低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨低聚葡萄籽原花青素(oligomer grape seed proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),DDP)对A549细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测DDP和O-GSP单独及联合用药对A549细胞存活率的影响;流式细胞仪检测O-GSP联合DDP对A549细胞周期的影响;Western Blot检测促细胞周期相关蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达。结果:DDP(≥5 mg/L)和O-GSP(≥16 mg/L)单独用药均对A549细胞增殖有抑制作用,且两者同时作用对细胞增殖抑制具有联合作用。5 mg/L DDP单独用药可以于S期阻滞A549细胞,4 mg/L O-GSP单独用药可以于G_0/G_1期阻滞A549细胞,两者联合可显著降低细胞周期调控蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达(P0.05)。结论:O-GSP可以联合DDP抑制A549细胞增殖,且这种联合作用与Cyclin D1-CDK 4-Rb通路介导的细胞周期调控有关。     

硒对啤酒酵母细胞生长的影响

目的研究不同硒浓度对啤酒酵母细胞生长的影响,确定适宜的硒添加量。方法用分光光度计测定不同硒浓度时酵母细胞培养液在不同时间的吸收度,绘制生长曲线,比较硒浓度不同时酵母细胞的生长情况。结果亚硒酸钠的添加浓度小于20μg/mL时,有促进酵母菌生长的作用;亚硒酸钠浓度高于30μg/mL时,对酵母菌生长有明显的抑制作用;亚硒酸钠浓度在20μg/mL时酵母菌可以正常生长。结论亚硒酸钠的添加浓度应在20μg/mL左右。     

己烯雌酚、邻苯二甲酸二丁酯和丙基硫脲嘧啶对小鼠垂体瘤神经细胞增殖的联合作用研究

目的探讨己烯雌酚(DES)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、丙基硫脲嘧啶(PTU)对小鼠垂体瘤神经细胞(GT1-7神经细胞)的增殖效应及其联合作用。方法 DES的剂量为0.1、1、10、100、1 000μmol/L,DBP的剂量为0.01、1、10、100、1 000μmol/L,PTU的剂量为0.000 1、0.01、1、100、1 000μmol/L。联合作用的剂量设计为DES0.1~1 000μmol/L,DBP 0.01μmol/L,PTU 0.000 1μmol/L。采用CCK-8法检测3种物质单独作用和联合作用24 h后GT1-7神经细胞存活率。结果 DES、DBP单独作用于细胞,随DES或DBP浓度的增大细胞存活率呈现先增加后降低的趋势。PTU单独作用于细胞,各组的细胞存活率与对照组比较有所增加,但基本维持在一定水平。DES、DBP、PTU单独作用时,其浓度分别低于10、100、1 000μmol/L时,GT1-7神经细胞存活率在90%以上。DES与DBP联合暴露时,细胞存活率随DES浓度的增加而降低。DES与PTU联合暴露时,细胞存活率随DES浓度增加表现为先增加后降低,DBP与PTU联合暴露时,细胞存活率随DBP浓度增加表现为先增加后降低。与DES单独作用体系比较,0.01μmol/L DBP和0.000 1μmol/L PTU同时加入到0~10μmol/L DES后细胞存活率明显增加,差异有统计学意义(P0.05),而DES浓度为100μmol/L时细胞存活率由80%左右降至4%左右,差异有统计学意义(P0.05)。结论 DES、DBP、PTU对GT1-7神经细胞的增殖效应呈先促进后抑制的趋势,3种物质在一定剂量下共同作用对GT1-7神经细胞增殖呈现联合作用。     

硒化卡拉胶联合表阿霉素对肝癌HepG-2细胞增殖及细胞周期的影响

目的观察硒化卡拉胶(KSC)和表阿霉素(EPI)联合应用对人肝癌HepG-2细胞生长及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT(噻唑蓝)比色法测定KSC和EPI对HepG-2细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度IC50值及金式指数q判断两者联合作用效果;用倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;Western blot法检测细胞周期蛋白Cyclin A和Cdc25A、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2的表达水平。结果 KSC和EPI可明显抑制HepG-2细胞增殖,且有剂量依赖性。联合组的抑制效果更显著,且优于单一用药组。EPI单独用药48 h的IC50值为3.612 mg/L,与30mg/L KSC联合用药的IC50值降至0.807 mg/L,q值判断两药联合表现为相加作用。倒置显微镜观察给药后细胞形态发生变化,联合组细胞膜破裂呈坏死状。流式细胞术结果表明,两药均可导致S期周期阻滞。Western blot结果显示两药均可使Cyclin A、Cdc25A和Cdk2蛋白表达下调,联合给药组下降更明显。结论 KSC和表阿霉素可抑制肝癌HepG-2细胞增殖,引起细胞周期S期阻滞,两药联合具有相加效应,这与其调节细胞周期相关蛋白的生成关系密切。     

白藜芦醇对不同时间高糖诱导HepG2细胞氧化损伤的保护作用

研究白藜芦醇对不同时间高糖诱导HepG2氧化损伤的保护作用。33 mmol/L高糖作为诱导剂,与不同浓度白藜芦醇(0.1、1、10μmol/L)共同孵育24、48、72 h,采用MTT法检测其对损伤细胞存活率的影响,DCFH-DA荧光探针法检测细胞自由基水平,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、总抗氧化能力(T-AOC)水平,Real-time PCR测定Nrf2、HO-1 mRNA表达水平,探讨白藜芦醇对高糖损伤细胞的保护作用及可能机制。结果表明,白藜芦醇与高糖共同作用48 h以上时,各浓度组均能显著提高损伤细胞存活率,显著降低细胞自由基水平(p0.05);各浓度组均能改善模型氧化还原状态,其中10μmol/L白藜芦醇作用48 h时效果极显著(p0.01);10μmol/L白藜芦醇作用48 h时,极显著上调Nrf2、HO-1mRNA表达水平(p0.01)。因此,白藜芦醇能通过清除细胞自由基、改善细胞氧化还原状态、上调抗氧化通路相关基因表达,抑制高糖诱导HepG2细胞的损伤。     

酿酒葡萄皮渣中白藜芦醇的提取及抗氧化、抗肿瘤活性研究

为了提高酿酒葡萄皮渣的综合利用价值,开发白藜芦醇新产品,对酿酒葡萄皮渣中白藜芦醇提取工艺进行研究。通过纤维素 酶水解和乙酸乙酯萃取法提取自酿葡萄酒皮渣中的白藜芦醇,利用响应面分析法优化白藜芦醇提取的工艺条件并测定了白藜芦醇的 抗氧化活性及对3种癌细胞（Hela、A549、PC-3）的生长抑制作用。 结果表明,最佳提取工艺条件为酶添加量70 U/μL、体积分数95%乙 醇与葡萄皮渣液固比20∶1（mL∶g）、酶解时间150 min、酶解温度40 ℃,在此优化条件下,提取得到白藜芦醇的提取率为144.13 μg/g; 抗氧化试验结果表明,白藜芦醇具有清除自由基的能力,当样品质量浓度为1.2 mg/mL时,对DPPH和超氧阴离子自由基的清除率分 别为（65.12±3.88）%和（54.13±3.11）%;体外抗肿瘤活性显示,其对Hela、A549和PC-3细胞的生长均具有抑制作用,半抑制浓度（IC50） 值分别为128.29 μmol/L、108.35 μmol/L和25.31 μmol/L。     

蔬菜种子中5种异硫代氰酸酯类化合物对人肺癌细胞抑制作用的研究

以人肺癌A549细胞为研究对象,采用MTT法检测5种异硫代氰酸酯对A549细胞生长的抑制作用,计算其IC50值。采用倒置显微镜观察细胞形态变化。通过研究5种异硫代氰酸酯对A549细胞的影响,探讨这些化合物的抗癌作用及其结构与活性之间关系。结果表明,5种单体对肿瘤细胞均有不同程度的剂量依赖性抑制作用,并且能使A549细胞的形态发生改变;对A549细胞的抑制活性是:萝卜子素萝卜硫素≈3-(甲磺酰基)丙基异硫代氰酸酯3-(甲硫基)丙基异硫代氰酸酯3-丁烯基异硫代氰酸酯,IC50值分别为(15.43±0.82)μmol/L,(22.09±0.94)μmol/L,(29.82±1.36)μmol/L,(47.40±3.51)μmol/L,(79.57±3.05)μmol/L。萝卜子素的有效浓度为3.125～100μmol/L;萝卜硫素、3-(甲磺酰基)丙基异硫代氰酸酯、3-(甲硫基)丙基异硫代氰酸酯、3-丁烯基异硫代氰酸酯的有效浓度均为6.25～100μmol/L。说明异硫代氰酸酯的特征基团-N=C=S为主要活性基团,侧链上的磺酰基和硫基可能是异硫代氰酸酯的活性辅助位点。侧链上含有磺酰基的异硫代氰酸酯类化合物具有较强的抑制肿瘤活性。     

富硒益生菌的筛选及其富硒条件的优化

为了获得能耐受较高亚硒酸钠质量浓度和具有富硒能力的益生菌菌株,对7株酵母菌和12株乳酸菌进行了筛选。结果表明,所有菌株均能在亚硒酸钠质量浓度为20~80μg/m L的平板上生长,乳酸菌YQRS菌株和酵母菌FJYJM3菌株具有较高的耐受性和富硒能力。对它们进行发酵条件的优化,表明YQRS菌株在亚硒酸钠添加量为15μg/m L、添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最好,菌体生物量为2.66 g/L,总硒含量能达到2 300.26μg/L。而FJYJM3菌株在亚硒酸钠添加量为20μg/m L,添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最显著,生物量能达到4.86 g/L,总硒含量能达到5 790.99μg/L。     

亚硒酸钠在SGC-7901细胞生长中的抑制作用

目的：研究亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长的影响。方法：应用细胞培养和SRB实验探讨了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长曲线的影响：应用集落形成试验、分裂指数试验研究了亚硒酸钠对SGC-7901细胞集落形成和分裂指数的影响；应用流式细胞仪检测了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长周期的影响；应用电镜、TUNEL染色及流式细胞仪观察了亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡的作用。结果：亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成、分裂指数有明显的抑制作用，其抑制作用与其作用浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测显示亚硒酸钠作用SGC-7901细胞24h后，细胞周期发生改变，G1期细胞百分率减少，S期细胞百分率增加，与对照组相比有显著性差异（p〈0．05）：电镜下，细胞核固缩，染色质凝集呈新月形紧贴于核膜周边，核膜扭曲；DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”；TUNEL染色法检测细胞凋亡指数在10．4％～33．4％。结论：亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用，其抑制作用程度与其作用浓度和时间呈正相关：亚硒酸钠通过阻滞细胞S期抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡可能是其抑制SGC-7901细胞生长的机理之一。     

富硒青钱柳多糖对α葡萄糖苷酶及HepG2细胞葡萄糖消耗的影响

以α-葡萄糖苷酶和HepG2细胞作为体外受体模型,研究富硒青钱柳多糖(Se-CPP)体外降血糖活性,并与青钱柳多糖(CPP)、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物比较。结果表明,Se-CPP对α-葡萄糖苷酶活性具有良好的抑制效果且呈现明显的剂量依赖性,其半抑制浓度(IC₅₀)为0.054 mg/mL,低于阿卡波糖、CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物。适宜浓度的Se-CPP可促进胰岛素抵抗状态HepG2细胞对葡萄糖的消耗,效果显著优于CPP、CPP+硒酵母、CPP+亚硒酸钠复配物(p<0.05)。     

乳菇菌素D体外抗肿瘤活性及对细胞周期和凋亡的影响

目的：研究来源于绒白乳菇菌的新型倍半萜类化合物——乳菇菌素D的抗肿瘤活性及对细胞周期和细胞凋 亡的影响。方法：运用噻唑蓝法检测乳菇菌素D对A549、HCT-8、Bel-7402、SMMC7721、HeLa细胞增殖的抑制作 用并计算半数抑制率（half maximal inhibitory concentration,IC50）,并以顺铂作为阳性对照;选择对该化合物敏感 的A549细胞株,观察其作用后细胞的形态学改变、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果：乳菇菌素D能够有效抑制 A549、Bel-7402、SMMC7721和HeLa细胞的增殖,作用72 h后的IC50分别为2.46、19.09、18.21、17.05 μg/mL;乳菇 菌素D可引起A549细胞显著的形态学改变,出现凋亡小体;诱导A549细胞凋亡（100 μg/mL作用72 h 时的凋亡率为 32.14%）、使细胞阻滞于S期。结论：该化合物能够抑制多种组织来源的肿瘤细胞增殖,其中A549细胞最敏感;其 作用机制是通过干扰细胞增殖周期而诱导肿瘤细胞凋亡。本实验为乳菇菌素D的开发提供实验依据。     

连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞的抑制作用及机制

目的：探究连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞增殖、周期、凋亡、迁移、侵袭的影响,分析其对这两种细胞的抑制效果及其作用机制。方法：取食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞,使用不同浓度（10、100 μmol/L）的连翘苷处理干预细胞24 h,采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK8）法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、凋亡,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭,蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,PKB）,（也称为AKT）、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphorylated phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-PKB）（也称为p-AKT）、p21蛋白、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metallopeptidase 9,MMP9）表达水平。结果：连翘苷对食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞的半数抑制浓度（50% inhibitory concentration,IC50）分别为308.4 μmol/L和322.0 μmol/L。10、100 μmol/L连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞增殖（P＜0.05）,对人食管正常上皮细胞无毒性作用。10、100 μmol/L连翘苷可诱导食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞周期改变,促进细胞凋亡。10、100 μmol/L连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞迁移及侵袭（P＜0.05）。10、100 μmol/L连翘苷可显著降低食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞中p-PI3K、p-AKT、Bcl-2和MMP9蛋白的表达水平（P＜0.05）,100 μmol/L连翘苷可显著提高食管上皮恶性转变细胞和Eca-109细胞中p21蛋白的表达水平（P＜0.05）。结论：连翘苷可显著抑制食管上皮恶性转变细胞和食管癌Eca-109细胞增殖、迁移、侵袭,其机制可能与PI3K/AKT通路失活有关。     

Induction of the cell cycle arrest and apoptosis by flavonoids isolated from Korean Citrus aurantium L. in non-small-cell lung cancer cells

This study investigated the anti-proliferative and apoptotic effect of flavonoids isolated from Korean Citrus aurantium L. using A549 lung cancer cells. Flavonoids potently inhibited of A549 cells in a dose-dependent manner, whereas flavonoids had a weak inhibitory effect on proliferation of WI-38 cells. Flow cytometry and Western blot analysis showed that flavonoids induced cell cycle arrest at the G2/M checkpoint by controlling the proteins expression level of cyclin B1, cdc2, cdc25c and p21^WAF1/CIP1. Also, flavonoids induced apoptosis through the regulation of the expression of caspases, cleaved PARP and Bax/Bcl-xL ratio. The activity of caspase-3 on A549 cells increased in a dose-dependent manner. These results clearly indicated that the anti-cancer effect of flavonoids on A549 cells follows multiple cellular pathways through G2/M arrest and the induction of apoptosis.     

玉米黄素对衣霉素诱导的SH-SY5Y细胞周期、自噬、凋亡的保护作用

目的：探讨玉米黄素对衣霉素（tunicamycin,TM）诱导的SH-SY5Y细胞活性、细胞周期、自噬及凋亡的影响。方法：分别设置空白对照组（不作处理）、玉米黄素组（5 μmol/L玉米黄素）、TM损伤组（5 μg/mL TM）和损伤加保护组（5 μmol/L玉米黄素预处理＋5 μg/mL TM进一步共处理）,采用噻唑蓝法检测各处理对SH-SY5Y细胞存活率的影响,从而筛选药物共处理时间;采用流式细胞术测定细胞周期的变化;通过Western blot法测定自噬相关蛋白Beclin1、Beclin1-C和微管结合蛋白1轻链3（microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3）B以及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma 2,BCL2）的表达量。结果：玉米黄素（5 μmol/L）能减轻TM对SH-SY5Y细胞存活率的抑制作用,与TM损伤组相比,损伤加保护组在处理时间为36 h时差异极显著（P＜0.01）,48 h时差异显著（P＜0.05）;而TM损伤组相较于空白对照组在处理24、36、48 h时均表现出极显著差异（P＜0.01）。与空白对照组相比,TM处理可以极显著增加细胞周期中G0/G1期细胞数量（P＜0.01）,显著或极显著增加LC3B（P＜0.01）、Beclin1（P＜0.05）及Beclin1-C（P＜0.05）表达水平,极显著降低G2/M期细胞数量（P＜0.01）、抗凋亡蛋白BCL2表达水平（P＜0.01）。而玉米黄素联合TM处理与TM损伤组比较,均能减轻TM引起的改变,其中BCL2蛋白水平显著提高（P＜0.05）。结论：玉米黄素可减轻TM处理引起的SH-SY5Y细胞周期G1期阻滞、促细胞自噬与促凋亡作用,其作用机制与玉米黄素对细胞存活率、细胞周期分布和自噬、凋亡相关蛋白表达的调节有关。     

Effect of selected phytochemicals on cell proliferation in A549 lung cancer cells

Effects of quercetin 3-β-d-glucoside, resveratrol, and curcumin on A549 lung cancer cell proliferation and the mechanism of these phytochemicals in regulating apoptosis and cell cycle arrest were investigated. A549 cells were treated with quercetin 3-β-d-glucoside, resveratrol, or curcumin at 37°C for 96 hr and cell viability was measured with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay. Proteins related to apoptosis and cell cycle in A549 cells were quantified with Western blotting assay. Quercetin 3-β-d-glucoside, resveratrol, and curcumin inhibited A549 cell proliferation in a dose-dependent manner (p<0.05). Quercetin 3-β-Dglucoside significantly decrease the expression level of CDK4 at concentrations of 5 mM and above (p<0.05). Curcumin lowered expression level of Bcl-2, CDK4, and cyclin D1 at concentrations of 100, 50, and above, and 50 mM and above, respectively (p<0.05). These results suggest that phytochemicals, which can be found in a normal diet, inhibit lung cancer cell proliferation and regulate the expression of the proteins involved in apoptosis and cell cycle.     

人参寡肽抗苯并芘诱发肺上皮细胞炎性损伤研究

本研究从人参中提取获得人参寡肽,解析其氨基酸序列;利用CCK-8技术筛选保护人肺上皮II型（A549）细胞免受苯并芘（Benzopyrene,Bap）损伤效果最好的寡肽;流式细胞术检测人参寡肽-1（Renshen Oligopeptides-1,RSO-1）在10 μmol/L及50 μmol/L浓度下对浓度为10 nmol/L的Bap导致的A549细胞凋亡、线粒体膜电位降低和活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS）含量增加的影响;蛋白免疫印迹验证10 nmol/L浓度的Bap对A549细胞芳香烃受体（Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR）、NF-κB与MAPK信号通路及AP-1因子的影响,并检测了RSO-1在10及50 μmol/L浓度下对Bap毒性的抑制作用。结果表明,10 nmol/L的Bap暴露诱发A549细胞氧化应激（与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05）,激活芳香烃受体（Aromatic Hydrocarbon Receptor,AHR）和NF-κB信号通路并诱发细胞凋亡（与空白对照组相比具有显著性差异,P<0.05）。而浓度为10和50 μmol/L人参寡肽（Ginseng Oligopeptide,RSO,RSO-1~氨基酸序列-EGHGF）均可抑制Bap暴露导致的AP-1因子表达及芳香烃受体（AHR）和NF-κB的激活,从而抑制Bap暴露导致的细胞凋亡（与Bap组相比均具有显著性差异,P<0.05）。本研究对人参的应用及深层次开发提供理论依据。     

皱瘤海鞘抗人肺癌A549细胞组分的分离纯化及化学成分分析

采用四氮甲唑蓝比色法检测皱瘤海鞘（Styela plicata）被囊及内脏团甲醇提取物对体外培养的人肺癌A549细胞增殖的抑制作用,利用倒置显微镜、流式细胞仪及荧光显微镜观察,分析其对A549细胞的形态和细胞凋亡的影响,并且用气相色谱-质谱联用（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）技术分析高活性组分6号内脏团柱层析组分（column eluted fraction 6 from visceral methanol extract,VCEF-6）的化学成分。结果表明：在低质量浓度（25～75 μg/mL）范围内,被囊及内脏团醇提物对A549细胞生长没有抑制作用,当质量浓度增大到100 μg/mL以上时,被囊及内脏团醇提物表现出对A549细胞明显的生长抑制作用。醇提物柱层析组分的体外抗肿瘤检测表明,共有8 个组分在100 μg/mL时对A549细胞表现出明显的生长抑制作用,其中VCEF-6抑制A549细胞生长活性最强,24 h时半数抑制浓度为168.7 μg/mL。通过流式细胞术以及荧光显微镜观察表明,VCEF-6抑制肿瘤细胞生长与诱导细胞凋亡有关。GC-MS分析VCEF-6的化学成分结果表明,VCEF-6含有22 种已知物质,其中甾醇类6 种、烷烃类6 种、脂肪酸酯类6 种、芳香族化合物4 种。综上所述,在体外实验中VCEF-6能够抑制A549细胞生长并诱导其凋亡。