高效液相色谱法与酶联免疫法检测小麦中呕吐毒素的比较研究

以小麦为样品,通过高效液相色谱法和酶联免疫法检测结果对比分析,改进高效液相色谱法中的洗脱方法,稀释酶联免疫法中的样品量.结果显示:高效液相色谱法与酶联免疫法检测小麦中呕吐毒素在200～1 500 μg/kg存在相关性,即呕吐毒素含量CHPLC＜CELISA,两者相差平均为149.2 μg/kg,RSD为12.6％.酶联免疫法操作简便快速,适用于大量样品的快速初筛,而高效液相色谱法检测时间较长,成本较高,更适合经ELISA法初筛后呈阳性样品的确证以及呕吐毒素含量的准确定量.     

酶联免疫法测定苦荞制品中的黄曲霉毒素B1

用酶联免疫法（ELISA）测定不同苦荞制品中的黄曲霉毒素B1,对如何防控苦荞制品中的黄曲霉毒素B1进行探讨。在分析的4类产品中,苦荞营养粉的黄曲霉毒素B1含量最低,其次是苦荞速溶片和苦荞醋,苦荞米茶中最高。方法的检测灵敏度为0.1 μg/kg,平均回收率在84.70~84.95%,相对标准偏差小于5%。结果表明,酶联免疫法测定准确,稳定性和重现性好,可广泛应用于苦荞及其制品中黄曲霉毒素B1的检测。     

大曲中呕吐毒素提取方法的研究

主要探讨了酶联免疫法检测大曲中呕吐毒素的提取条件;分别考察了超声波提取时间、超声波提取功率、甲醇浓度对呕吐毒素提取效果的影响;用正交设计找出了最佳工艺参数:甲醇浓度为50%(v/v),提取时间为20min,提取功率为200W。采用本提取工艺所得呕吐毒素提取率明显高于国标。本研究可为大曲中呕吐毒素的检测提供简便、准确、可靠的分析方法。     

粮食中真菌毒素快速定量检测方法应用比较研究

采用便携式真菌毒素快速定量检测仪对玉米中黄曲霉毒素B1和呕吐毒素进行定量检测,同时与酶联免疫法对比检测结果。结果显示黄曲霉毒素B1快速定量检测卡检出限为1.75μg/kg;准确性与所采用酶联免疫法无显著差异;检测结果变异系数范围在7%~11.2%之间,平均变异系数为8.7%;定量检测仪台间无显著差异。呕吐毒素快速定量检测卡检测限为0.078 mg/kg;定量检测仪台间无显著差异;采用便携式定量检测仪具有简单、快速、成本低、能实现现场操作且实时上传数据并记录监测地点位置等优势,具有较好的推广使用价值,特别适用于卫生调查、研究、筛查等现场使用。     

基于时间分辨荧光纳米微球的伏马毒素B1快速定量检测卡的制备及应用

为了满足粮食谷物中伏马毒素B1快速定量检测的需求,以伏马毒素B1为研究对象,建立了基于时间分辨荧光纳米微球的FB1荧光快速定量检测卡,检测前无需调整样品提取液pH,并借助酶联免疫试剂盒及高效液相色谱法分析比对了该荧光定量快速检测卡在粮食谷物（大米、玉米、小麦）中的检测性能。结果表明其检测不同样品的LOD在35.37~37.17 μg/kg之间,LOQ在117.9 ~123.9 μg/kg之间,灵敏度良好;线性范围均为250~6 000 µg/kg,相关系数R2在0.997 2~0.999 5之间;不同样品中6个添加水平的加标回收率为83.38%~114.66%,变异系数（CV）小于15%,准确性和重复性良好;国标液相色谱法和伏马毒素B1荧光定量快速检测卡同时检测FB1污染的不同样品,检测结果的符合度为92.53%~106.26%,CV小于10.37%;与其他常见的5种真菌毒素的交叉反应率均小于5%,且添加浓度和检出浓度的差异极显著,表明特异性良好。因此,所制备的FB1荧光定量快速检测卡能够满足粮食谷物中伏马毒素B1现场化快速定量检测的需求。     

赭曲霉毒素A时间分辩荧光定量检测体系适用性评价

目的验证赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)时间分辨荧光免疫定量检测体系对谷物中赭曲霉毒素A快速检测的适用性。方法该时间分辨荧光免疫定量检测体系包括时间分辨荧光免疫层析检测卡和时间分辩荧光定量检测仪。时间分辨荧光速测仪内置标准曲线,直接得出待测样品中赭曲霉毒素A的含量。对待测样品进行低、中、高3个浓度添加,每个浓度分为7份,由不同人员检测。同时,对实际阳性样品进行检测。结果对谷物做赭曲霉毒素A添加回收率实验,回收率在98%~113%之间;批内变异系数15%。在实际样品的检测中,时间分辨荧光定量检测卡得出的数值,与质控样本标识的值没有显著性差异。结论时间分辨荧光定量检测系统检测快速、准确,稳定、检测设备小型化、联网可实现数据上传,适用于大批量谷物样品的快速检测和风险评估。     

免疫竞争比色传感用于测定小麦中呕吐毒素的方法研究

目的 基于磁分离竞争免疫和酶催化比色传感技术建立一种呕吐毒素快速检测方法。方法 将抗体对呕吐毒素的特异性识别与辣根过氧化物酶催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺/双氧水的比色反应相结合,考察了酶催化显色反应的可行性和线性范围,优化了反应温度和反应时间。呕吐毒素检测过程集成自动化反应装置和高通量终端检测设备,以DON抗体功能化的磁性微粒为固相载体,优化了磁珠用量、酶标抗原浓度和免疫亲和反应时间。结果 呕吐毒素在0~1750ng/mL浓度范围内与催化反应产物的吸光度呈良好的线性关系,线性相关系数为0.98。以该方法对小麦基质进行加标回收,回收率在81.3%~90.3%之间,相对标准偏差小于2.1%,检测结果经液相色谱-质谱联用法验证相关性良好。结论 本方法具有较高的灵敏度和准确度,且自动化程度较高、操作较为便捷,有潜力应用于粮食样品中呕吐毒素的现场检测。     

间接竞争ELISA法检测谷物中T-2毒素

T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表,在单端孢霉烯族毒素中毒性最强,是主要的食品污染源之一,用间接竞争酶联免疫分析法(ELISA)对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验,最终结果用分析软件分析相关数据得到相关系数为0.998,IC50为1.3μg/kg,标准品浓度为0~16.2μg/kg,灵敏度为0.2μg/kg,添加回收率均大于90%。该法测定T-2毒素方法简便,特异性高,灵敏度高,重复性好,适合用于检测谷物中的T-2毒素。     

直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B1

建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。     

ELISA方法检测牛奶中叶酸含量

探讨牛奶中叶酸检测的酶联免疫反应(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法建立及其叶酸本底含量测定。用竞争性酶联免疫,棋盘法确定最佳抗体包被条件、封闭条件、酶标抗原浓度等,并进行性能评价测定,检测80例牛奶样品中的叶酸本底含量。结果表明:1最佳ELISA条件为:叶酸抗体以2μg/m L浓度,碳酸盐缓冲液4℃过夜包被,用1%牛血清白蛋白(BSA)封闭,叶酸-辣根过氧化物酶标记物(叶酸-HRP)工作浓度1μg/m L。2该方法最低检测限2.22 ng/m L;精密度测试CV5%;特异性检测与叶酸类似物的交叉反应率均≤0.1%;本方法与对照方法具有良好的样本测值相关性(r=0.960,P0.05);该方法加标回收率在94.50%~108.00%之间,回收效果良好;样品基质效应对该方法测值无显著影响。3牛奶样本叶酸本底含量范围为12.55 ng/m L~68.72 ng/m L,均值37.93 ng/m L。本研究建立的ELISA方法能够满足牛奶样品中叶酸含量的检测。     

甲拌磷残留检测间接竞争ELISA试剂盒的研制

研制用于检测甲拌磷残留量的间接竞争ELISA试剂盒。甲拌磷包被抗原的最佳工作质量浓度为4mg/L,抗体的最佳稀释倍数为8000,甲拌磷多克隆抗体交叉反应率小于20%,甲拌磷抑制率回归曲线为y=18.846x＋6.9949,在1～5000μg/L范围内呈线性关系,检测限为4.90μg/L,IC50为191.37μg/L。甲拌磷试剂盒的添加回收率均高于75%,供试样品检测结果的批内和批间变异系数均低于10%。试剂盒在4℃或－20℃下有效期为270d。     

毒死蜱残留检测间接竞争ELISA 试剂盒的研制

在多克隆抗体的基础上研制一种适用于检测样品中毒死蜱残留的间接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、特异性、精密度、准确度和有效期进行测定。结果表明,研制的试剂盒最低检测限为0.5μg/L,线性检测范围为1.8～1000μg/L,供试样品检测结果的批内、批间变异系数均低于8%,回收率均高于85%。试剂盒在4℃或－ 20℃条件下至少可保存6 个月。     

三唑磷单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

通过三唑磷与乙酰氯反应,得到三唑磷半抗原,通过免疫动物得到抗三唑磷单克隆抗体,将其应用于能够检测蔬菜中三唑磷残留量的酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒,结果表明：该试剂盒对结球甘蓝中三唑磷的检测限为49.6 μg/kg,IC50为6.9 μg/L,加样回收率为70.0%～93.5%,三唑磷标准曲线线性范围为1～81 μg/L,批内、批间的相对标准偏差（RSD）＜10%,三唑磷单克隆抗体与毒死蜱、对硫磷的交叉反应率分别为2.3%,3.8%。4 ℃条件该试剂盒下能够保存12个月,稳定性较好。     

利巴韦林单克隆抗体制备以及酶联免疫试剂盒的研究

首先合成出利巴韦林半抗原,通过免疫动物得到抗利巴韦林单克隆抗体,制备利巴韦林残留酶联免疫检测试剂盒,用于检测鸡肉、猪肉中利巴韦林残留量。结果表明：该试剂盒对鸡肉、猪肉的检测限分别为4.88 μg/kg、4.42 μg/kg,半抑制浓度（IC50）为7.9 μg/L,回收率为80%～105%,试剂盒的标准曲线线性范围为0～81 μg/L,批内、批间的相对标准标准偏差（RSD）均＜10%。4 ℃下能够保存12个月,稳定性较好。     

海产品贝毒素大田软海绵酸ELISA及HPLC-MS/MS检测方法的研究

为了检测海产品贝毒大田软海绵酸,保障其食用安全,利用活泼酯法将小分子OA与载体蛋白偶联,免疫BALB/c小鼠,细胞融合技术建立分泌抗OA的杂交瘤细胞株,并对其各种特性进行分析;小鼠腹水法大量生产抗体,纯化后建立ELISA方法,同时建立OA的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS)检测法,并对部分市售海产品进行了实际检测,ELISA方法标准曲线为y=－34.212x+83.49,相关系数为0.9784,线性范围0.4～25μg/L,灵敏度0.18μg/L;HPLC-MS/MS检测方法标准曲线y=193.07x－780.6(Q1/Q3：m/z 827.4～m/z 723.5)和y=83.021x－335.6(Q1/Q3：m/z 827.4～m/z 809.5),R2 均为0.9991,线性范围10～800μg/L,灵敏度小于2μg/L,平均RSD为4.34%。在检测的实际样品中两种样品ELISA呈阳性反应,其中一种经过了HPLC-MS/MS的验证。所建立的ELISA及HPLC-MS检测方法均可用于海产品腹泻性贝毒OA限量标准检测,为进出口海产品OA标准方法的建立提供实验基础。     

吗啡及可待因酶联免疫检测方法的研究

通过对吗啡分子结构进行改造,制备了吗啡半抗原及人工抗原,通过免疫动物得到了吗啡的单克隆抗体,建立了吗啡及可待因间接竞争酶联免疫检测方法。该方法对火锅底料和辣椒酱的检出限分别为4.92 μg/kg、4.85 μg/kg,半抑制浓度(IC50)为0.7 μg/L,标准曲线线性范围为0.3～24.3 μg/L。抗体与吗啡、可待因的交叉反应率分别为100%、150%。火锅底料、辣椒酱样品中平均添加回收率为80%～120%,变异系数＜15%。     

乳粉中阪崎肠杆菌污染检测试剂盒的研制

目的：以乳粉中污染的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）为检测目标,开发一种能快速检测其污染的试剂盒。方法：以两株阪崎肠杆菌单克隆抗体分别为包被抗体和检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附实验方法,优化各个反应条件,制成在2 h内能发生显色反应的检测试剂盒。结果：包被抗体的最佳工作质量浓度为10 μg/mL,检测抗体的最佳稀释倍数为1∶5 000。试剂盒的检测限为104 CFU/mL,在104～108 CFU/mL范围内OD450 nm值与阪崎肠杆菌浓度的常用对数值呈线性关系。特异性实验中,试剂盒可检出3 株阪崎肠杆菌标准菌株,对其他9 株食品中常见致病菌的检测均呈阴性。模拟带菌实验中,初始菌浓度为1 CFU/mL的模拟样品经过8 h前增菌后,通过该试剂盒便可检出。该试剂盒的批内、批间变异系数均小于6%,至少可在室温保存6 个月。结论：该双抗体夹心试剂盒具有灵敏度高、特异性好、精密度高、稳定性强等优点,可应用于乳粉中阪崎肠杆菌的快速检测。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA定量检测试剂盒的研制

研制了脱氧雪腐镰刀菌烯醇ELISA试剂盒,用于检测谷物粮食中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol,DON)。在抗DON单克隆抗体的基础上,用间接竞争酶联免疫吸附检测试剂盒各项指标。结果为:试剂盒最低检测浓度为20ng/mL,检测线性范围为50～400ng/mL,IC50103ng/mL。平均加标回收率>80%,批内变异系数小于10%,批间变异系数<15%。用试剂盒测定盲样,其结果与德国拜发试剂盒及免疫亲和柱-高效液相色谱检测结果无显著性差异。说明试剂盒指标符合相关技术要求,具有快速、灵敏、准确、方便等特点。     

Quantitative Determination of Deoxynivalenol (DON) Using the Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (AlphaLISA)

An indirect competitive Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay (AlphaLISA) was established by using anti-deoxynivalenol (DON) polyclonal antibody and coating antigen DON-bovine serum albumin (BSA) for detection of DON in cereals. DON-BSA was coated on Acceptor bead, the kit also contains donor bead sensitizer particles coated with streptomycin. The optional test conditions and analytical performance of the method were studied. Working concentration ranged from 0.007 to 100 ng/ml and the sensitivity for detection was 0.007 ng/ml. The intra- and inter-batch coefficient of variation (CV) of the assay were both below 5%. The recovery rate of artificially contaminated cereals ranged from 81.1% to 110.9% while the mean recovery of DON from cereals was 94.4%. This study suggests that DON-AlphaLISA method is a good method with high sensitivity and rapidity for quantitative analyzing DON in cereals.     

动物组织中赛庚啶竞争酶联免疫法的建立

建立快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。制备赛庚啶人工抗原作为包被原,使用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,构建快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.051 8X-1.353 4,相关系数R为0.995 7,半数抑制浓度（IC50）为0.23μg/L,动物组织样本的检测限为0.3μg/kg,赛庚啶阳性样本的加标回收率为85.1%-114.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.2%-9.6%。建立的竞争酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于动物组织中赛庚啶残留的检测。