiked rice and corn were 500 and 10 ng/g for DON and ZEA, respectively. The results demonstrated that the developed simultaneous lateral flow strip test offers a rapid, easy‐to‐use, and portable analytical system and can be used as a convenient qualitative tool for the on‐site detection of DON and ZEA in food and agricultural commodities.     

河北省小麦、玉米及其制品中16种真菌毒素污染水平调查与分析

目的调查分析河北省小麦、玉米及其制品中16种常见真菌毒素污染状况。方法收集河北省37份鲜(冻)玉米/玉米粒、74份玉米、玉米面制品以及240份小麦样品。样品经乙腈:水:甲酸(79:20:1, V:V:V)溶液超声离心提取后,通过同位素内标稀释法处理,采用液相色谱-串联质谱法进行检测。结果伏马毒素小麦检出8份,玉米、玉米面制品检出66份,检出范围为ND~3889.9μg/kg;玉米赤霉烯酮检出小麦检出2份,玉米、玉米面制品检出69份,检出范围为ND~323.2μg/kg;脱氧雪腐镰刀菌烯醇小麦检出122份,玉米、玉米面制品检出68份,检出范围为ND~4183.4μg/kg;3-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇小麦检出5份,玉米、玉米面制品检出18份;15-乙酰基-脱氧雪腐镰刀菌烯醇小麦检出12份,玉米、玉米面制品检出38份;其他毒素均为未检出。鲜(冻)玉米/玉米粒中16种真菌毒素均未检出。结论伏马毒素、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇为小麦、玉米及其制品的主要污染物,其污染状况应引起关注。     

胶体金免疫层析法快速测定玉米和小麦中玉米赤霉烯酮

采用高效液相色谱法对玉米赤霉烯酮阳性样品进行定值,将阳性样品制备为不同毒素含量的验证样品,对胶体金免疫层析法的准确性、重复性、稳定性、最低检出限、误差范围进行了验证试验,并且完成了对实际样品的检测,同时采用酶联免疫法（ELISA）进行对比,试验结果为：最低检出限为60μg/kg,其检测结果与酶联免疫法基本一致,方法具有...     

粮食加工品中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素污染 情况调查

目的初步了解粮食加工品中玉米赤霉烯酮和呕吐毒素的污染情况。方法对北京地区和网购的200批次样品进行随机抽检,分别采用液相色谱法、免疫亲和层析净化高效液相色谱法对粮食加工品中的玉米赤霉烯酮和呕吐毒素进行了检测。结果初步调查发现玉米碾磨加工品中的玉米赤霉烯酮和小麦粉中的呕吐毒素检出率较高,分别达34%和74%;散装样品中玉米赤霉烯酮含量不合格率和检出率明显高于预包装样品。结论建议监管部门加强对散装玉米碾磨加工品和小麦粉等粮食加工品中毒素指标的监控力度和监测频次,同时针对我国特殊敏感人群加快设定合理限值。     

烟叶中多菌灵胶体金定量试纸条的研制及应用

为了建立烟叶中残留的多菌灵的快速定量检测方法,利用胶体金免疫层析技术并配套胶体金读数仪,确定更适用于现场检测的多菌灵试纸条的产品形式,明确温度对胶体金试纸条定量结果的影响,用恒温孵育器控制检测温度,基于胶体金读数仪绘制标准曲线。结果表明:①研制的定量胶体金试纸条检测限为0.017 mg/kg,检测范围为0.020~2.0 mg/kg,定量范围为0.020~0.50 mg/kg,加标回收率为95.6%~128.9%,批内变异系数为6.2%~11.2%;②与高效液相色谱-串联质谱法的检测结果相比,阴性样品检测结果准确率大于95%,阳性样品的检测结果在定量范围0.020~0.50 mg/kg内线性关系良好;③对于与多菌灵结构相似的药物,试纸条与其无交叉反应,可特异性定量检测烟叶中残留的多菌灵。本研究中研制的多菌灵定量试纸条具有操作简便、检测速度快、准确性高、稳定性好等优点,适用于基层实验室的大批量样品检测及现场快速检测。      

Fusarium mycotoxin content of UK organic and conventional wheat

Each year (2001–2005), 300 samples of wheat from fields of known agronomy were analysed for ten trichothecenes by gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) including deoxynivalenol (DON), nivalenol, 3-acetyl-DON, 15-acetyl-DON, fusarenone X, T2 toxin, HT2 toxin, diacetoxyscirpenol, neosolaniol and T-2 triol and zearalenone by high-performance liquid chromatography (HPLC). Of the eleven mycotoxins analysed from 1624 harvest samples of wheat, only eight were detected, and of these only five–deoxynivalenol, 15-acetyl-DON, nivalenol, HT-2 and zearalenone–were detected above 100 µg kg^?1. DON was the most frequently detected Fusarium mycotoxin, present above the limit of quantification (10 µg kg^?1) in 86% of samples, and was usually present at the highest concentration. The percentage of samples that would have exceeded the recently introduced legal limits varied between 0.4% and 11.3% over the five-year period. There was a good correlation between DON and zearalenone concentrations, although the relative concentration of DON and zearalenone fluctuated between years. Year and region had a significant effect on all mycotoxins analysed. There was no significant difference in the DON concentration of organic and conventional samples. There was also no significant difference in the concentration of zearalenone between organic and conventional samples, however organic samples did have a significantly lower concentration of HT2 and T2. Overall, the risk of UK wheat exceeding the newly introduced legal limits for Fusarium mycotoxins in cereals intended for human consumption is low, but the percentage of samples above these limits will fluctuate between years.     

单测试片法定性快速检测乳中金黄色葡萄球菌的研究

目的 建立单测试片定性快速检测乳中金黄色葡萄球菌的方法。方法 选择7.5%氯化钠肉汤增菌液, 使用拍打式均质器, 匀浆时间1~1.5 min进行样品处置。采集不同基质样品, 设计多种方案对研究单测试片方法、国标方法与测试片方法同时进行验证。结果 该方法检测金黄色葡萄球菌特异性高, 特异性达到96.7%。最小检出量0.5 CFU/mL。阳性检出率高。结论 该方法准确性可靠, 特异性、灵敏度都高, 检出限低, 适用于乳中的金黄色葡萄球菌快速定性检测。