酸枣仁百合睡眠肽复合物改善失眠模型大鼠的睡眠

该实验在已经分离鉴定出牛乳源促睡眠肽的基础上,研究了酸枣仁、百合、睡眠肽3种物质复配制成的复合物对DL-4-氯苯基丙氨酸(PCPA)致失眠大鼠的睡眠干预效果及作用机制。构建PCPA致大鼠失眠模型,通过旷场试验(OFT)探究大鼠的行为学变化,探究复合物对失眠大鼠的促睡眠效果。通过检测大鼠脑部的神经递质及代谢产物研究复合物的作用途径,探究复合物的促睡眠机理。结果显示,复合物组大鼠在中央停留次数、中央区停留时间、运动总路程分别为11.00次、15.01 s和3309.71 cm,与失眠模型组有显著差异(p0.05),与空白组无显著差异(p0.05)。复合物组GABA(γ-氨基丁酸)、Glu(谷氨酸)、Gly(甘氨酸)、NE(去甲肾上腺素)、DA(多巴胺)和5-HT(五羟色胺)含量分别为94.96μg/m L、1508.42μg/L、74.59μg/L、37.36μg/L、1.76μg/L和1.61μg/L,复合物组与失眠模型组相比,大鼠下丘脑抑制性神经递质GABA含量显著上升(p0.05);兴奋性神经递质NE、DA含量显著下降(p0.05),表明复合物组可调节大鼠下丘脑中的神经递质。结果说明酸枣仁百合睡眠肽复合物能改善失眠大鼠行为学与睡眠。     

短乳杆菌和植物乳杆菌产γ-氨基丁酸及其关键基因的研究

为研究乳杆菌γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的产量以及其与谷氨酸脱羧酶系统关键基因表达的相关性,实验结合GABA产量、基因组学调查和谷氨酸脱羧酶(glutamate decarboxylase,GAD)系统基因的扩增结果,发现产GABA的菌株在短乳杆菌、植物乳杆菌中分布较多,这2个种属可作为产GABA菌株的主要筛选对象。通过qRT-PCR研究短乳杆菌和植物乳杆菌不同生长时期GAD相关基因转录情况,结果表明,短乳杆菌的gad B和gad C的表达量变化情况相似,且在对数后期或稳定前期达到高峰。文中的短乳杆菌高产GABA可能与其gad C和gad B的高表达有关。植物乳杆菌的gad B表达变化与短乳杆菌类似,但是与GABA的产量之间相关性较弱,可能存在其他因素的影响。该研究为产GABA菌株的筛选,乳杆菌中GAD基因的表达调控,GABA发酵工艺的优化提供了理论基础。     

高产γ-氨基丁酸的富锌乳酸菌培养基优化及GAD基因的克隆和序列分析

为了检测和提高乳酸菌γ- 氨基丁酸(GABA)产量,本研究采用纸层析预染法分析Lactobacillus brevis BS2最佳发酵产GABA 条件为：pH5.0,以葡萄糖为碳源,以大豆蛋白胨和牛肉膏为复合氮源,碳氮比为1:1,底物质量分数1%,GABA 产量可达到6.32g/L。采用CTAB 法提取该菌株基因组,并以此基因组为模板应用降落PCR扩增出1407bp 的谷氨酸脱羧酶基因gad,将gad 克隆到T 载体后经测序分析发现与L. brevis strain BH2 的gad 具有高度的同源性,同源性达98%,证明该菌株为高产GABA 的富锌短小乳酸杆菌,在工业应用方面具有很大潜力。     

珐菲亚协同戊巴比妥钠改善睡眠作用的研究

目的研究珐菲亚协同戊巴比妥钠改善睡眠作用及其作用机制。方法采用戊巴比妥钠所致小鼠睡眠实验方法,以小鼠睡眠潜伏期与睡眠时间为指标研究珐菲亚水提物改善睡眠作用的量效、时效关系,并通过检测小鼠皮质、海马和下丘脑中多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)、5-羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)的含量研究珐菲亚改善睡眠的作用机制。结果珐菲亚水提物协同戊巴比妥钠改善睡眠作用最佳给药时间为连续给药14 d,最佳给药剂量为16 kg生药/kg体重;其作用机制主要为减少DA、NE、GLU等中枢性神经递质在脑中的分泌、释放,促进NOS合成、分泌,提高NO在脑内的含量,并抑制5-羟色胺能神经元,降低5-HT分泌。结论珐菲亚水提物有明显的协同戊巴比妥钠改善睡眠作用,其作用机制与脑内神经递质释放有关。     

对羟基苯甲酸丙酯对果蝇超氧化物歧化酶(SOD)基因表达的影响

探讨对羟基苯甲酸丙酯(PP)对果蝇超氧化物歧化酶(SOD)基因表达的影响,用含不同质量浓度(0.00、0.20、0.50、1.00、2.00g/L)的PP培养基饲喂果蝇10d后,提取不同PP组果蝇总RNA,采用逆转录PCR方法在mRNA表达水平上研究SOD基因。结果表明:PP抑制了果蝇体内抗氧化酶Cu,Zn-SOD、Mn-SOD基因的表达,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);随着PP质量浓度的升高,雌果蝇体内Cu,Zn-SOD基因与雄果蝇体内Mn-SOD基因的表达量随之降低,而Mn-SOD基因在雌果蝇体内总体表达量提高。故PP的毒性作用可能与抑制抗氧化酶基因的表达有关,而这种作用因果蝇性别而异。     

发酵肉制品中细菌群落结构及其表皮葡萄球菌生物胺相关基因分析

该研究首先利用高通量测序技术对发酵肉制品中细菌群落结构进行分析;然后利用传统培养分离法及双层显色培养基对产生物胺的细菌进行分离筛选,并基于16S rRNA基因序列进行鉴定;最后利用聚合酶链式反应（PCR）对产生物胺细菌的赖氨酸脱羧酶、组氨酸脱羧酶和酪氨酸脱羧酶编码基因ldc、hdc、tdc进行扩增。结果表明,发酵肉制品中细菌主要为厚壁菌门（Firmicutes）的葡萄球菌属（Staphylococcus）。从发酵肉制品中共分离得到52株细菌,其中43株具有产生物胺能力,主要为表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）;产生物胺能力较强的7株表皮葡萄球菌中均含有ldc和hdc基因,部分菌株检测到tdc基因,为评估发酵食品生物胺的潜在危害和快速检测奠定基础。     

谷氨酸合成途径基因缺失对大肠杆菌发酵L-色氨酸的影响

降低谷氨酸的积累可提高L-色氨酸产量及糖酸转化率。敲除Escherichia coli TRTH中的谷氨酸脱氢酶及谷氨酸合成酶编码基因gdh A、glt B,构建TRTHA(TRTH,Δgdh A)、TRTHB(TRTH,Δglt B),考察gdh A、glt B缺失对L-色氨酸发酵的影响。结果表明,gdh A及glt B缺失能有效降低谷氨酸的积累,但会降低细胞生长及色氨酸合成;培养基中谷氨酸的添加可恢复TRTHA及TRTHB的生长及色氨酸合成能力。在含1 g/L谷氨酸培养基中,利用TRTHB发酵L-色氨酸,L-色氨酸产量(41.23 g/L)及糖酸转化率(15.45%)最高,较TRTH分别提高了10.92%和7.89%;谷氨酸生成量(5.72 g/L)及乙酸积累量(1.73 g/L)分别较TRTH降低了25.23%及提高了10.19%。TRTH和TRTHB代谢流分析结果表明,glt B缺失会降低谷氨酸合成代谢流并提高乙酸合成代谢流;TRTHB的色氨酸合成代谢流(11.4%)较TRTH提高了40.74%。     

紫甘薯提取物对高脂饲喂果蝇的抗氧化作用机制

目的:探究紫甘薯提取物(Purple sweet potato extract,PSPE)对高脂膳食饲喂果蝇寿命的影响及其作用机制。方法:2天龄雌性果蝇随机分为5组,正常组培养于普通培养基中,高脂组于添加10%猪油的高脂培养基中培养,实验组分别在添加PSPE 0.5、1.0、2.0 mg/m L的高脂培养基中培养,每3天更换新鲜培养基,统计果蝇存活率,并计算果蝇平均寿命及最高寿命。测定果蝇体内相关抗氧化酶活力及其基因表达水平。结果:PSPE可以明显延长果蝇的平均寿命及最高寿命。1.0mg/m L PSPE能够显著升高果蝇体内铜锌超氧化物歧化酶(Cu-Zn-superoxide dismutase,Cu-Zn-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力(P0.05),降低丙二醛(malonaldehyde,MDA)及蛋白质羰基(Protein carbonyls,PCO)含量(P0.01);0.5 mg/m L PSPE显著升高果蝇Cu-Zn-SOD、Mn-SOD以及CAT m RNA表达水平(P0.05),2.0 mg/m L剂量组显著升高果蝇Cu-Zn-SOD及Nrf2 m RNA(P0.05)表达水平。结论:PSPE能够有效增强果蝇体内的抗氧化能力,延长果蝇寿命,其作用机制可能与升高内源性抗氧化基因的表达有关。     

大川芎方提取物对皮下注射NTG偏头痛大鼠模型脑组织神经递质的影响研究

目的:探讨大川芎方对偏头痛脑神经递质5-羟色胺(5-HT)的含量影响。方法:皮下注射NTG致偏头痛大鼠模型,采用HPLC-荧光法测定5-HT含量。结果:大川芎方各剂量组均能明显升高偏头痛模型小鼠脑内5-HT的含量,与模型组比较有显著性差异(p<0.05~0.01)。结论:大川芎方能够通过调节脑组织中5-HT等神经递质的含量,而达到治疗偏头痛的效果。     

L-阿拉伯糖对便秘小鼠神经递质水平的影响

采用不同剂量组别的L-阿拉伯糖处理便秘模型小鼠。分别测定小鼠神经递质5-羟色胺(5-HT)、血浆P物质(SP)、胃动素(MTL)、一氧化氮(NO)的分泌量。中、高剂量组L-阿拉伯糖可显著促进5-HT、SP、MTL上升,下调NO分泌水平(P<0.05)。说明L-阿拉伯糖可通过调节神经递质水平达到防治便秘的作用。     

酒酒球菌中生物胺相关基因的检测

酒酒球菌在葡萄酒苹果酸-乳酸发酵过程中可通过脱羧基作用将氨基酸转化为生物胺.该研究采用PCR技术对27株酒酒球菌中与生物胺产生相关的基因-组氨酸脱羧酶基因、鸟氨酸脱羧酶基因、酪氨酸脱羧酶基因进行了检测,研究了这些菌株产生生物胺的特性.结果显示,所有菌株均不含有组氨酸脱羧酶基因、鸟氨酸脱羧酶基因、酪氨酸脱羧酶基因,不具有产生组胺、腐胺和酪胺的能力,因而具有较高的生物胺代谢安全性.     

酸枣仁茯苓粉、大豆肽粉对失眠模型小鼠的改善睡眠作用

目的:研究酸枣仁茯苓粉和大豆肽粉对对氯苯丙氨酸(PCPA)诱导的失眠模型小鼠的睡眠改善作用。方法:180只SPF级雄性BALB/c小鼠,先选取90只随机分为6组(正常对照组,模型对照组,酸枣仁茯苓粉低、中、高剂量组,大豆肽粉组),进行戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠实验,另选90只随机分为6组(分组同上),进行旷场实验并测定下丘脑5-羟色胺(5-HT)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、去甲肾上腺素(NE)以及海马中的γ-氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)的含量。正常对照组和模型对照组均灌胃无菌水;酸枣仁茯苓粉低、中、高剂量组分别灌胃0.67、1.33、4.00 g/kg BW的受试物;大豆肽粉组灌胃1.15 g/kg BW的受试物,小鼠的灌胃体积均为20 mL/kg BW。睡眠实验共计灌胃36 d,矿场实验共计灌胃37 d。在灌胃的第29和30 d时,除正常对照组外,其余小鼠通过腹腔注射PCPA(350 mg/kg BW)诱导失眠模型,之后两批动物分别再继续灌胃6、7 d。结果:与模型对照组相比酸枣仁茯苓粉能显著缩短戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期,延长睡眠时间,降低失眠模型小鼠自主活动能力,包括...     

西洋参水提物改善睡眠功能的研究

目的研究不同剂量西洋参水提物对小鼠睡眠功能的影响。方法根据改善睡眠功能评价方法,分别通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验判定西洋参水提物高、中、低剂量组(133.3、66.7、33.3 mg/kg·BW相当于人体剂量的20、10、5倍)是否具有改善小鼠睡眠的功能,并通过酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)测定小鼠脑干中5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)的含量。结果西洋参水提物各剂量组均无直接睡眠作用;与空白对照相比,西洋参水提物中、高剂量组能显著延长小鼠睡眠时间(P<0.05),提高小鼠的入睡率(P<0.05),且西洋参水提物高剂量组能显著缩短小鼠巴比妥钠睡眠潜伏期,并能显著提高小鼠脑干中5-HT含量(P<0.05)。结论西洋参具有改善小鼠睡眠的作用,这可能与其提高小鼠脑干中5-HT含量有关。     

Circadian rhythms and reproduction

There is a growing recognition that the circadian timing system, in particular recently discovered clock genes, plays a major role in a wide range of physiological systems. Microarray studies, for example, have shown that the expression of hundreds of genes changes many fold in the suprachiasmatic nucleus, liver heart and kidney. In this review, we discuss the role of circadian rhythmicity in the control of reproductive function in animals and humans. Circadian rhythms and clock genes appear to be involved in optimal reproductive performance, but there are sufficient redundancies in their function that many of the knockout mice produced do not show overt reproductive failure. Furthermore, important strain differences have emerged from the studies especially between the various Clock (Circadian Locomotor Output Cycle Kaput) mutant strains. Nevertheless, there is emerging evidence that the primary clock genes, Clock and Bmal1 (Brain and Muscle ARNT-like protein 1, also known as Mop3), strongly influence reproductive competency. The extent to which the circadian timing system affects human reproductive performance is not known, in part, because many of the appropriate studies have not been done. With the role of Clock and Bmal1 in fertility becoming clearer, it may be time to pursue the effect of polymorphisms in these genes in relation to the various types of infertility in humans.     

茯苓不同溶剂提取物改善小鼠睡眠作用的比较

比较茯苓不同溶剂提取物改善小鼠的睡眠作用。通过直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验研究茯苓不同溶剂提取物改善小鼠的睡眠作用,通过测定小鼠脑组织中5-HT、GABA和DA含量变化探讨茯苓不同溶剂提取物改善小鼠睡眠作用机制。结果显示,与空白对照组相比,水提物高剂量组(112.7 mg/kg)效果最佳(p0.05),其后是醇提物高剂量组(100.8 mg/kg)、多糖高剂量组(15.6 mg/kg)、水提物低剂量组(56.4 mg/kg)、醇提物低剂量组(50.4mg/kg),而多糖低剂量组(7.8 mg/kg)效果不明显(p0.05),其中,水提物高剂量组小鼠睡眠时间由1829.67 s显著延长至2979.83 s,睡眠发生率由10%显著提高至60%,睡眠潜伏期由2033.50 s显著缩短至1486.25 s;且茯苓不同溶剂提取物改善小鼠睡眠的效果与其调节小鼠脑组织中GABA和5-HT含量升高及DA含量下降的趋势相一致,其中,水提物高剂量组5-HT含量升至26.96 pg/mg,GABA含量升至817.40 pg/mg,DA含量降至3.41 pg/mg。本研究结果显示水提物高剂量组改善睡眠效果最佳,其作用机制与调节小鼠脑中GABA、5-HT和DA含量有关。     

串联表达NAD激酶和谷氨酸脱氢酶基因对L-谷氨酸产量的影响

由ppnk和gdh编码的NAD激酶和谷氨酸脱氢酶是L-谷氨酸合成途径中的两个重要酶。以谷氨酸生产菌CN1021基因组为模板PCR扩增ppnk和gdh基因并转化至该菌中,检测上述两个基因单独表达和串联表达对L-谷氨酸产量的影响。结果表明,当两个基因单独过表达时,其酶活性分别提高2.4和2.1倍,L-谷氨酸产量分别提高7.9%和1.4%。当将两个基因串联表达时,其酶活性分别提高2.0和1.5倍,L-谷氨酸的产量却提高了13.2%。说明过表达ppnk和gdh能够有效提高L-谷氨酸产量,且具有协同作用。     

Cloning and sequencing of the histidine decarboxylase gene from Photobacterium phosphoreum and its functional expression in Escherichia coli

The major causative agent of scombroid poisoning is histamine formed by bacterial decarboxylation of histidine. We reported previously that histamine was exclusively formed by the psychrotrophic halophilic bacteria Photobacterium phosphoreum in scombroid fish during storage at or below 10 degrees C. Moreover, histamine-forming ability was affected by two histidine decarboxylases (HDCs): constitutive and inducible enzymes. In this study, the gene encoding P. phosphoreum HDC was cloned into Escherichia coli and sequenced. A sequence analysis of the DNA corresponding to the hdc gene revealed an open reading frame of 1,140 bp coding for a pyridoxal-5'-phosphate-dependent HDC of 380 amino acid residues with a predicted molecular mass of 42.6 kDa. The HDC amino acid sequences formed a phylogenetic clade with strong bootstrap support and revealed high sequence similarities among the P. phosphoreum isolate and species of the family Enterobacteriaceae and a separate phylogenetic branch with the lowest sequence similarity between the isolate and the taxonomically closer Listonella anguillarum. The T7 promoter was used to overexpress the hdc gene in E. coli cells. The recombinant clone, E. coli BL21(DE3), displayed significant levels of HDC activity. The recombinant hdc gene was suggested to code the inducible HDC; therefore, the optimum reaction conditions of the recombinant HDC were similar to those of the inducible HDC in the P. phosphoreum isolate. In addition, a putative catabolite-repressor protein binding site, amino acid permease gene, and histidine-tRNA synthetase gene were found in flanking regions of the hdc gene.     

Analysis of a 30 kbp plasmid encoding histidine decarboxylase gene in Tetragenococcus halophilus isolated from fish sauce

In order to analyze the genes related to the histamine production, a strain of histamine producing halophilic bacteria, referred to as strain H, was isolated using enrichment culture and dilution-to-extinction methods with histidine broth inoculated from the fish sauce mashes. The two Japanese fish sauce mashes used, accumulate over 1000 mg/l of histamine. Phenotypic and 16 S rRNA gene sequence analyses identified strain H as Tetragenococcus halophilus, the predominant histamine producing bacteria present during fish sauce fermentation. Genetic analyses (PCR and Southern blot) of the histamine producing strain confirmed that the strain harbored a 30 kbp plasmid (pHDC) encoding a single copy of the pyruvoyl dependent histidine decarboxylase gene (hdc). A comparison of hdcA that is a structural gene of histidine decarboxylase among strain H, Lactobacillus hilgardii 0006, L. sakei LTH2076, Oenococcus oeni 9204, T. halophilus and T. muriaticus JCM10006 (T) indicated >99% sequence similarity. The hdc gene cluster consisted of 4 ORFs, hdcP, hdcA, hdcB, and hdcRS, and were almost identical to that of L. hilgardii 0006 with 99% sequence similarity including the structural hdc spacer region. However, the approximately 500 bp regions upstream and downstream of the hdc gene were different between that of strain H and L. hilgardii 0006. The complete sequence of pHDC revealed 29,924 nucleotides including 28 ORFs, two pairs of IR (inverted repeat), similar sequence of plasmid conjugative elements, and a theta-type replicon. These results suggested that hdc could be encoded on transformable elements among lactic acid bacteria.     

灵芝子实体不同提取物对小鼠睡眠改善作用的比较

目的:观察灵芝子实体水提物、醇提物和多糖对睡眠的改善作用并初步探讨作用机制。方法:将ICR小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组（罗通定片,15 mg/kg）、灵芝子实体水提物高剂量组（GLW-H,154.2 mg/kg）和低剂量组（GLW-L,77.1 mg/kg）、灵芝子实体醇提物高剂量组（GLE-H,125.4 mg/kg）和低剂量组（GLE-L,62.7 mg/kg）及灵芝子实体多糖高剂量组（GLP-H,31.8 mg/kg）和低剂量组（GLP-L,15.9 mg/kg）,连续灌胃30 d。末次灌胃后分别进行直接睡眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验,并测定小鼠脑内γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）和多巴胺（Dopamine,DA）水平。结果:灵芝子实体水提物、醇提物和多糖对小鼠体重、脏器指数均无影响,各实验组小鼠给药60 min内均无出现直接睡眠现象。与正常对照组比较,GLW-H、GLE-H、GLE-L、GLP-H组均能显著延长戊巴比妥钠睡眠时间（P<0.05）,以及缩短巴比妥钠睡眠潜伏期（P<0.05）,小鼠脑内GABA、5-HT含量上升（P<0.05）,DA含量变化不显著（P>0.05）。GLE-H组较正常对照组组能显著增加戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验小鼠睡眠率（P<0.05）。结论:灵芝子实体水提物、醇提物、多糖对小鼠均具有改善睡眠作用,在相同生药剂量下总体趋势为:灵芝子实体醇提物>灵芝子实体水提物>灵芝子实体多糖,其改善睡眠作用可能与上调小鼠脑内GABA、5-HT含量有关。