间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化

以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件.采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件.选择与DES结构类似的四种药物进行交叉反应,计算交叉反应率.结果表明产生的抗血清的稀释度可以达到 1:102400.方阵滴定法确定最佳包被浓度和抗血清工作浓度分别为1:200和1:4000.通过间接ELISA方法建立了标准曲线,抑制曲线表明,兔抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系,其IC 50为1.89ng/ml,最低检测限为0.08ng/ml.四种DES结构类似物的交叉反应率除双烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%.从而优化了间接酶联免疫检测条件,建立了己烯雌酚实用的检测方法,为最终组装试剂盒奠定了基础.     

利用表面等离子谐振生物传感器检测磺胺二甲嘧啶的方法研究

动物源性食品中的兽药残留对人类的健康具有潜在的危害。这项研究利用SPR生物传感器免疫法检测磺胺二甲嘧啶。实验对抗原在芯片表面的固定条件以及抗体的浓度进行了优化,实验中所构建的标准曲线的检测限(LOD)约为0.7ng/ml,检测范围为0.7～10ng/ml。对抗体的特异性和稳定性进行了研究。SPR-2004传感器为中国科学院电子学研究所自行研制的生化分析仪,为单通道双参数型,可以通过使用参照表面来消除折射率和基质效应的影响,从而提高数据的准确性,并缩短检测时间。     

沙丁胺醇药物残留酶联免疫检测法的建立及优化

本试验通过优化ELISA工作条件,建立间接竞争ELISA检测沙丁胺醇(SAL)的方法。采用方阵滴定法确定包被抗原、抗体、酶标二抗的工作浓度;以上述试验条件为基础,以系列稀释的SAL标准溶液作为检测对象,绘制标准曲线,并最终确定优化的试验方案。方阵滴定法确定包被抗原工作浓度为1:2000,抗体工作浓度为1:4000,酶标二抗工作浓度为1:6000;从标准曲线可知,线性检测范围为0.5～20 ng/mL,IC50为2.33 ng/mL;最终优化的试验方案中酶标板为深圳金灿华有限公司的产品,包被液为0.05 mol/LpH 9.6的碳酸盐缓冲液,封闭液为1%BSA+PBST,标准品用复溶液配制,抗体稀释液为1号,酶标二抗稀释液为3号,显色时间为15 min。本研究建立了一种灵敏、特异、操作简单、适于大批量样品筛选的SAL检测方法,对其他药物残留免疫学快速检测产品的研制及应用也有一定的借鉴意义。     

响应面法优化蛹虫草蛋白质提取工艺研究

此次试验研究是以蛋白质得率为指标,研究蛹虫草蛋白质提取的最佳工艺。首先进行溶剂的选择试验,从中选择最佳提取溶剂;接下来经绘制标准曲线确定蛋白质含量与吸光度的线性关系以及利用数学计算方法得出回归方程,然后经单因素试验确定一组蛹虫草中提取蛋白质的较佳工艺条件;最后通过响应面分析法对蛹虫草中蛋白质提取工艺进行优化。蛹虫草中蛋白质的检测方法是考马斯亮蓝染色法。响应面分析法得出最佳提取工艺:氢氧化钠溶液作为提取溶剂,氢氧化钠的浓度要达到0.08 mol/L,料液比为1∶81.1 g/m L,所用提取时间120.75 min,此条件下蛋白质得率的预测值为83.4 mg/g。根据预测最佳提取工艺条件进行验证试验,最终蛋白质的得率84 mg/g与预测值接近。这不仅验证了所建模型的正确性,而且也得出了蛹虫草中蛋白质的最佳提取工艺,达到了这次试验的目的。     

氮掺杂碳点的开关型荧光传感器检测蔬菜中的生物硫醇

研究并建立一种开关型荧光传感器模型快速检测Hg2+和生物硫醇。以柠檬酸和尿素为前驱体,通过一锅水热法制备了氮掺杂碳点(N-CDs),并对其进行了表面形貌、紫外和荧光光谱以及表面基团表征的检测,以检测体系pH、Hg2+浓度、孵育时间(荧光猝灭和恢复时间)为单因素,优化检测生物硫醇的最佳条件,并在最优检测条件下建立相应的标准曲线。结果表明,N-CDs的最佳激发和发射峰分别是340和432 nm,量子产率(FLQY)为32.72%。优化得到谷胱甘肽(GSH)的最佳检测条件为pH=5.0,Hg2+浓度为200 μmol/L,460 s荧光猝灭和380 s荧光恢复,最佳检测半胱氨酸(Cys)条件为pH=5.6,Hg2+浓度为300 μmol/L,440 s荧光猝灭和400 s荧光恢复,在最优条件下该传感器对0~300 μmol/L的GSH和100~400 μmol/L的Cys具有线性响应,检测限(LOD)分别为2.56和3.46 μmol/L,加标回收率为80%~120%。以上结果表明该传感器对检测蔬菜中生物硫醇有较好的选择性和准确度,能为食品基质中生物硫醇的荧光快速检测提供一种新思路。     

量子点微球荧光免疫层析定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星

目的 建立一种快速定量检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的新方法学。方法 以量子点荧光微球为新型标记探针,通过参数优化,制备获得量子点荧光微球免疫层析试纸条;进一步以T/C比值法建立定量检测恩诺沙星的新方法。结果 在最优条件下,该试纸条检测缓冲液中恩诺沙星半数抑制浓度为1.035 ng/mL,最低检测限为0.125 ng/mL;检测水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的定量检测范围为8.75~560 μg/kg,半数抑制浓度为72.45 μg/kg,加标回收实验显示该方法定量检测组织样本中恩诺沙星的回收率在83.03~124%之间,变异系数小于15%,检测15个实际含有恩诺沙星的水产以及畜禽肉组织样本,其结果与LC/MS/MS方法检测结果高度一致;此外,加速保存实验结果显示该试纸条在室温下可保存一年。结论 本研究以量子点荧光微球为新型标记探针,构建了高灵敏定量检测恩诺沙星的新方法,实现了水产、畜禽肉组织中恩诺沙星的简单、快速、定量分析。     

化学发光酶免疫分析法检测食品中赭曲霉毒素

目的：建立检测食品中赭曲霉毒素(OA)快速灵敏化学发光酶免疫方法。方法：采用棋盘滴定法确定OABSA抗原的包被质量浓度、包被量以及一抗和二抗的工作稀释度,建立间接竞争抑制曲线,确定线性范围、检出限和回收率。结果：确定的检测工作条件为：OA-BSA 最佳包被质量浓度60ng/mL,抗OA 单克隆抗体的最佳工作稀释度1:400,校正曲线线性范围6～400ng/mL,赭曲霉毒素的检出限为0.02ng/mL,50% 抑制质量浓度145ng/mL,在100～2000ng/g 添加水平的回收率范围为83.6%～105.8%。用所建方法对质控样品进行了分析,检测结果符合率达到100%。结论：所建方法准确、灵敏,适用于食品中OA 的筛选。     

基于纳米金显色的非标记核酸适配体可视化检测重金属镉的方法研究

目的建立以特异性非标记核酸适配体为识别探针的重金属镉可视化检测方法。方法根据适配体与镉的高亲和力结合特性,利用纳米金溶液在盐诱导下凝聚后引起的颜色变化反应,通过分光光度计检测溶液的吸光度来检测镉离子浓度。通过优化适配体DNA浓度、盐离子浓度和纳米金溶液体积,确定最佳反应条件,建立样品溶液中镉离子浓度与吸光度的线性关系。结果该方法的线性范围和检测限分别是0.14~10 ng/m L和0.14 ng/m L,可以满足痕量检测要求。通过对灌溉水样的加标回收实验证明,检测体系具有很好的实用性和复杂基体适应性。结论利用核酸适配体和纳米金显色实现了镉的痕量可视化检测,该方法是一种简单、快速、灵敏的检测方法,在现场快速检测和高通量分析中都具有很好的应用前景。     

蛋白质芯片分析在呋喃唑酮检测中的应用研究

目的：研究了蛋白质芯片技术应用于呋喃唑酮代谢物（AOZ）检测的可行性。方法：以免疫竞争原理建立蛋白芯片体系,通过各项影响因素的优化,得出了稳定的竞争曲线。结果：该蛋白芯片能实现对AOZ高通量的快速、准确的检测,检测限达到0.1ng/mL。结论：蛋白质芯片技术应用于食品抗生素检测有独特的优势,可以在该领域获得广泛的应用。     

磁性量子点复合结构制备及其应用分析

试验以酶联免疫吸附法为检测基础,在水相中合成发光量子点,再由量子点与磁性纳米材料相结合,形成磁性量子点,然后使磁性量子点与羊抗兔IgG联结制备生物荧光探针。该复合结构物质依靠磁性材料的磁富集作用,促进量子点聚集度,增强量子点荧光信号,利用新方法对目标物进行微量检测,有效地提高了分析测定的灵敏度和稳定性。试验以黄曲霉毒素B_1为模式分析物,检测荧光强度与黄曲霉毒素B_1质量浓度在0.1~1 000 ng/mL范围内成线性关系,检出限为0.1 ng/mL,取得了较满意的结果。