毛细管电泳涂层研究及食品检测中的应用

毛细管电泳涂层技术因为分离碱性蛋白的需求而诞生,研究者致力于采用不同的材料和方法提高毛细管电泳的分离性能。目前,对毛细管内壁进行涂层改性依然是提高毛细管电泳的分离效果和重现性,抑制分析物与毛细管内壁间吸附作用的最有效、最常用的方法。随着毛细管电泳(CE)与质谱(MS),激光诱导荧光检测(LIF)等联用技术的发展,毛细管电泳涂层在生命科学技术、生物医药工程、环境卫生保护、食品质量检测等领域的广泛应用。本文根据涂层材料的种类和制备机理,对近年来毛细管电泳涂层技术的特点、发展和在食品检测领域的应用状况进行了综述。     

毛细管电泳法测定食品中八种添加剂

为建立毛细管电泳法同时测定亮蓝、香兰素、山梨酸、苯甲酸、日落黄、新红、苋菜红、柠檬黄8 种食品添加剂的分析方法。采用毛细管区带电泳- 紫外检测法,以磷酸- 硼砂缓冲体系为运行缓冲液,于240nm 波长处对饮料、果冻、蜜饯样品进行检测,一次进样分析在8min 内完成。结果表明：该方法的线性范围为2.5～1000μg/mL,线性相关系数在0.9986～0.9998 之间,平均回收率在85.2%～100.3% 之间,相对标准偏差(RSD)≤6.98%(n=5),检测限为0.25～10μg/mL。该方法操作方便,检测快速,在食品添加剂的检测上取得了令人满意的效果。     

高效毛细管电泳法测定胭脂虫提取物中胭脂红酸

建立高效毛细管电泳法(HPCE)测定胭脂虫提取物中胭脂红酸含量的方法以含5% 乙腈、5% 乙二醇的40mmol/LNa2HPO4-Na2B4O7·10H2O 混合缓冲液(pH9.434)为背景电解质,60cm × 75μm 未涂层毛细管柱为分离泳道,分离电压20kV,0.5psi × 10s 压力进样,柱温25℃,检测波长239nm,此条件下,采用峰面积内标法定量;在选定的电泳条件下,胭脂红酸质量浓度在50～500mg/L 范围内线性关系良好,线性相关系数R=0.9958,加标回收率为100.86%,方法检出限(RSN=3)为5.00μg/mL。本方法测定胭脂红酸含量试剂用量少,简便、快速、准确,可应用于实际生产中胭脂红酸的测定。     

CE和HPLC测定水源水体中微囊藻毒素方法比较

利用毛细管电泳（capillary electrophoresis,CE）仪结合紫外-可见光二极管阵列检测器检测技术建立水体中痕量微囊藻毒素的检测新方法。通过与GB/T 20466-2006《水中微囊藻毒素的测定》高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）方法对比分析,进行2 种检测技术的评价。CE检测条件为：毛细管柱（60 cm×75 μm i.d.）,有效长度为44 cm,分离缓冲溶液为12 mmol/L硼酸盐（pH 9.0）,分离电压25 kV,检测波长238 nm,压力6 895 Pa流体动力学进样;优化后的HPLC检测条件为：C18色谱柱（250 mm×4.6 mm i.d.,5 μm）,甲醇-磷酸盐缓冲溶液（60∶40,V/V）为流动相,检测波长238 nm,柱温度35 ℃,流速1 mL/min。结果表明：CE对3 种微囊藻毒素MC-RR、MC-LR和MC-YR的检出限分别是0.16、0.20 μg/mL和0.24 μg/mL,HPLC对3 种微囊藻毒素的检出限分别为0.020、0.079 μg/mL和0.052 μg/mL,这2 个方法的灵敏度相差1 个数量级;加标回收率分别92.5%～106.0%和99.6%～102.5%,CE对应的保留时间和峰面积的精密度相对标准偏差为0.53%～0.64%和2.67%～3.29%;HPLC法的保留时间和峰面积精密度相对标准偏差为0.16%～0.53%和0.80%～1.53%。检测同一水样中微囊藻毒素含量,CE检测结果和HPLC结果之间差异不显著（P＞0.05）。     

氯霉素毛细管电泳免疫分析方法研究

针对目前食品安全领域中氯霉素的检测,建立一种快速灵敏的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法。该方法对氯霉素检测的线性范围和最低检测限分别为0.008～5μg/L 和 0.0016μg/L。与相应固相酶联免疫分析ELISA相比,对氯霉素的检测灵敏提高了约20 倍且有效缩短了分析时间。建立的氯霉素毛细管电泳免疫分析方法对动物源性食物(牛奶、鸡肉和鱼肉)进行分析,得到氯霉素在实际样品中的检测限为0.035μg/kg。     

纳米金复合材料涂层毛细管电泳法快速测定鱼肉中的组胺

建立高效毛细管电泳法快速检测鱼肉中组胺含量的方法。方法 鱼肉样品经100 g/L的三氯乙酸溶液超声萃取20 min,萃取液经离心和过滤后进行毛细管电泳分离检测。采用季铵化纤维素负载的纳米金复合材料(QC-Au NPs)对毛细管内壁进行动态涂层,以抑制管壁对组胺的吸附。电泳条件:毛细管为熔融石英毛细管(75/365 μm,40/47 cm),运行缓冲液为500 μg/ml QC-Au NPs 磷酸缓冲液(pH=6.0),反向电压-12 kV,柱温20 ℃,检测波长211 nm。结果 在涂层毛细管中,组胺的吸附被抑制,峰拖尾现象消除,并在4 min内出峰。组胺在0.05～0.80 mg/ml浓度范围内线性关系良好(r²=0.998 7),检出限(S/N=3)为0.002 mg/ml,定量限(S/N=10)为0.007 mg/ml。鱼肉中组胺加标回收率为94%～105%,RSD为3.1%～7.2%。结论 该方法具有快速,简便,准确度和精密度高等特点,适用于鱼肉中组胺的快速检测。     

高效毛细管电泳-紫外检测法同时检测雪糕中多种添加剂

采用高效毛细管电泳-紫外检测法,对雪糕中常见的亮蓝、日落黄、苋菜红、新胭脂红、柠檬黄5 种色素进行检测。电泳条件：缓冲溶液10 mmol/L Na2B4O7-5 mmol/L NaH2PO4（浓度为0.7 mmol/L的β-环糊精）,pH 11.5,检测波长214 nm,外加电压25 kV。在该条件下,各色素线性范围在10～1 000 μg/mL之间,r在0.997 5～0.999 9之间,检出限在1.2～8.6 μg/mL之间（RSN=3）,平均回收率为93.8%～108.5%,相对标准偏差不大于4.19%,结果表明该方法简便、准确可靠,可用于雪糕中合成色素的同时检测。     

高效液相色谱法同时检测粮谷中的黄曲霉毒素和赭曲霉毒素

建立粮谷类食品中黄曲霉毒素(B1、B2、G1 和G2)和赭曲霉毒素A 的同时检测方法。样品经过甲醇- 水(80:20,V/V)提取,液液萃取净化和富集后,三氟乙酸衍生,采用Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱(4.6mm ×250mm),以乙腈和体积分数2% 冰醋酸溶液为流动相梯度洗脱,在线变换波长荧光检测。根据3 倍信噪比的峰 响应值,确定黄曲霉毒素(B1、B2、G1 和G2)和赭曲霉毒素A 检出限分别为0.06、0.03、0.18、0.05μg/kg 和0.51μg/kg,上述5 种毒素分别在质量浓度0.05～100、0.125～25.00、0.05～100、0.125～25.00μg/L 和0.05～50.00μg/L 范围内呈线性相关,相关系数r 分别为0.9998、0.9998、0.9998、0.9996 和0.9998;在玉米、大米、小麦3 类样品中加标回收率平均为71.73%～115.37%,相对标准偏差为3.00%～9.88%,方法学验证结果表明,黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A 5 种毒素同时检测结果与现行国标的单独检测方法检测结果无显著性差异(P ＞ 0.05)。     

高效毛细管电泳法对5 个产地苦荞中黄酮类化合物的检测

采用高效毛细管电泳法,分别对5 个不同产地苦荞中黄酮类化合物进行检测。电泳条件：10 mmol/LNa2B4O7-H3BO3缓冲溶液,pH 9.3,检测波长218 nm,分离电压25 kV。在该条件下,表儿茶素、芦丁、山奈酚和槲皮素4 种黄酮类化合物在7 min内得到分离,线性范围分别为0.03～0.54、0.05～0.97、0.03～0.63、0.04～0.90 mg/mL,相关系数为0.992 3～0.998 7,最低检出限分别为5.33×10－6、1.80×10－5、2.51×10－5、1.24×10－5 mg/mL（RSN=3）,平均回收率在95.5%～104.7%之间,相对标准偏差不大于3.66%。结果表明：该方法准确可靠,可用于苦荞中黄酮类化合物的检测。     

柠檬酸对花生B族黄曲霉毒素脱毒效果的研究

研究分析不同浓度的柠檬酸溶液在不同的液料比和不同作用时间下花生中B族黄曲霉毒素的含量变化。结果表明,随着柠檬酸溶液浓度的提高,液料比的增加,作用时间的延长,花生中B 族黄曲霉毒素的含量降低,脱毒效果越好。用80g/L 的柠檬酸溶液,液料比(V/m)为5:1 对霉变后染有B 族黄曲霉毒素(AFB1 和AFB2)的花生颗粒(98.60μg/kg)浸泡30min 具有很好的脱毒效果,处理后,黄曲霉毒素含量小于20μg/kg,达到国标GB2761 - 2005 对花生中黄曲霉毒素限量的要求。     

毛细管硅胶整体柱分离分析食品中有机酸

建立应用毛细管硅胶整体柱采用毛细管电色谱法分离分析食品中有机酸的方法。对影响毛细管电色谱分离效率的条件进行优化,色谱柱为本实验室制作的毛细管硅胶整体C18柱(100μm×40cm)、电压－6kV、进样时间10s、紫外检测波长200nm,流动相为150mmol/L磷酸二氢钠-60mmol/L硼砂缓冲溶液(浓度比为5:2)和0.5mmol/L十六烷基三甲基溴化铵,pH7.5、25℃。结果表明：草酸和富马酸的线性范围为10～1000μg/mL,丁二酸线性范围20～500μg/mL,酒石酸和柠檬酸的线性范围为15～1000μg/mL,线性相关系数r≥0.9986,平均回收率在89.8%～101.1%之间,相对标准偏差≤6.23%(n=5),检出限在3.0～7.5μg/mL之间。毛细管硅胶整体柱具有制作成本低廉,对加热、有机溶剂等稳定和重复使用次数多等优点,应用毛细管硅胶整体柱采用毛细管电色谱法可以方便、快速、高效地分离分析食品中有机酸。     

高效毛细管电泳法快速测定乳制品中三聚氰胺

建立高效毛细管电泳快速测定乳制品中三聚氰胺含量的方法。样品用100mmol/L 醋酸提取,以150mmol/L磷酸二氢钠为分离缓冲液,以未涂敷石英毛细管(20cm(有效长度)× 50μm)为分离柱,于235nm 波长处检测,采用峰面积外标法定量。实验研究缓冲溶液的浓度、分离溶液pH 值及样品前处理条件对三聚氰胺准确定量的影响。方法检出限为0.06mg/L,定量限为0.2mg/L,线性范围为0.2～200mg/L,线性相关系数r=0.9998。1.0、10mg/L 添加水平的平均加标回收率分别为93.0% 及84.3%。该方法简单快速,6min 之内即可完成一次样品分析(预清洗2min,分离4min)且试剂消耗少、环境友好及检测准确,适合于各类乳制品中三聚氰胺的常规测定。     

毛细管电泳法测定甘蔗中 3-硝基丙酸

目的 建立甘蔗中 3-硝基丙酸的毛细管电泳分析方法。 方法 粉碎后的甘蔗经样品提取液提取, 离心 除杂后, 在 228 nm 波长处用毛细管电泳法检测。结果 在优化的实验条件下, 3-硝基丙酸的质量浓度在 1.0~100.0 mg/L 范围内与其对应的校正峰面积呈良好线性关系(r=0.9997)。方法检出限(S/N=3)为 0.3 mg/L, 定量限(S/N=10)为 1.0 mg/L。在 10.0、50.0 mg/L 两个添加水平下, 方法的回收率分别为 95.2%和 103.9%, 相对标准偏差(n=5)分别为 2.2%和 1.3%。结论 本方法简便、灵敏、准确, 可用于甘蔗中 3-硝基丙酸的测定。     

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定大米、玉米、辣椒中的橘霉素

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定农产品中橘霉素的方法。试样经甲醇-水提取,稀释、过滤后通过含有橘霉素特异性抗体的免疫亲和柱净化,洗脱液用C18色谱柱、乙腈-三氟乙酸溶液(60:40,V/V)分离,荧光检测器测定(激发波长331nm,发射波长500nm),外标法定量。结果表明：色谱峰面积与橘霉素含量之间有良好的线性关系,方法的检出限为10μg/kg,定量限为30μg/kg,加标回收率为61%～96.6%,相对标准偏差为3.72%～6.40%。该方法操作简便、准确,回收率高、精密度良好、重现性好,可用于大米、玉米、辣椒中橘霉素的测定。     

肉鸭表皮组织中脱氢枞酸残留的SPE-HPLC检测方法

建立经松香脱毛处理的肉鸭表皮组织中残留脱氢枞酸的固相萃取-高效液相色谱检测方法。肉鸭表皮组织中的脱氢枞酸用乙腈提取,经C18固相萃取小柱净化,以0.003 mol/L磷酸溶液-甲醇（13∶87,v/v）为流动相,采用反相C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱分离,以紫外检测器（检测波长212 nm）进行检测。结果表明：该方法检测脱氢枞酸线性范围为0.1～10 mg/L,检测限为0.10 μg/g,定量限为0.33 μg/g。在低中高3 个添加量范围内回收率为80.8%～91.8%。实际样品分析显示,肉鸭表皮中脱氢枞酸含量最高达10.06 μg/g。所建立的分析方法简便快捷、具有较好的灵敏度和可靠性,可用于肉鸭表皮组织中脱氢枞酸残留量的分析。     

高效毛细管电泳用于检测黄花菜中4 种活性物质

使用高效毛细管电泳法,对黄花菜中活性化合物芦荟大黄素、山柰酚、绿原酸和槲皮素进行检测。在最佳电泳条件为10 mmol/L Na2B4O7-H3BO3缓冲溶液、pH 9.15、紫外检测波长224 nm、30 kV的外加电压条件下进样5 s,4 种物质在6 min内实现了分离,4 种物质的线性范围分别为0.02～0.21、0.01～0.90、0.01～0.99、0.01～0.90 mg/mL,线性相关系数在0.997 6～0.999 6之间,检出限分别为2.45×10－5、1.41×10－5、1.78×10－5、8.63×10－6 mg/mL（RSN=3）,平均回收率在97.5%～101.2%之间,相对标准偏差不大于4.76%。实验结果表明该方法快速准确,适合用于黄花菜中活性物质的检测。