烟草野火病拮抗生防菌的筛选、鉴定与应用

为筛选出烟草野火病拮抗生防菌,开发防治烟草野火病的新型生物农药,降低烟叶农药残留,提高烟叶的安全性,从烟田采集的健康烟草叶片经平板划线法分离和纯化后得到287个细菌分离物,从中筛选到14个对烟草细菌性野火病有抑制作用的拮抗生防菌,测得其中具有较强抑制作用的菌株抑菌带宽度为9.3 mm,经16S rDNA序列鉴定,该菌属于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。烟草叶片经该拮抗菌液诱导后接种,叶片内主要防御酶苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)活性均显著增强。防效测定表明:施用生防剂后接种野火病菌的处理,拮抗菌株防治效果达97.54%,对照农用链霉素防治效果为41.44%。先接种野火病菌后施生防剂的处理,拮抗菌株防治效果达51.40%,对照农用链霉素防治效果为50.69%。说明该拮抗菌株的预防效果高于当前生产上使用的农用链霉素,且其预防效果优于治疗效果。     

植物源抗病毒剂VFB-1防治烟草花叶病毒病研究

以植物源抗病毒剂VFB为基础,经配方改造和工艺改进,优化出了植物源抗病毒剂VFB-1。为探究VFB-1对烟草花叶病的防治作用,本研究采用半叶枯斑法测定了VFB-1对TMV的体外钝化、初侵染和复制增殖抑制活性;采用盆栽法和田间小区试验评价了VFB-1对烟草花叶病毒病的预防及治疗效果。结果表明,VFB-1对烟草花叶病毒(TMV)具有明显的体外钝化作用,钝化30min后,抑制率达82.77%;对TMV的初侵染和复制增殖具有较好的抑制作用,24 h的抑制率分别达到69.80%和54.07%?盆栽药效试验中,VFB-1100倍稀释液的预防效果为70.23%,治疗效果为35.70%;田间药效试验表明,VFB-1对烟草花叶病毒病有较好的预防和治疗作用,其200倍稀释液药后21d的预防效果仍为40%以上,400倍液的预防效果明显高于VFB,且与病毒A(20%吗啉胍·乙铜WP)相当;其200倍液14d的治疗效果显著高于VFB(200倍稀释液)和病毒A(400倍稀释液)处理。可见,植物源抗病毒剂VFB-1对TMV具有良好的预防和治疗效果,开发前景良好?     

树舌MP-01菌株提取液抑制TMV生物活性研究

本实验从病毒体外钝化、抑制病毒初侵染、抑制病毒增殖和诱导抗性4个方面测定了树舌MP-01菌株提取液对烟草花叶病毒(TMV)生物活性的影响。结果表明,MP-01菌株提取液对TMV体外钝化效果显著;对TMV初侵染、增殖有一定的抑制作用,且能诱导烟草产生一定的抗病性。     

抑制烟草花叶病毒活性植物的筛选

本研究采用半叶枯斑法和烟草病害分级标准,对抗TMV的活性植物进行筛选,系统测定了艾蒿、板蓝根、柴胡等24种植物的粗提取物对烟草花叶病毒（TMV）的抑制效果,包括体外钝化TMV作用、抑制TMV初侵染;并采用盆栽法,研究植物粗提取物对烟草花叶病的保护和治疗作用等。试验表明,银杏、栀子、商陆、赤芍等植物粗提取物的综合防治效果较好,有进一步开发和利用的前景。     

贝莱斯芽胞杆菌F10促生作用及对烟草青枯病的防治效果

为明确植物根际促生细菌（Plant growth-promoting rhizobacteria,PGPR）对烤烟促生和抗病作用,以前期试验分离获得的贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）F10为材料,通过盆栽和田间小区试验考察其对烟草的促生作用和对烟草青枯病的防治效果。结果表明,生防菌F10处理后,烟草根系和地上部生长显著优于对照,烟草叶片过氧化物酶（POD）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性提高。盆栽和田间小区试验中生防菌F10对烟草青枯病的防治效果分别为60.49%和54.91%,大田烟叶产量、上等烟比例和上中等烟比例比对照分别提高11.82%、31.46%和13.17%。生防菌F10对烟草生长具有促进作用,对烟草青枯病具有较好的防治效果,烤烟经济效益显著提高。      

短小芽孢杆菌AR03对烟草黑胫病菌的拮抗活性及其田间防效

为测定短小芽孢杆菌AR03对烟草黑胫病菌的拮抗作用及其发酵菌剂的田间防效,通过对峙培养法、固态发酵及田间小区试验的方法发现,AR03菌体和发酵液对烟草黑胫病菌具有很强的拮抗活性,而其除菌上清无拮抗活性,初步说明AR03分泌的抗菌物为胞内物质。AR03经固态发酵后的活菌数为3.82×1011cfu/g。该菌剂的田间小区试验结果显示,对混合有青枯病发生的烟草黑胫病的防治效果明显好于对照药剂,且与72%甲霜灵•锰锌可湿性粉剂协同防治效果最好。因此,AR03对烟草黑胫病和青枯病具有可持续控病作用,是一株极具开发潜力的生防菌株。      

烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响

为了探讨烟草品种对黑胫病的抗性机制,以抗黑胫病品种Florida 301、L8、Beinhart1000-1和革新3号,以及感黑胫病品种中烟100、贵烟13、红花大金元和小黄金1025的盆栽烟苗为试验材料,采用生长速率法测定了抗感黑胫病烟草品种根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的影响。结果表明,抗病品种Florida301、L8、Beinhart1000-1和革新3号的根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长具有较明显抑制作用,抑制率为5.93%～20.78%;4个抗病品种根系分泌物处理的菌落直径明显小于对照,且差异达到显著水平(P0.05)。感病品种贵烟13、红花大金元和小黄金1025根系分泌物处理与对照相比对黑胫病菌菌丝生长具有一定的促进作用,菌落直径大于对照,差异达到极显著水平(P0.01),菌丝生长抑制率为-16.47%～-2.15%,但感病品种中烟100没有表现出对黑胫病菌菌丝生长的促进作用。因此,烟草根系分泌物对黑胫病菌菌丝生长的作用与烟草品种的抗性有关。     

利用无毒产细菌素菌株防治烟草细菌性青枯病

本文研究了烟草细菌性青枯病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ ｓｍｉｔｈ）的无毒产细菌素菌株对烟草青枯病菌４－１１的防治作用。结果指出：用浸根法处理Ａ３－５，Ａ４－３，Ａ１－４三个无毒菌株对致病菌４－１１均有防治效果。其中Ａ３－５防效最好，病毒情指数比治作用，病情指数比对照降低达８０％，推迟发病２５天，说明在烟草根际保持较高数量的Ａ３－５，是提高其防治效果的必要条件。对发病动态学     

2003年度国家烟草专卖局科学技术进步奖获奖项目简介(II)

1　东北地区烟草马铃薯Y病毒病发生规律及防治技术研究该项目鉴定了我国烟草上的PVY共有 4个株系 :PVYO(普通株系 )、PVYN(脉坏死株系 )、PVYNS(茎坏死株系 )和PVYC(点刻条斑株系 ) ,以PVYN 为优势株系。利用CORESTA PVY合作小组提供的国际鉴别寄主 ,室内外测定比较了我国的PVYN 与国际上已报道的PVY各株系的差异 ,认为我国PVYN 与欧洲 3号株系极相似 ,而与美国的两个株系MsNr和VAM B及欧洲的其它株系差异较大 ;开展了PVYN 分子生物学研究 ,克隆获得了PVYN 的复制酶基因 (PVYN NIb)和PVYN 的外壳蛋白基因 (PV…     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

过氧化物酶活性与烟草对马铃薯Y病毒抗性关系的研究

本文测定了接种马铃薯Y病毒脉坏死株系后烟草抗病转基因品系9608(转PVY-NIb的NC89)和非转基因NC89叶片组织透性和过氧化物酶活性,并对过氧化物酶同工酶带谱进行了分析。结果表明,抗病转基因9608和感病NC89叶片的组织透性与叶片内过氧化物酶活性的变化趋势一致,两者在接种后均呈增高趋势,但感病NC89的增高幅度明显高于抗病转基因9608;接种后,转基因9608和非转基因NC89的过氧化物同工酶均出现了一条新酶带,9608的新酶带在接种后第2d开始出现,而NC89的新酶带则在接种后第6d开始出现,且明显强于9608。      

接种PVY^N后烟草叶片SOD活性和MDA含量变化研究

对接种马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性及其同工酶谱带和丙二醛含量进行了分析。结果表明,接种ＰＶＹＮ后烟草叶片内超氧化物岐化酶活性发生明显变化,接种后１４ｄ内其活性值均较对照增高,其中接种后第８ｄ达高峰值,约比对照增加７２．３％,１４ｄ后超氧化物岐化酶活性开始下降,至接种后１６ｄ约低于对照２８．０％。接种后ＳＯＤ同工酶谱带与对照相比差别不大,仅在接种后第８ｄ出现了一条新带。接种后烟草叶片内丙二醛含量逐渐增加。     

病毒诱导的基因沉默防控烟草马铃薯Y病毒病研究

  背景  病毒诱导的基因沉默（virus-induced gene silencing,VIGS）是植物抗病毒侵染的一种自然机制。  方法  以马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）脉坏死株系（PVYN）的外壳蛋白（coat protein, CP）基因为靶向序列,构建烟草脆裂病毒（Tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默表达载体pTRV2-CP,转化农杆菌GV3101后,与pTRV1-GV3101混合成TRV: : CP（OD₆₀₀ 0.4~0.6）喷施处理剪叶后的烟苗,测定其侵染效率。人工接种PVY于对照及TRV: : CP处理的烟苗,RT-qPCR检测、表型观察和小区试验评价TRV介导的VIGS体系对PVY侵染的沉默效果。  结果  ① 与TRV: : 00相比,接种PVY 35 d时,TRV: : CP处理的烟株中PVY累积量减少了72.8%;②VIGS表达载体45 d内能有效表达;③温室盆栽和田间小区试验TRV: : CP处理对PVY防治效果分别达到85.12%和73.08%。  结论  研究建立的VIGS体系能够沉默PVY CP基因的表达,有效防治烟草马铃薯Y病毒病,为PVY的防治提供了新的方法。      

烟草木霉菌剂的肥效测定及叶面、根部定殖研究

烤烟施用木霉菌剂(Tv-1),不但可提高烟苗素质和抗病性,而且,可提高烟叶产量与产值10%左右,提高土壤速效养分利用率20%~40%,N、P、K肥利用率分别提高了7.7%、1.13%和11.8%。施用木霉菌剂的烟株生理代谢较为协调,游离脯氨酸的含量降低,丙二醛(MDA)的含量增加,有利于烟叶品质形成。研究了绿色木霉菌Tv-1菌株在烟草叶面的定殖情况。结果表明:Tv-1可以在烟草叶面定殖。喷雾后24h可以观察到Tv-1分生孢子吸附于烟草叶面,随后生长繁殖。Tv-1主要定殖于叶面腺毛基部及气孔周围,并且表现出强烈的侵入叶片的生长趋势。叶面喷雾后4周内均可以从处理的叶片中回收到Tv-1,但在检测时间内Tv-1的定殖数量均低于原始施入量,除第2周内数量略有回升外,其余时间均呈下降趋势。在限菌条件下通过琼脂平板培养试验,用木霉半选择性培养基分离计数,研究了影响绿色木霉菌Tv-1菌株在烟草根部定殖的因素。水分含量、pH值、营养成分和烟草品种对Tv-1菌株定殖烟草根部均有不同程度的影响。Tv-1在3%含水量、偏酸性(pH 4,5,6)、葡萄糖琼脂平板上定殖于烟草的数量高于其它条件下Tv-1的定殖数量;云烟85、G28,NC89在供试的6个烟草品种中较其它品种利于Tv-1的定殖。      

施用钾肥对烤烟叶片中钾素和氮素含量的影响

本文研究了一定氮、磷水平下钾肥的施用量和施用方法对烤烟生长中后期烟叶中钾素和氮素含量影响的变化规律。结果表明:烤烟生长中后期氮、钾的含量均呈显著的下降趋势,其下降幅度随叶位和基施钾肥量而发生变化;充足的钾肥作为基肥不仅能显著提高烤烟叶片中钾和氮的含量,并且有利于钾素在各部位叶片的均匀分布和K₂O/N比值的提高,这有助于烤烟的正常落黄和烟叶品质的提高。烤烟生长中期追施钾肥虽然可以在短时间内大幅度提高烤烟叶片的钾素含量,但无法维持;收获期叶片的钾素含量提高幅度很小;只有基施钾肥使土壤供钾水平较高时,才能提高叶片中的含钾量。烤烟生长中期追施钾肥可提高烤烟叶片的含氮量;提高的幅度与钾肥的追施用量有关;但随生育期的延长,只有大量的追施钾肥才能提高烤烟叶片含氮量。烤烟生长中期喷施钾肥,叶片中钾素含量提高受叶片中原含钾水平的影响,叶片原含钾水平较低时,喷施钾肥主要提高底叶的含钾量;而叶片原含钾水平较高时,喷施钾肥才能提高各部位叶片的钾素含量。      

烟草对赤星病菌的抗性与其防御酶系活性的关系

室内对抗病性不同的烟草品种CV 87和NC 89接种赤星病菌 ,分析测定接种后不同时间、不同叶位过氧化物酶 (POD)、过氧化氢酶 (CAT)以及苯丙氨酸解氨酶 (PAL)等同工酶酶活性变化情况。结果表明 ,抗病品种CV 87随接种叶位升高POD与CAT活性增加 ,感病品种NC 89表现先升高后降低的趋势。无论接种与否NC 89的POD活性都高于CV 87;抗病品种CV 87的CAT活性高于感病品种 ;接种赤星病菌后,抗病品种CV 87的PAL活性升高 ,感病品种NC 89的PAL活性降低 ,PAL活性与品种抗病性呈正相关     

不同类型烟草上节肢动物群落的季节特征

洛阳山区烟田的调查发现,黄花烟草单作田,黄花烟与RG17混栽烟田和RG17单作田的节肢动物群落分别由24种、68种、59种组成,其季节变化随烟草生育期不同可以分成3个阶段。烟田的捕食性天敌是控制害虫的优势种群,对害虫具有一定的抑制作用。黄花烟草对烟青虫、棉铃虫产卵具有较强的诱集作用,种植黄花烟草可作为防治烟草害虫的措施之一。      

大理州植烟土壤肥力质量现状与演变趋势

在大理州乡镇、村、户典型的连片烟田作了调查访问,并采集了506个耕层土样进行系统的化验。结果发现,本州植烟土壤肥力质量的主要指标有蜕化的趋势,土壤有机质平均27.7 g/kg,有下降趋势;pH平均值6.47,呈酸化趋势;有效磷P₂O₅平均27.23 mg/kg,老烟区已累积偏高,且有继续上升趋势,对烟叶生产不利;速效钾K₂O平均189.15 mg/kg,总体水平较高,有上升趋势,但也有水平偏低的;交换性镁Mg平均139.5 mg/kg,约一半土壤偏低;速效硼B0.31 mg/kg,普遍缺乏或偏低;有效钼Mo平均0.24 mg/kg,约1/3缺乏;速效硫、钙、锰、铁、铜含量偏高,而含氯量偏低。烤烟施肥应减氮减磷稳钾,普遍施硼,因土施镁。在土壤pH<5.5时,应适施石灰,调节酸度。有机无机相结合,适当改变氮肥形态防治土壤进一步酸化。实施科学施肥确保植烟土壤可持续利用。      

m型硫氧还蛋白对马铃薯Y病毒侵染烟草的影响

为进一步明确病毒与寄主间的相互作用关系,通过同源比对在烟草细胞中克隆到具有m型硫氧还蛋白(m-type thioredoxin)特征的基因,暂命名为Nt Trm。利用原生质体瞬时转化技术、病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)、半定量-PCR以及Northern blot检测技术研究Nt Trm的表达以及Nt Trm表达与PVY积累的关系。结果表明,在PVY接种10 d后红花大金元叶片中Nt Trm表达明显上调;在本氏烟草叶片中Nt Trm下调显著促进了PVY在烟草叶片中的积累;而在烟草原生质体中Nt Trm过量表达则会明显抑制病毒RNA的积累。初步说明烟草细胞内编码m型硫氧还蛋白的基因受PVY侵染而被诱导表达,这类基因的上调表达可能影响PVY在烟草细胞中的侵染。      

二氯喹啉酸诱导烟草保护酶活性的动态变化

为了阐明大田土壤残留二氯喹啉酸致烟草畸形并未出现烟草病害发生的原因,采用盆栽法,在土中分别混入1.04×10^-3、2.08×10^-3、4.17×10^-3、8.33×10^-3 和1.67×10^-2 mg/kg 的二氯喹啉酸,检测诱导烟草保护酶活性的变化并分析酶活性与抗病关系。结果表明,当土壤中加入二氯喹啉酸时,能诱导激活超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性, 移栽14 d 后,各处理烟草叶片中SOD 活力均高于未用药的对照,分别提高9.21%、32.60%、109.36%、136.16%、151.94%。 移栽21 d 后,发现各处理此酶活性与对照差异不明显。各处理的烟草POD 活性明显高于对照,随着处理浓度的升高和时间的延长,POD 活性有上升趋势,移栽28 d 后,烟草中过氧化物酶活性较对照分别提高69.47%、35.80%、73.61%、134.69% 和230.45%。POD 同工酶的检测表明,处理过的烟根酶带增多、颜色加重、酶活性增强。