马氏珍珠贝软体酶法制备降糖肽的工艺优化及肽段分析

目的:以二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率和葡萄糖消耗量为指标优化马氏珍珠贝软体的酶解工艺，并对酶法制备的降糖肽进行分析。方法:以人肝癌细胞（HepG-2）胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量、体外二肽基肽酶-IV（dipeptidyl peptidase，DPP-IV）抑制率为评价指标，比较筛选了酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶对马氏珍珠贝软体的酶解效果，通过单因素及正交试验分析酶解温度、料液比、加酶量、酶解时间等因素对酶解物降糖活性的影响，确定最佳酶解工艺，以液相串联质谱（Nano LC-MS/MS）分析酶解物中肽类物质组成。结果:酸性蛋白酶酶解的产物葡萄糖消耗量和DPP-IV抑制率优于其他种类蛋白酶，马氏珍珠贝软体制备降糖肽的最佳酶解条件为:45 ℃、3 h、料液比1:3.5（w:w）、加酶量1000 U/g，在此条件下的葡萄糖消耗量为37.53%、DPP-IV抑制率为74.21%。最佳工艺制备的马氏珍珠贝软体酶解物中93.88%的肽段分子量低于2000 Da，22.63%的肽段为疏水性肽段，74.92%的肽段N端至少有含有一个疏水性氨基酸。结论:本研究酶法制备的马氏珍珠贝软体降糖肽可通过抑制DPP-IV的活性及减少胰岛素抵抗发挥降糖作用，对功能食品的研发具有一定的指导意义。     

江苏东部沿海四种低值贝类软体中牛磺酸动态积累规律与适宜采收期研究

以采自江苏东部沿海的文蛤、青蛤、四角蛤蜊及菲律宾蛤仔四种低值贝类为样本,研究其软体中牛磺酸的动态变化规律,探讨这四种贝类的最适采收期。建立以邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生化结合HPLC-UV测定牛磺酸的方法,以Kromasil 50mm×2.1mm C18为分离柱,甲醇-0.05mol/L乙酸钠(p H6.0)23∶77为流动相,流速0.3m L/min洗脱,紫外检测波长为330nm。该方法可以准确测定四种贝类软体中牛磺酸的含量,且灵敏度高,重现性好。贝类的生长具有明显季节性,一般春夏季较秋冬季生长较快,尤其夏季水温为25~28℃时为快速生长期,此时,贝类软体中牛磺酸含量达到最高。菲律宾蛤仔牛磺酸含量最高在7月,约为42.79mg/g;而文蛤、青蛤、四角蛤蜊软体中牛磺酸含量最高在6月,分别约为27.48、16.59、15.00mg/g。若从产量和有效成分牛磺酸的含量变化上综合考虑,建议菲律宾蛤仔牛磺酸最佳采收期为7月,文蛤、青蛤、四角蛤蜊最佳采收期为6月。     

江苏产菲律宾蛤仔提取物的抗疲劳作用

研究了江苏产菲律宾蛤仔提取物(RE)对运动小鼠抗疲劳能力的影响。将小鼠随机分为6组,正常组、模型组、阳性组以及低、中、高3个剂量组。小鼠灌胃15 d后,采用小鼠游泳疲劳模型,观察各组小鼠负重游泳时间、不负重游泳后血清乳酸(LA)、尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)指标的差异。结果:高、中剂量组小鼠负重游泳时间明显长于模型组和低剂量组;与模型组相比,3个剂量组小鼠血清乳酸(p0.01)含量显著降低,且呈剂量依赖性;肌酸激酶(p0.01)、乳酸脱氢酶(p0.01)活力均下降,超氧化物歧化酶(p0.05)活力升高,尿素氮含量仅高剂量有显著性差异。结论:菲律宾蛤仔提取物能提高小鼠运动耐力,加速疲劳的消除。     

四角蛤蜊核苷类成分纯化工艺研究

采用大孔吸附树脂与阳离子交换树脂串联纯化四角蛤蜊醇沉上清液中核苷类成分,以核苷的纯度和回收率为指标,考察树脂的型号、上样浓度、水洗体积、洗脱剂浓度及流速对纯化效果的影响,以期得到最佳的纯化工艺。确定大孔吸附树脂的型号及最佳工艺为:SP207型,质量浓度250 mg/m L,p H值为5.0,水洗除杂体积是3 BV,洗脱液为体积分数5%乙醇。进一步通过离子交换树脂纯化,确定树脂型号及最佳纯化工艺为:001~*7阳离子交换树脂,质量浓度6.3 mg/m L,氨水∶乙醇(体积比3∶30)溶液洗脱,洗脱流速是3 BV/h。经两种树脂串联纯化后,四角蛤蜊醇沉上清液中核苷类成分的质量分数由1.80%提高至50.60%,总回收率为70.32%。工艺验证结果表明SP207大孔吸附树脂与001~*7阳离子交换树脂串联纯化核苷类成分的方法稳定可行,能够用于四角蛤蜊核苷类成分的分离纯化。     

铜藻中有害元素的脱除工艺优化及脱除前后砷形态的变化

为降低铜藻中有害元素铬、砷、镉、铅含量,对最佳脱除剂进行选择,通过单因素实验、正交试验优化脱除工艺,以及采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用技术分析脱除前后铜藻中砷形态的变化,并将优化后的工艺应用于羊栖菜、马尾藻。结果表明,以1.5% EDTA-2Na作为脱除剂,在料液比为1:30 g/mL,时间为4 h,温度为30 ℃的工艺条件下,对铬的脱除率为71.34%;对总砷的脱除率为66.32%,其中对毒性较大的As3+、As5+脱除率分别为100%、91.43%;对镉的脱除率为87.40%;对铅的脱除率为87.64%,脱除后铅的含量低于GB 2762-2017《食品中污染物限量》的限量规定,脱除后铜藻中岩藻黄质损失率在可接受范围内。该工艺对羊栖菜中的有害元素铬、砷、镉、铅的脱除率分别为57.27%、66.00%、87.14%、88.88%;对马尾藻中有害元素铬、砷、镉、铅的脱除率分别为55.56%、56.89%、87.14%、96.44%。此工艺简单易操作,能脱除大部分毒性较大的无机砷,且具有一定的适用性,为工业上降低海藻中有害元素的含量提供思路。     

珍珠灵芝复配物美白功效与机理初步研究

为研究珍珠灵芝提取物复配在美白类化妆品中开发的优势,采用体外酪氨酸酶活性和小鼠B16黑色素瘤细胞模型实验,分别对黑灵芝提取物、珍珠提取物及其复配物的美白功效进行评价,测定三者对体外酪氨酸酶活性、B16细胞相对黑色素含量、酪氨酸酶(TYR)和酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP1)mRNA表达水平的影响。结果表明,1%黑灵芝提取物、2%珍珠提取物及二者组成的复配物均可显著抑制酪氨酸酶活性(P<0.05)、降低细胞内黑色素含量(P<0.05),其中复配物组对酪氨酸酶活性、细胞内黑色素生成抑制率分别达32.87%、68.27%,均优于单用组(P<0.05);此外,复配物组可显著下调TRP1 mRNA表达水平(P<0.05),而单用组无显著下调TRP1 mRNA表达水平的效果,提示复配物组较单用组有更好地抑制真黑色素生成的功效,具有开发成为化妆品功效添加剂加入美白化妆品的潜力。     

铜藻主要化学成分分析及抗氧化活性评价

对江苏海域"金潮"爆发产生的铜藻进行多成分测定以评价该铜藻的品质和优势成分,同时对铜藻可溶性多糖、褐藻多酚、岩藻黄质三种抗氧化活性成分所在的不同乙醇提取部位进行抗氧化活性研究。采用常规理化方法对铜藻与其他六种常见褐藻进行常规营养成分及其他活性成分对比分析;对铜藻的不同乙醇提取物进行DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力的抗氧化活性初步研究。结果显示,铜藻与其他褐藻中各营养成分含量差异较大。与其他褐藻相比,铜藻中蛋白质品质较佳且蛋白氨基酸组成符合FAO/WTO推荐的理想蛋白氨基酸组成模式;铜藻中岩藻黄质含量显著(P<0.05)高于其他六种褐藻,为优势成分;铜藻中饱和脂肪酸略高于不饱和脂肪酸,饱和脂肪酸以棕榈酸相对含量最高,单不饱和脂肪酸以油酸相对含量最高,多不饱和脂肪酸以花生四烯酸相对含量最高;10种微量元素中Zn、Fe较高;根据自由基的半数清除率(IC₅₀值)判断各提取物抗氧化能力大小,DPPH体系中抗氧化大小为:30%乙醇提取物(IC₅₀=0.097 mg/mL)>50%乙醇提取物(IC₅₀=0.102 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.136 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.160 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.162 mg/mL);在ABTS体系中抗氧化大小为30%乙醇提取物(IC₅₀=0.028 mg/mL) > 50%乙醇提取物(IC₅₀=0.033 mg/mL) > 70%乙醇提取物(IC₅₀=0.044 mg/mL) > 水提取物(IC₅₀=0.055 mg/mL) > 90%乙醇提取物(IC₅₀=0.066 mg/mL);可知以30%乙醇提取物具有较好的DPPH自由基和ABTS自由基清除能力,且与可溶性多糖成分相关性最高,呈负相关。综上,"金潮"灾害所产生的大量铜藻资源蛋白质品质较佳,铜藻可作为岩藻黄质开发来源,且将其作抗氧化功能产品开发时以30%乙醇提取物最佳。     

杂色蛤酶解物的降糖活性初步评价及其物质基础研究

目的:明确杂色蛤酶解肽对降糖活性相关指标的作用,研究其肽类成分组成。方法:利用酸性蛋白酶制备杂色蛤酶解物样品,通过60%乙醇沉淀得到上清部分,采用Sep-Pak C₁₈固相萃取小柱在不同浓度乙腈洗脱条件下对分离上清部分,以二肽基肽酶-IV(DDP-IV)体外抑制模型与人肝癌细胞(HepG-2)胰岛素抵抗模型筛选杂色蛤酶解物的最佳活性部分,采用Nano LC-MS/MS串联质谱对活性部分进行分析鉴定。结果:经10%乙腈洗脱部分具有最佳的抑制DPP-IV活性作用,可促进胰岛素抵抗细胞的葡萄糖摄取量,杂色蛤酶解物的10%乙腈洗脱部分中共鉴定114个多肽,其中83.3%为亲水性多肽,90.4%的肽分子量低于2000 Da,且N末端疏水性氨基酸较多。结论:杂色蛤酶解物中肽类成分可通过抑制DPP-IV的活性及减少胰岛素抵抗发挥降糖作用。     

不同海域浒苔品质差异评价

为系统地比较我国不同海域的浒苔原料品质,采用常规理化方法对浒苔中的膳食纤维、多糖、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、矿物元素、灰分、有害元素进行分析,并结合SPSS对各类成分进行差异性比较。结果表明,浒苔中功效成分和有害成分存在较大的海域差异,具有地域优势性。与其他海域相比,山东青岛浒苔中总膳食纤维、可溶性膳食纤维、水溶性多糖含量最高,分别为49.33%、22.03%、16.92%;江苏盐城浒苔中粗蛋白含量最高为38.70%;江苏南通浒苔中氨基酸组成最接近理想蛋白模式;山东青岛浒苔鲜味氨基酸含量最高,达90.53 g/kg;浙江宁波浒苔EPA相对含量最高,占总脂肪酸的1.19%;江苏南通浒苔中铁元素含量最高,达4967.41 mg/kg;江苏南通浒苔酸不溶性灰分含量最高,达5.66%;除汞外,各海域浒苔中砷、铅、镉、铬含量多超过藻类制品、保健食品最高允许限量,其中青岛浒苔各有害元素含量相对较低。该实验可为浒苔资源的进一步研究开发提供更加详尽的理论依据。