基于高压结合酶法制备的低敏虾制品体内体外致敏性检测的差异性分析

采用高压结合酶法处理凡纳滨对虾的虾蛋白、虾仁泥（虾肉）和虾仁,获得3 种低敏虾制品;采用酶联免疫吸附法检测3 种虾制品的过敏原性,采用全身性过敏反应（过敏性休克模型）及致敏离体回肠平滑肌收缩实验（Schultz-Dale反应）检测3 种低敏虾制品的致敏性,以分析体内与体外方法检测虾制品致敏性的差异性。结果显示：处理前的3 种原料过敏原性极高。经高压结合酶法处理的虾蛋白、虾肉和虾仁的过敏原性分别消减97.0%、94.1%和94.5%。而在动物实验中（以磷酸缓冲盐溶液为阴性对照,未处理虾蛋白为阳性对照,以豚鼠为受试对象）,未处理虾蛋白组的过敏反应发生率与死亡率均为100%,3 种低敏虾制品的过敏反应发生率也为100%,死亡率分别为16.7%（虾蛋白产物）、50%（虾肉产物）和83.3%（虾仁产物）。致敏的离体回肠受到3 种低敏虾制品攻击后,收缩力也明显增强,分别达到376.9%、766.2%和1 004.4%。上述结果表明,对高压结合酶法制备的低敏虾制品过敏原性的检测,体外检测与体内检测存在一定的差异性。     

南美虾蛋白酶解产物过敏原消减效果研究

采用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶分解南美白对虾的蛋白质,以消减其中的蛋白质过敏原;应用全身过敏反应和离体回肠平滑肌过敏性收缩实验模型,对该工艺蛋白酶酶解产物的致敏性进行评价。结果显示,3种蛋白酶的虾蛋白酶解产物所致的全身过敏反应均明显减轻(与虾蛋白组比较,0.01 ＜ P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01);同时,3种酶解产物致敏的离体回肠平滑肌对虾蛋白和酶解产物过敏原攻击的反应也明显减弱(与虾蛋白致敏组比较,0.01＜P ＜ 0.05 或P ＜ 0.01)。综合评价3 种酶解产物的致敏性,认为木瓜蛋白酶的酶解工艺较好,过敏原消减比较理想,食用更安全。     

高压结合酶法消减南美白对虾虾仁致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究高压结合酶法对虾仁过敏原致敏性的消减作用。将南美白对虾去头去尾去壳去肠线后,采用超高压法和高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理,在压力100 MPa、温度25 ℃、保压时间15 min的条件下,虾仁过敏原的致敏性降低了67.09%,且与处理过程中蛋白溶出量有关;采用高压结合酶法处理,在盐水质量浓度1 g/100 mL、酶与虾仁质量比1∶130、压力450 MPa、温度40 ℃、保压时间55 min的条件下,虾仁过敏原的致敏性降低了86.58%。由此可见,高压处理对虾仁过敏原的致敏性有消减作用,高压结合酶法的消减效果更好。     

凡纳滨对虾酶解产物过敏原消减效果的评价

采用木瓜蛋白酶分解凡纳滨对虾的蛋白质,以消减其中的蛋白质过敏原;应用豚鼠全身过敏反应和离体回肠平滑肌过敏性收缩实验模型,对该蛋白酶酶解产物的致敏性进行评价。结果显示,虾蛋白和虾肉经木瓜蛋白酶水解后,其酶解产物所致的全身过敏反应明显减轻(与虾蛋白组和虾肉组比较,0.01相似文献   

酶法消减花生浆中两种主要过敏蛋白的研究

花生是一种重要的食物过敏原来源,含有很多种致敏蛋白质,其中Ara h1和Ara h2是过敏原性最强的。这极大地影响花生过敏者的生活质量甚至威胁生命安全,因此研究如何消减花生过敏原性至关重要。通过单因素以及正交试验的方法,并以双抗夹心酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,得到复合蛋白酶制剂消减花生过敏原性的最优条件为,碱性蛋白酶∶中性蛋白酶∶木瓜蛋白酶∶风味酶为的体积比为2∶2∶1∶1、酶用量4%、酶解温度60℃、pH值7.0、酶解时间4 h,在此条件下花生浆中Ara h1和Ara h2的平均消减率为92.91%。     

不同来源牛乳酪蛋白过敏原性评价及酶解消减作用研究

牛乳酪蛋白是引起婴幼儿过敏的重要来源。为分析不同来源的牛乳酪蛋白过敏原性差异,并通过蛋白酶水解实现低水解度下高效消减牛乳酪蛋白过敏的作用,研究了不同来源的酸法酪蛋白、酶法酪蛋白和胶束酪蛋白原料差异以及制备方法对牛乳酪蛋白过敏原性的影响,并分析了蛋白酶水解消减酪蛋白过敏的作用效果。结果表明,不同制备方法获取的酪蛋白过敏原性差异明显,酶法酪蛋白和胶束酪蛋白具有更高的过敏原性。对具有高过敏原性的酶法酪蛋白采用4种单酶水解时,均获得了较低的残留过敏原性,其中菠萝蛋白酶具有最优效果,残留抗原性降低至9%,对应水解度仅为8%。菠萝蛋白酶水解牛乳酪蛋白时更有利于获得低水解度下具有低致敏性的水解产品。     

响应面法优化酶法降低小麦粉致敏性的研究

采用酶联免疫技术分析6种酶制剂处理对小麦粉致敏性的影响,以过敏原含量为指标,筛选出能够降低小麦粉致敏性的酶制剂为菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶,确定了同步酶解路线,通过单因素试验和响应面法优化了酶解工艺参数。结果表明:菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶按酶活比为2:5复配,料液比6.64%,酶解pH 6.53,酶解温度47.7℃,酶解时间2.47 h,加酶量0.395 g/100 g蛋白质,过敏原含量为0.593μg/g蛋白质,与理论值相差7.8%,致敏性降低了36.1%。因此,中心组合设计响应面法建立酶法降低小麦粉致敏性的模型设计合理,能够预测制备低致敏性小麦粉的过敏原含量。     

响应面法优化酶法降低小麦面粉致敏性的研究

采用酶联免疫技术分析六种酶制剂处理对小麦粉致敏性的影响,以过敏原含量为指标,筛选出能够降低小麦粉致敏性的酶制剂为菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶,确定了同步酶解路线,通过单因素实验和响应面法优化了酶解工艺参数。结果表明：菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶按酶活比为2:5复配,料液比6.64%,酶解pH6.53,酶解温度47.7℃,酶解时间2.47h,加酶量0.395（g /100g蛋白质）,过敏原含量为0.593（μg/g蛋白质）,与理论值相差7.8%;在上述参数下,致敏性降低了36.1%。因此,中心组合设计响应面法建立酶法降低小麦粉致敏性的模型设计合理,能够预测制备低致敏性小麦粉的过敏原含量。     

超高压结合酶法消减南美白对虾蛋白过敏原研究

以南美白对虾为研究对象,提取水溶性虾蛋白,采用超高压法、超高压处理后再用木瓜蛋白酶水解、超高压下直接酶解等方法消减其过敏原蛋白,用间接酶联免疫吸附法检测过敏原消减效果,确定消减过敏原的条件。结果表明：采用超高压法处理,其最佳条件为压力150MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.1997;高压结合木瓜蛋白酶水解法最佳条件为：350MPa、温度45℃、保压时间20min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.0492;超高压下直接用木瓜蛋白酶处理,其最佳条件为：压力300MPa、温度45℃、保压时间35min,产物抗原抗体反应的OD492nm值为0.05。由此可见,高压对过敏原蛋白有消减作用,先高压再水解和超高压下直接酶处理对过敏原的消减效果更好。     

南美白对虾虾头制备鲜味水解物的研究

本文以25 ℃下自溶6 h后的南美白对虾虾头为原料,采用酶水解法进行鲜味水解物的制备。以鲜味滋味、蛋白质回收率、肽得率和水解度为评价指标,进行外源酶的选择和酶解工艺条件的逐步优化研究。研究表明,经四种单酶酶解,均明显提升酶解效率,其中菠萝蛋白酶(Bromelain)和风味蛋白酶(Flavorzyme)能有效提升酶解液的鲜味、降低苦涩味。制备具有良好鲜味特征水解物的条件为:自溶后的虾头,加入菠萝蛋白酶(420 U/g样品)和风味蛋白酶(12 U/g样品)两种酶(料液比1:1.5 (g/mL)),在pH7.5、50 ℃下酶解3 h,该工艺下蛋白质回收率、肽得率和水解度分别可达79.75%、71.71%和18.28%。获得水解物氨基酸组成中ΣEAA/ΣAA与ΣEAA:ΣNEAA分别为37%和1:1.7。65%的总蛋白氨基酸释放为游离氨基酸,其中,59%的总蛋白鲜甜味氨基酸释放为游离氨基酸,水解物营养价值高且具有良好鲜味。     

超高压结合酶法消减南美白对虾虾仁的致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,研究超高压结合酶法对虾仁致敏性的消减效果。将南美白对虾去头、尾、壳、肠线后,采用超高压法和超高压结合酶法消减其致敏性,用间接酶联免疫吸附法检测致敏性消减效果,确定消减条件。结果表明：采用超高压法处理最佳条件为压力600 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min,此条件下消减率为45.66%;超高压结合胰蛋白酶法最佳条件为压力200 MPa、温度40 ℃、保压时间30 min、胰蛋白酶加酶量3 000 U/mg,此条件下消减率为95.27%。由此可见,超高压法对虾仁致敏性有消减作用,超高压结合酶法对虾仁致敏性消减的效果更好。     

Reduction of allergenic properties of shrimp (Penaeus Vannamei) allergens by high intensity ultrasound

The tropomyosin fraction of shrimp proteins is potentially responsible for an allergic reaction in individuals with a genetic predisposition to allergy. However, there are no efficient and safe methods to reduce its allergenicity. High-intensity ultrasound is known to change the structure of proteins. The aim of this study was to assess the effect of high-intensity ultrasound on the IgE-binding capacity of shrimp protein extracts (PE) and of major shrimp allergen Pen a 1(tropomyosin). Peeled shrimp (Penaeus vannamei) muscle was sealed in a plastic bag and treated with high-intensity ultrasound (30 Hz, 800 W) for 1.5 h at 0 and 50 °C, respectively; others were treated with boiling water for 15 min. Then PE and Pen a 1 were made with treated shrimp muscle. The allergenicity of PE and purified allergen from different-treated shrimp were analyzed by the enzyme allergosorbent test (EAST) and competitive inhibition ELISA (Ci-ELISA) using sera of 15 shrimp-allergic patients. PE from high-intensity ultrasonic treatment at 50 °C (treated 2) shrimp was 2.2-fold, 2.5-fold lower respectively than that of untreated shrimp and high-intensity ultrasonic treatment at 0 °C (treated 1) shrimp. While PE from heated (treated 3) shrimp was 1.2-fold lower than that of untreated shrimp. The (Concentration of the different-treated sample that inhibit 50% of the IgE binding to coated untreated sample) IC₅₀ ratios of Pen a 1 prepared from treated 2 shrimp, treated 1 shrimp and treated 3 shrimp to untreated shrimp were 1/15, 1/1.1 and 1/1, respectively. The results suggest that high-intensity ultrasound at 50 °C may reduce the allergenicity of shrimp.     

辐照对虾过敏原抗原性的影响

目的探索辐照对海产品脱敏的效果,研究辐照对虾过敏原抗原性的影响。方法利用SDS-PAGE纯化的虾过敏原(原肌球蛋白)制备高效价、高特异性多克隆抗体,通过酶联免疫实验研究以3、5、7、10 kGy的辐照剂量处理对虾过敏原与患者特异性血清抗体IgE及多抗的免疫亲和力的影响。结果原肌球蛋白经辐照处理后,与患者特异性血清抗体IgE及鼠源多抗IgG的免疫亲和力下降。结论辐照可降低原肌球蛋白的致敏性。     

两步酶解法制备低致敏性乳清蛋白及其致敏性评价

目的 探究两步复合酶解工艺处理对牛乳清蛋白(whey protein isolate, WPI)结构和致敏性的影响。方法 实验采用邻苯二甲醛法、体积排阻色谱法分析WPI水解物在不同酶解时间下的水解程度,同时采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoassay, ELISA)、细胞模型和小鼠模型对水解物进行体外和体内的致敏性评估,并利用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)分析水解物中的残留过敏原表位。结果 WPI经碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶顺序酶解3.0 h后水解度达到14.19%,在水解2.0~3.0 h期间,WPI水解物主要由小肽(<5 kDa)组成。水解3.0 h后,水解产物与特异性抗体的结合能力降低了97.83%,细胞模型和小鼠模型结果证实,酶解产物的体外、体内致敏性显著降低,与空白对照组无显著性差异。UPLC-MS/MS结果表明WPI水解3.0 h产物中70.59%的肽段不含过敏原表位。结论 复合酶解工艺有效降低了WPI致敏性,本研究构建的致敏性综合评价体系可为低敏乳制品水解工艺的开发提供指导。     

Effects of high-intensity ultrasound processing on the physiochemical and allergenic properties of shrimp

Shrimp is a common seafood with high nutritional value and delicious flavor. However, many individuals are allergic to shrimp, but no therapies have been provided until now. The aim of this study was to evaluate the impacts of the high-intensity ultrasound processing (0, 5, 10, 15, 20 min, at room temperature) on the physiochemical and allergenic properties of shrimp samples. The results indicated allergenicity decreased with increasing treatment time, and the best hypoallergenic effect showed at 20 min with a 76% reduction of tropomyosin. At 20 min, the total soluble protein content decreased by 28.26%, while the in vitro digestibility, peptide content, total antioxidant capacity strengthened by 7.53%, 0.81%, and 71.29%, respectively. β-Sheets and α-helices increased with processing time, accompanied by the reduction of turns and unordered conformations determining by Fourier-transform infrared spectroscopy. More fragments, strips, and holes were observed after 20 min, which indicated the physical essence of ultrasound treatment in improving the extraction of bioactive molecules.Industrial relevanceThe high-intensity ultrasound as a novel non-thermal processing technique exhibits great potential in reducing the allergenicity of food products. In comparison to thermal processing techniques, it consumes less energy and has a higher mass transfer rate without altering the fundamental properties of foods. Shrimp allergens can be efficiently modified or even eliminated after the optimal condition of ultrasound treatment. The sensory and nutritional properties of shrimp can be retained to meet the marketing requirements for consumers. Therefore, the manufacture of hypoallergenic shrimps with high quality will be one of the most popular products in the future. The findings in this study provide a better understanding of ultrasound application in both lowering allergenicity and retaining the nutritional characteristics of shrimp.     

蛋白溶出与变性结合消减虾仁致敏性

以南美白对虾虾仁为原料,采用高压下蛋白溶出与变性相结合的方法消减虾仁致敏性。在室温下采用不 同压力（0.1～900.0 MPa）处理虾仁,确定适合虾仁蛋白溶出和变性的压力条件,并以虾仁蛋白致敏性的消减效果 为指标确定虾仁的处理条件。结果显示,在200.0 MPa下保压处理30 min,有利于虾仁蛋白的溶出;当压力大于等 于500.0 MPa时,可引起虾仁蛋白的变性;当压力在600.0 MPa时,虾仁蛋白的致敏性最小。将虾仁在200.0 MPa下 处理30 min后,再用600.0 MPa处理30 min,虾仁的致敏性消减率大于80%。因此,高压处理可消减虾仁的致敏性, 采用适合蛋白溶出与变性相结合的压力处理,能够提高虾仁致敏性消减效果。     

超高压-限制性酶解法降低豆乳粉致敏性工艺优化

以传统湿法工艺技术制备豆乳粉为基础,对浆渣分离后的豆乳进行超高压-限制性酶解处理,降低豆乳粉致敏性。在单因素试验基础上,采用响应面分析法对超高压-限制性酶解制备低致敏性豆乳粉工艺进行优化,确定最优超高压-限制性酶解的工艺参数为超高压处理压强320.00?MPa、超高压处理时间15?min、酶解时间60?min、酶添加量0.3?U/g,此条件下致敏性降低率为88.09%,但制备的豆乳粉具有微苦味,需要进一步调配以改善口感。超高压处理与酶解具有协同效应,可显著提高豆乳粉蛋白质体外消化率、显著降低豆乳粉致敏性,对不同加工工艺豆乳粉进行蛋白质体外消化率、蛋白质分散指数、过敏原含量及蛋白电泳分析,进一步证明超高压与酶解的协同效应。     

限制性酶解对豆粉相关性质的影响

为降低豆粉的致敏性,扩大其应用,采用限制性酶解制备豆粉。以木瓜蛋白酶、风味蛋白酶和碱性蛋白酶为限制性酶解用酶,研究不同的酶制剂及酶解时间对豆粉的致敏性、溶解性、表面疏水性及乳化性的影响,并对豆粉进行感官评价。结果表明:随着酶解时间的延长,豆粉的致敏性降低,溶解性、表面疏水性、乳化活性和乳化稳定性增加;其中利用木瓜蛋白酶酶解30 min制备的豆粉致敏原含量最低,为1. 95%,溶解性最高,为88. 55%,乳化活性及乳化稳定性最大,分别为182. 4 m2/g和120. 8 min;利用SDS-PAGE电泳发现,酶解作用使豆粉蛋白质中的7S和11S降解,生成小分子的肽类,从而降低豆粉的致敏性;利用木瓜蛋白酶酶解20 min制备的豆粉口感与传统市售豆粉相似。     

低致敏食品制备技术及其工业化应用研究进展

食物过敏是联合国粮农组织和世界卫生组织认定的全球性食品安全问题之一。在食品加工多元化的背景下,食物过敏患者要完全避免过敏原十分困难,研发低致敏食品对食物过敏患者的安全膳食至关重要。总结了低致敏食品制备技术的加工技术原理;以蒸煮、微波和烘烤为主的热加工技术通过加热诱导蛋白质变性的方式破坏致敏性构象性表位;高压、脉冲电场、脉冲光、低温等离子体、辐照和超声等非热加工技术可以通过过敏原蛋白结构修饰、多肽链断裂、新化学键的产生等方式直接破坏致敏性表位;酶水解、酶交联、糖基化、微生物发酵等其他加工方法则通过改变蛋白质构象或将蛋白质与糖类物质结合,破坏或隐藏过敏原致敏性表位。另外,对工业化低致敏蛋白配料的加工方法和生产现状进行了阐述分析。基于酶法水解的部分水解乳蛋白和深度水解乳蛋白已经可以工业化生产,其他消减食物致敏性的方法以及其他低致敏蛋白配料值得进一步研究。希望可以为工业化生产低致敏食品提供参考。