藜麦蛋白肽的酶解制备及体外降血脂与降尿酸活性研究

为研究藜麦蛋白降血脂肽的最佳酶解工艺条件和降尿酸活性,本研究以藜麦为原料提取蛋白,采用胰脂肪酶抑制率为活性指标,通过单因素实验和响应面分析法优化降血脂肽的制备工艺,并对藜麦蛋白肽的胰脂肪酶抑制活性、牛磺胆酸钠结合活性、胆固醇酯酶抑制活性、黄嘌呤氧化酶抑制活性和氨基酸组成进行分析表征。结果表明,藜麦降血脂肽的最优酶解条件为pH1.6、酶解温度42.9℃、底物浓度3.03%、酶解时间1 h和酶底比0.2%,所得酶解液的胰脂肪酶抑制率理论值为90.43%,实际值为90.93%±0.10%。该条件下制备的最优酶解物表现出优异的体外降血脂效果,其胰脂肪酶抑制率和胆固醇酯酶抑制率的IC₅₀分别为7.49μg/mL和4.73 mg/mL,牛磺胆酸钠结合率的EC₅₀为0.53 mg/mL。此外,最优酶解物显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制效果(IC₅₀=5.97 mg/mL),表明其具有体外降尿酸的作用。氨基酸分析表明,藜麦蛋白肽的必需氨基酸含量丰富(34.23%),并且疏水性氨基酸和酸性氨基酸百分含量分别为34.11%和31.66%。藜麦蛋...     

补骨脂乙醇提取物活性成分与抗氧化及胆酸盐结合能力的关联性分析

目的:在“成分-功效”关联模式下,探究补骨脂四种不同浓度乙醇提取物主要活性成分含量、抗氧化及胆酸盐结合能力差异。方法:以补骨脂为原料,采用无水乙醇、75%乙醇、50%乙醇、水进行提取,比较其总黄酮和总多酚含量,并分别通过3种抗氧化体系与胆酸盐结合能力进行体外抗氧化和降脂活性评价,并进行相关性分析。结果:无水乙醇提取物总黄酮含量（50.317±0.018 mg/g）和总多酚含量（3.860±0.045 mg/g）最高。补骨脂50%乙醇提取物对ABTS＋·和DPPH·清除能力最强,IC₅₀值分别为0.76和1.63 mg/mL,无水乙醇提取物还原能力最强,A_0.5值为2.63 mg/mL。补骨脂水提物对胆酸钠的结合能力最强,IC₅₀值为0.67 mg/mL,而50%乙醇提取物对牛磺胆酸钠和甘胺胆酸钠结合能力最强,IC₅₀值分别为1.26和0.41 mg/mL。相关性结果表明,补骨脂不同浓度乙醇提取物中总黄酮含量与DPPH·清除率、牛磺胆酸钠结合率呈显著正相关性（P<0.05）,总黄酮、总多酚含量与还原能力均呈极显著性正相关关系（P<0.01）,而总多酚含量与胆酸钠结合率呈显著性负相关性（P<0.05）。结论:补骨脂50%乙醇提取物活性含量较高,抗氧化及结合胆酸盐能力最强,可以作为潜在的天然抗氧化及降脂活性物质的重要来源。     

桑树桑黄总三萜提取工艺优化及其降血脂、抗氧化活性研究

选用超声波法提取桑树桑黄子实体中的三萜类化合物,在单因素试验的基础上采用响应面法优选最佳方案,并对其体外降血脂和抗氧化活性进行了测定。结果表明,超声波法提取桑树桑黄总三萜的最优条件为:提取时间49 min、乙醇浓度为80%、提取温度为61 ℃,料液比为1:22（g/mL）,总三萜得率可达12.32% ± 0.17%。质量浓度为80 mg/mL的总三萜体外结合甘氨胆酸钠、牛磺胆酸钠、胆酸钠的能力为同剂量考来烯胺的50.93%、52.14%和43.06%,说明其具有较好的体外降血脂活性。总三萜具有较好的还原能力,并能有效清除DPPH和ABTS自由基,其IC₅₀值分别为0.304和0.520 mg/mL,表明其具有较好的体外抗氧化活性。     

刺玫果水层萃取物活性成分及其体外活性研究

采用紫外分光光度法,测定刺玫果水层萃取物中总黄酮、多酚、原花青素及花青素的含量,探究刺玫果水层萃取物的多种体外活性及其DPPH自由基清除能力的稳定性。结果表明,刺玫果水层萃取物对DPPH自由基、亚硝酸盐清除率的IC₅₀分别为0.005、0.155 mg/mL,对α-葡萄糖苷酶、酪氨酸酶、脲酶抑制率的IC₅₀分别为0.130、5.955、1.568 mg/mL,对牛磺胆酸钠、胆酸钠结合率的IC₅₀分别为2.155、2.216 mg/mL;刺玫果水层萃取物对DPPH自由基的清除率在pH10和温度为100 ℃的条件下明显下降,紫外光照射条件下清除率略微降低,其他条件下较为稳定。研究结果表明,刺玫果水层萃取物具有众多生理活性,为刺玫果的开发利用提供了数据基础。     

多肽类ACE抑制剂的设计合成及生物活性

本研究以血管紧张素I转化酶（angiotensin converting enzyme, ACE）抑制肽PHP1和PHP2为研究母肽,通过替换氨基酸残基改变目标多肽的疏水性、带电性等因素,利用生物信息学工具评估多肽潜在的生物活性,设计了19个多肽类似物。采用多肽固相合成法合成目的多肽类似物,并进行体外生物活性检测。结果显示多肽类似物均具有较高的ACE抑制活性,其中,PHP1A-6（IC₅₀=3.87 μmol/L）、PHP2A-3（IC₅₀=3.33 μmol/L）、PHP2A-4（IC₅₀=2.86 μmol/L）和PHP2A-7（IC₅₀=4.58 μmol/L）的ACE抑制活性最高,较母肽有显著提高（P<0.05）,PHP1A-3、PHP1A-4、PHP1A-7、PHP2A-1和PHP2A-10具有同母肽相当的抑制活性,IC₅₀<10 μmol/L。绝大部分多肽类似物的α-葡萄糖苷酶抑制活性与母肽相比均有明显提高,PHP1A-3（IC₅₀=3.09 μmol/L）、PHP1A-7（IC₅₀=9.51 μmol/L）、PHP2A-6（IC₅₀=5.58 μmol/L）、PHP2A-11（IC₅₀=2.35 μmol/L）和PHP2A-12（IC₅₀=3.98 μmol/L）的活性最高。其中,PHP1A-3和PHP1A-7具备较强的ACE抑制和α-葡萄糖苷酶抑制双重活性。含Cys的多肽类似物在1 mg/mL浓度下,ABTS + · 清除率均在85%以上,具备潜在的抗氧化活性。分子对接研究了ACE抑制肽与ACE的构效关系,表明抑制肽可以与ACE的氨基酸残基产生多个稳定的氢键、疏水相互作用、π-π堆积及盐桥,增加了对ACE的抑制作用。     

富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的酶解工艺优化及活性研究

以富硒辣木叶为原料提取富硒辣木叶蛋白,通过单因素实验和响应面优化富硒辣木叶蛋白血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽的制备工艺,并对最优酶解物的ACE抑制活性、氨基酸组成和硒含量进行分析表征。结果表明,富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽的最佳酶解条件为时间3 h,pH7.5、酶底比0.23%、底物浓度5.97%、温度39.2 ℃。该条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制活性较强（IC₅₀=0.522 mg/mL）,富含必需氨基酸（24.05%）和疏水性氨基酸（20.6%）,其硒含量是辣木叶原料中硒含量的1.86倍。富硒辣木叶蛋白ACE抑制肽具有功能因子和天然食物的双重特性,此研究可为降血压药物及相关功能性食品的开发提供理论依据。     

黄粉虫酶解产物的制备及活性研究

为获得具有体外抗氧化和降血脂活性的黄粉虫酶解产物，文章以黄粉虫脱脂粉为原料，利用响应面分析法优化酶解工艺，并对其活性组成和体外活性进行研究。结果表明，在温度60℃、液料比30 mL/g、加酶量4800 U/g、pH10、酶解3 h条件下，酶解产物DPPH自由基消除率最高。该酶解产物中含有蛋白类物质738.17 mg/g、多糖59.42 mg/g、还原糖31.01 mg/mL、黄酮6.93 mg/g。酶解产物浓度为8 mg/mL时，对DPPH自由基、超氧阴离子、羟基自由基消除率最高，分别为76.53%、22.08%和48.73%;IC₅₀值分别为2.13、27.50 mg/mL和9.61 mg/mL，对甘氨胆酸钠结合量最大为0.055μmol/mg。研究表明黄粉虫酶解产物具有一定的体外抗氧化活性和结合甘氨胆酸钠能力，为黄粉虫酶解物在降血脂方面的应用提供了理论依据。     

蜂王浆蛋白肽的制备及其降血糖和抗氧化活性研究

目的:研究蜂王浆蛋白的最佳酶解工艺条件,并分析所制备酶解肽的氨基酸组成、分子量分布、降血糖及抗氧化活性。方法:以蜂王浆为原料,采用碱提酸沉法提取蜂王浆粗蛋白,以α-葡萄糖苷酶抑制率和ABTS自由基清除率为评价指标,筛选出酶解蜂王浆蛋白制备降血糖及抗氧化活性肽的最佳蛋白酶,并研究蜂王浆酶解肽的体外降血糖和抗氧化活性。结果:蜂王浆降血糖及抗氧化活性肽的最佳制备工艺为:以酸性蛋白酶为酶制剂,酶添加量为6000 U/g,酶解温度为43℃,酶解pH为4.0,酶解时间为4 h,料液比为1:10。在上述条件下,制备的蜂王浆蛋白肽的氨基酸总量为82.19%,相对分子质量集中在1000 Da以下。蜂王浆蛋白肽对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度(IC₅₀)为6.94 mg/mL,清除ABTS自由基、羟自由基、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基及超氧阴离子自由基的半抑制浓度(IC₅₀)分别为14.18、0.45、11.02和18.38 mg/mL。试验结果表明,蜂王浆蛋白肽具有一定的降血糖和抗氧化活性,可为蜂王浆高值化利用及活性肽产品开发提供理论依据。     

雨生红球藻蛋白酶解产物的制备和抗氧化活性评价

为了高值化利用藻渣,本文展开雨生红球藻藻渣制备抗氧化蛋白酶解物的研究。采用单因素和响应面优化试验,研究了主要反应条件（底物浓度、加酶量、温度、pH和时间）对酶解产物ABTS自由基清除率和水解度的影响,并对最优酶解物进行抗氧化活性评价及氨基酸分析。结果表明,雨生红球藻蛋白的最佳酶解条件为:底物浓度9%（w:v）、加酶量0.7%（w:w）、温度40 ℃、pH11.5和时间3 h。最优酶解物的ABTS自由基清除率IC₅₀为481.574 μg/mL,FRAP能力为19.641 μmol FeSO₄·7H₂O/g（浓度为1000 μg/mL）,显著优于蛋白非酶解物。抗氧化酶解物的氨基酸种类丰富,必需氨基酸含量达34.4%,营养价值高,且含较多与抗氧化密切关联的疏水性氨基酸。本研究为雨生红球藻高附加值应用提供了参考。     

英红九号茶蛋白降尿酸肽的酶解制备及不同分子量组分的活性对比

以英红九号红茶渣为原料,通过碱提酸沉提取茶叶蛋白,以黄嘌呤氧化酶抑制率为指标,采用单因素和响应面实验优化酶解制备降尿酸肽,对其氨基酸组成进行分析,并对最优酶解物进行超滤分离和活性评价。结果表明,在底物浓度2%（m/V）、加酶量0.3%（m/V）、温度39 ℃、pH值7.5和酶解时间3.4 h条件下,得到的降尿酸肽的黄嘌呤氧化酶抑制率为85.42%。氨基酸分析表明,降尿酸肽中必需氨基酸含量丰富（38.49%）,高比例的疏水性氨基酸（48.00%）和碱性氨基酸（13.67%）对黄嘌呤氧化酶抑制活性有重要作用。酶解物经过超滤分离后,与原酶解物的活性（IC50 0.72 mg/mL）比较,<3 ku组分的黄嘌呤氧化酶抑制活性显著提升（IC50 0.41 mg/mL）。该研究可为茶叶蛋白的高值化利用提供参考,为茶叶源新型降尿酸健康食品的开发提供了理论依据。     

铜藻主要化学成分分析及抗氧化活性评价

对江苏海域"金潮"爆发产生的铜藻进行多成分测定以评价该铜藻的品质和优势成分,同时对铜藻可溶性多糖、褐藻多酚、岩藻黄质三种抗氧化活性成分所在的不同乙醇提取部位进行抗氧化活性研究。采用常规理化方法对铜藻与其他六种常见褐藻进行常规营养成分及其他活性成分对比分析;对铜藻的不同乙醇提取物进行DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力的抗氧化活性初步研究。结果显示,铜藻与其他褐藻中各营养成分含量差异较大。与其他褐藻相比,铜藻中蛋白质品质较佳且蛋白氨基酸组成符合FAO/WTO推荐的理想蛋白氨基酸组成模式;铜藻中岩藻黄质含量显著(P<0.05)高于其他六种褐藻,为优势成分;铜藻中饱和脂肪酸略高于不饱和脂肪酸,饱和脂肪酸以棕榈酸相对含量最高,单不饱和脂肪酸以油酸相对含量最高,多不饱和脂肪酸以花生四烯酸相对含量最高;10种微量元素中Zn、Fe较高;根据自由基的半数清除率(IC₅₀值)判断各提取物抗氧化能力大小,DPPH体系中抗氧化大小为:30%乙醇提取物(IC₅₀=0.097 mg/mL)>50%乙醇提取物(IC₅₀=0.102 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.136 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.160 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.162 mg/mL);在ABTS体系中抗氧化大小为30%乙醇提取物(IC₅₀=0.028 mg/mL) > 50%乙醇提取物(IC₅₀=0.033 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.044 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.055 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.066 mg/mL);可知以30%乙醇提取物具有较好的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力,且与可溶性多糖成分相关性最高,呈负相关。综上,"金潮"灾害所产生的大量铜藻资源蛋白质品质较佳,铜藻可作为岩藻黄质开发来源,且将其作抗氧化功能产品开发时以30%乙醇提取物最佳。     

黑果腺肋花楸叶黄酮的提取工艺优化及抗氧化、结合胆酸盐能力分析

以超声波辅助法提取黑果腺肋花楸叶黄酮(Flavonoids from Aronia melanocarpas’ leaves,AMF),探究其体外抗氧化活性和胆酸盐结合能力。以黄酮得率为指标,在单因素(液料比、乙醇浓度、超声功率、超声时间)的基础上,结合响应面法,优化AMF的提取工艺,并以DPPH·、ABTS⁺·清除率及总还原能力为指标,考察AMF的抗氧化活性;以胆酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨胆酸钠为结合对象,考察AMF的胆酸盐结合能力。结果表明,AMF的最优提取工艺为：液料比61:1 mL/g、乙醇浓度60%、超声功率100 W、超声时间59 min,黄酮得率为24.22%±0.29%,与模型预测值(24.27%)接近。最优工艺制备的AMF对DPPH·、ABTS⁺·清除率较强,其IC₅₀值分别为0.32、0.16 mg/mL;质量浓度为0.5 mg/mL时,总还原能力较好,其吸光值为1.09;AMF对胆酸钠、牛黄胆酸钠、甘氨胆酸钠具有较强结合能力,结合率的IC₅₀值分别为0.76、3.01、6.49 m...     

超声预处理对金枪鱼皮胶原ACE抑制肽消化稳定性的影响及消化产物的分离纯化、鉴定

以金枪鱼皮为原料,超声预处理后酶解制得高血管紧张素转化酶(Angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽,研究ACE抑制肽的模拟胃肠道消化稳定性,并对消化产物进行分离纯化和鉴定。结果表明,超声处理后不同酶解时间酶解液的ACE抑制活性均有所提高;超声预处理20、40 min后,酶解5 min酶解液的消化产物的ACE抑制活性显著高于其他组(p<0.05)。采用葡聚糖凝胶G-15对E5U20和E5U40进行分离纯化,两组酶解液均可分离为3个组分,其中E5U20组组分2的IC₅₀值最小为0.393 mg/mL。采用半制备高效液相色谱对E5U20组分2进行分离纯化,得到8个组分,其中峰3的IC₅₀值最小为0.102 mg/mL。通过质谱法对峰3进行鉴定,测得峰3序列为GPSGPPGP,来源于α1肽链第842~849的位置,符合高ACE抑制活性的多肽构效特点,目前尚无该氨基酸序列的报道。     

酶法水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽工艺的优化

以牦牛皮为原料,用碱性蛋白酶水解牦牛皮蛋白制备抗氧化肽。以水解度和牦牛皮蛋白水解物对DPPH自由基清除率的IC₅₀值为评价指标,在单因素实验的基础上,结合响应面（Box-Behnken）试验设计筛选出牦牛皮抗氧化肽的最佳制备工艺。结果表明,最佳制备工艺为:水解温度51 ℃,酶用量10890 U/g,水解时间10.6 h,pH8.5,底物浓度5%,此时水解度为41.39%±0.69%,牦牛皮抗氧化肽清除DPPH·、ABTS+·、·OH的IC₅₀值分别为2.884、2.110、2.523 mg/mL。综上,该制备工艺下的牦牛皮抗氧化肽对自由基有良好的清除能力,且有较强的还原能力,说明牦牛皮抗氧化肽有望作为天然抗氧化剂得到开发利用。     

提取技术对粗毛纤孔菌三萜类化合物制备及体外降血脂作用的影响

为研究不同提取技术对粗毛纤孔菌三萜类化合物（triterpenoids from Inonotus hispidus,IHT）制备及体外降血脂作用的影响,选用粗毛纤孔菌菌丝体为原料,研究了高剪切技术、超声波技术、双水相技术、半仿生技术及溶剂回流技术对IHT提取率和对胆酸盐结合能力的影响,并采用红外光谱技术对IHT的结构进行初步分析。实验结果表明：5?种提取技术对IHT提取效果及降血脂功能影响均存在显著性差异（P＜0.05）,其中高剪切技术的IHT提取率最高,为（3.33±0.02）%,是溶剂回流技术（（1.26±0.05）%）的2.64?倍。高剪切技术提取的IHT对胆酸盐的结合能力最显著（P＜0.05）,其降血脂活性与质量浓度呈剂量效应关系,且质量浓度在40?mg/mL时,与甘氨胆酸钠的结合能力为（1.01±0.03）μmol/100?mg,与胆酸钠的结合能力为（0.47±0.04）μmol/100?mg,与牛磺胆酸钠的结合能力为（1.31±0.09）μmol/100?mg,相对辛伐他汀的吸附率分别为36.53%、27.92%、46.33%。红外光谱分析显示,高剪切技术提取的IHT符合三萜类物质的特征结构,且特征吸收峰最强。本研究结果为IHT提取技术的选择及降血脂药物的开发利用提供理论依据。?     

食叶草的营养活性成分含量及生物活性分析

为探究食叶草的开发应用价值,测定了食叶草中的主要营养成分和活性成分含量,并通过检测食叶草提取物对自由基的清除能力、还原力和α-葡萄糖苷酶活性抑制能力,探究食叶草的抗氧化和降血糖活性。结果表明:食叶草中的总蛋白含量高达34.70 mg/100 mg (干重),必需氨基酸含量和药用氨基酸含量分别占总氨基酸含量的45%和65%,氨基酸比值系数分(SRC)超过68,表明食叶草具有较高的营养保健价值;总酚含量、总黄酮含量和超氧化物歧化酶比活力分别为11.35 mg GAE/g (干重)、3.56 mg RE/g (干重)和15.24±3.40 U/mg pro;苹果酸和草酸是食叶草中最主要的有机酸(～89.24%);食叶草提取物对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基和2,2-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)自由基的半数抑制浓度(IC₅₀)分别为0.465 mg/mL和0.066 mg/mL,当还原力(吸光值)达到0.5时的提取物浓度(IC_0.5)为0.528 mg/mL,且α-葡萄糖苷酶活性抑制效果较好,体现出良好的抗氧化...