基于纳米材料构建免疫传感器快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B_1

以改性壳聚糖和纳米金复合物为电极修饰材料,包埋固定黄曲霉毒素B_1抗体制备信号放大型免疫传感器。以K_3[Fe(CN)_6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明,免疫响应电流与溶液中AFB_1的浓度在0.1~1.1 ng/m L范围内成线性关系,最低检测限为0.05 ng/m L(S/N=3);免疫传感器的特异性、稳定性和重现性较好。利用该法对花生、花生油等实际样品中的黄曲霉毒素B_1进行检测,回收率在87.8~98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒,可用于食品中黄曲霉毒素B_1的快速检测。     

纳米免疫传感器法快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B_1

以改性壳聚糖为固定化材料,包埋固定纳米金胶微粒及黄曲霉毒素B_1抗体制备信号放大型纳米免疫传感器,建立了免疫传感器测定黄曲霉毒素B_1的方法;优化了纳米免疫传感器的制备条件及检测参数;基于AFB_1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K_3[Fe(CN)_6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究了其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明免疫响应电流与底液中AFB_1的浓度在0.1~1.1 ng/g范围内成线性关系,其校正曲线方程为I_P=-4.927 4x+15.108(R~2=0.991 2),其最低检测限为0.05 ng/g(S/N=3);该免疫传感器的稳定性和重现性较好。利用该法对花生油、玉米油等实际样品中的AFB_1进行了检测,其回收率为在87.8~98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒法,用于粮油食品中黄曲霉毒素的快速检测是可行的。     

基于石墨烯/离子液体构建免疫传感器快速测定食品中黄曲霉毒素B1

采用壳聚糖、石墨烯和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极,包埋固定黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）抗体,构建了一种免疫传感器,用于快速测定食品中的AFB1。在pH值为7.0含1 mmol/LK3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,运用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器峰电流的降低值随溶液中AFB1质量浓度对数的增大而增大,且二者在0.1～8.1 ng/mL范围内呈线性关系,其检出限为0.04 ng/mL（RSN=3）。该免疫传感器的稳定性和重复性较好,利用该法对花生和玉米油样品中AFB1进行检测,回收率为94.73%～104.41%,检测结果与高效液相色谱法基本一致,用于食品中AFB1的快速检测是可行的。     

电化学免疫传感器法快速测定粮油食品中的苯并(a)芘

采用2.0 G聚酰胺-胺(PAMAM)、石墨烯(GS)和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合膜修饰玻碳电极(PAMAM/GS/IL/GCE),包埋固定多环芳烃抗体,构建了一种纳米免疫传感器,用于快速测定粮油食品中的苯并(a)芘(Ba P)。在p H为7.0含1mmol/L K3[Fe(CN)6]和0.1 mmol/L KCl的磷酸盐缓冲溶液中,基于多环芳烃抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究其免疫反应对传感器响应电流的影响。在优化实验条件下,免疫传感器的峰电流随溶液中Ba P浓度的增大而减小,且峰电流与Ba P浓度在0.1~100 ng/m L范围内呈线性关系,其检测限为0.03 ng/m L(S/N=3)。该免疫传感器的稳定性和重现性较好,利用该法对玉米油和菜籽油等样品中的苯并(a)芘进行检测,回收率在94.46%~103.36%,检测结果与HPLC法基本一致,用于粮油食品中苯并(a)芘的快速检测是可行的。     

基于多壁碳纳米管免疫传感器法快速测定食品中的莱克多巴胺

以改性壳聚糖包埋固定羧基化多壁碳纳米管和莱克多巴胺抗体,构建免疫传感器用于莱克多巴胺的检测。以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法表征传感器构建过程和差分脉冲伏安法探究莱克多巴胺抗体/抗原间免疫反应对电流的影响。结果表明,在优化条件下,免疫响应电流与溶液中莱克多巴胺质量浓度的立方根在0.05～4.05 ng/mL范围内呈线性关系,其线性方程为Ip=－4.524 4CRAC1/3＋14.259（R2= 0.990 4 ）,最低检测限为0.08 ng/mL（RSN=3）;所构建的免疫传感器的特异性、稳定性和重复性良好。该法对猪肉、羊肉等样品进行检测,其检测结果与国标方法高效液相色谱法一致,检测快捷方便,可用于食品中莱克多巴胺的快速检测。     

纳米免疫传感器法快速测定粮油食品中的黄曲霉毒素B1

摘要：本文以改性壳聚糖为固定化材料,包埋固定纳米金胶微粒及黄曲霉毒素B1抗体制备信号放大型纳米免疫传感器,建立了免疫传感器测定黄曲霉毒素B1的方法;优化了纳米免疫传感器的制备条件及检测参数;基于AFB1抗体与抗原之间的特异性免疫反应,以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法和差分脉冲伏安法研究了其免疫反应对传感器响应电流的影响,结果表明免疫响应电流与底液中AFB1的浓度在0.1～1.1 ng mL-1范围内成线性关系,其校正曲线方程为IP =-4.9274x +15.108（R 2= 0.9912）,其最低检测限为0.05 ng mL-1（S/N=3）;该免疫传感器的稳定性和重现性较好。利用该法对花生油、玉米油等实际样品中的AFB1进行了检测,其回收率为在87.8～98.2%,检测精确度优于ELISA试剂盒法,用于粮油食品中黄曲霉毒素的快速检测是可行的。     

石墨烯-壳聚糖复合材料修饰电极检测己烯雌酚

制备了石墨烯-壳聚糖复合材料修饰电极,采用循环伏安法研究复合材料对电极导电性能的影响,并利用己烯雌酚抗体与己烯雌酚之间的特异性反应,以K_3Fe(CN)_6为探针,采用差分脉冲伏安法进行食品中己烯雌酚残留量的检测研究。在优化条件下,ρ(己烯雌酚)在1~2 500μg/L内与电流差值呈线性关系,线性回归方程ΔI=25.036 8+0.003 42ρ(R=0.991 24),检出限为0.1μg/L。对猪肉、牛肉、鸭肉及奶粉样品进行加标检测,回收率93.2%~106.8%。     

基于纳米金-石墨烯-壳聚糖复合物修饰电极的免疫传感器检测己烯雌酚

研究在磷酸缓冲介质(PBS)中,一种检测己烯雌酚抗原的新型免标记电化学免疫传感器的制备及应用。首先将纳米金(AuNP)修饰在电极上,然后将石墨烯(Gr)-壳聚糖(CS)复合物饰于玻碳电极表面,通过循环伏安法对修饰的电极进行表征。以[Fe(CN)6]3-/4-为氧化-还原探针,基于己烯雌酚抗原抗体反应引起[Fe(CN)6]3-/4-探针的电流响应的变化,来实现对己烯雌酚抗原的检测。己烯雌酚抗原的质量浓度在0.5～1500.0ng/mL范围,与峰电流呈良好的线性关系,相关系数为0.985,检测限为0.1ng/mL。该传感器具有良好的重现性和稳定性,用于动物组织和奶粉样品的测定获得满意结果。     

纳米免疫传感器快速测定乳品中过敏原β-乳球蛋白

该研究以壳聚糖、石墨烯和纳米金为复合修饰材料固定化β-乳球蛋白抗体制备了纳米免疫传感器,建立了一种快速测定乳品中β-乳球蛋白（β-LG）过敏原的方法。用循环伏安法对该纳米免疫传感器进行了表征,以1.0 mmol/L的K3[Fe(CN)6]为探针,对试验条件进行了优化,当复合修饰液用量为5 μL,电解质pH值为7.0,抗体固载量为40 ng,孵育温度为37 ℃,孵育时间30 min时为最佳反应条件。该纳米免疫传感器免疫响应电流与β-LG质量浓度的对数在2.5~100 ng/mL之间具有良好的线性关系,其检出限为0.75 ng/mL,同时该纳米免疫传感器具有良好的稳定性、特异性与重现性。该纳米免疫传感器用于实际样品β-乳球蛋白的检测,其加标回收率位于88.59%~97.64%之间,回收率较好,检测结果比ELISA精度更高,因此该法可用于乳制品中β-乳球蛋白过敏原的快速、精确检测。     

基于PAMAM树枝状大分子纳米免疫传感器快速检验婴幼儿奶粉中的阪崎肠杆菌

以聚酰胺胺树状大分子材料结合还原性石墨烯纳米复合物为电活性修饰膜层,固定于玻碳电极表面,采用物理吸附法固定化辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体制备成纳米免疫传感器,建立一种快速检测婴幼儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的方法。优化的试验条件:以K3[Fe(CN)_6]为探针,过氧化氢浓度为0.5 mmol/L,pH 7.0的PBS溶液为检测底液,孵育温度37℃、孵育时间20 min。采用微分脉冲伏安法研究免疫传感器响应电流与阪崎肠杆菌浓度之间的关系。结果表明,免疫响应电流与阪崎肠杆菌浓度之间呈线性关系(ΔIpc(μA)=-1.1817 lg C+1.723,R~2=0.9989),其检出限为5.8×10~1 CFU/mL(S/N=3)。该法用于检测婴幼儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌,其结果与国标方法(实时荧光PCR法)的数据一致,而且具有样品预处理简单、灵敏度高、快速、费用低等优点,可用于婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的快速检测。     

基于PAMAM树枝状大分子的纳米免疫传感器法快速测定肉类中沙丁胺醇

采用聚酰胺-胺(PAMAM)树枝状大分子材料、羧基化多壁碳纳米管(MC-COOH)和1-丁基-3-甲基咪唑基四氟硼酸盐复合材料修饰玻碳电极,包埋固定沙丁胺醇抗体制备免疫传感器,建立一种新型免疫传感器法快速检测肉类中沙丁胺醇(SAL)。以K3[Fe(CN)6]为探针,利用循环伏安法对该纳米传感器进行电化学表征,优化免疫传感器法测定沙丁胺醇的试验条件,结果:电解质溶液p H 7.0,孵育温度37℃,孵育时间30 min。该传感器的免疫响应电流与电解质溶液中沙丁胺醇的质量浓度在0.1~25 ng/m L范围呈线性关系,其线性方程为IP=-0.2878CSAL+45.865,相关系数R2=0.9946,最低检出限为0.04 ng/m L(S/N=3),加标回收率为95.40%~103.90%;利用该法与高效液相色谱法检测市售猪肉、羊肉中的沙丁胺醇,其检测结果与HPLC法基本一致,该法具有简便快捷、准确等优点,可用于肉类及肉制品中沙丁胺醇的快速检测。     

抑制型表面等离子体共振免疫传感器再生循环检测花生中黄曲霉毒素B_1

针对花生中高毒污染物黄曲霉毒素B_1(AFB_1),开发一种可再生循环使用的抑制型表面等离子体共振(SPR)免疫传感器。方法 :用活化酯偶联制备AFB_1包被抗原(AFB_1-OVA),并通过EDC/NHS将其预先包被到表面等离子体共振芯片表面。依据免疫抑制原理,即目标物(AFB_1)与AFB_1-OVA共同竞争固定浓度的特异性抗体,以及不同浓度AFB_1所得到的SPR响应,计算抑制率并绘制曲线,可实现对食品中AFB_1的准确、灵敏分析。结果:检测过程抗体浓度为80 nmol/L;该抑制型SPR免疫传感器的检出限(IC15)为0.0049μg/L,灵敏度(IC50)达到0.025μg/L;对花生样品中AFB_1的检出限(IC15)和灵敏度(IC50)分别达到0.13μg/kg和0.74μg/kg。整个检测过程不超过5 min,同一芯片可重复使用60次以上。结论:所构建的SPR传感器操作简便,灵敏度高,检测耗时短,成本低,可以满足食品样品中高毒性AFB_1的快速、准确、低成本的分析要求。     

核酸适体结构转换荧光法检测黄曲霉毒素B1

基于黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)与互补链竞争结合核酸适体的位点使荧光恢复,建立了核酸适体结构转换荧光法检测AFB_1。以PBS为工作液,200 nmol/L核酸适体与200 nmol/L猝灭链反应30min后加入AFB_1孵育1 h,利用荧光分光光度计检测到的荧光恢复程度对AFB_1进行定量检测,可获得该方法的最佳效果。在优化条件下,AFB_1检测浓度范围为1～300 ng/mL,检出限为0. 8 ng/mL。对该检测方法的特异性进行考察,结果表明该法具有良好的特异性。对花生、玉米实际样品进行检测,回收率在81. 1%～108. 3%之间。     

四环素分子印迹电化学传感器的制备及快速检测牛奶和猪肉中四环素类药物残留

以四环素(TC)为模板分子,邻苯二胺(OPD)为功能单体,在磷酸缓冲液中采用电聚合的方法在玻碳电极表面制备了能够特异识别模板分子及其结构类似物的分子印迹电化学传感器。实验选用含1 mol/L KCl及5 mmol/L K_3[Fe(CN)_6]的HAc-Na Ac缓冲液为表征溶液,应用差分脉冲伏安法(DPV)和循环伏安法(CV)研究了传感器的电化学响应特性,并优化制备与检测条件。结果表明,在最佳条件下,DPV峰值电流差与四环素及其结构类似物土霉素和盐酸强力霉素在0.002~0.02 mmol/L浓度范围内线性关系良好,检出限在6.0×10~(-7)~7.5×10~(-7)mol/L之间。传感器在H_2SO_4-甲醇混合液中可再生,且具有良好的稳定性,对四环素以及结构类似物具有良好的选择性。采用该传感器对实际样品牛奶和猪肉中四环素、土霉素和盐酸强力霉素进行检测,加标回收率在82.8%~97.4%之间,相对标准偏差(RSD)≤4.43%。该传感器操作简便、检测快速灵敏、成本低,稳定性好,有良好的应用前景。     

小麦粉中黄曲霉毒素B_1现场检测用纳米修饰传感器

在印刷电极表面涂覆一层壳聚糖(Chit)膜,在膜上同时固定四羧基酞菁铁(Ⅲ)(FePc)和HRP酶标黄曲霉毒素B_1抗体(HRP-Ab-AFB_1)包被纳米金,制备了可用于小麦粉中黄曲霉素B_1(AFB_1)快速检测的新型安培免疫传感器(SPCI Chit/FePc/Au/HRP-Ab-AFB_1).FePc对H_2O_2的还原具有催化作用,可作为HRP酶与电极之间电子传递媒介体.当该传感器在含AFB_1样品的30℃溶液中温育8 min后,AFB_1与Ab-AFB_1的免疫结合导致HRP的活性中心与FePc之间的电子传递被部分阻碍,使HRP对H_2O_2电催化氧化电流I_0降低.△I_0与AFB_1浓度在1.0～200μg/L成线性关系,标准样品的组内和组间变异系数<3.5%;回收率97%～104%,检测限为0.3μg/L.该传感器检测AFB_1温育时间短,一步测定免分离,为小麦粉中的AFB_1现场分析提供了新技术.     

基于金标抗体的电化学免疫传感器检测米糠油中黄曲霉毒素B1

目的 为了快速检测食品中黄曲霉毒素B1的含量,本文提出一种以胶体金标记抗体的电化学免疫传感器用于米糠油中AFB1的检测。方法 首先在金电极(AuE)表面修饰抗原,再进一步修饰制备好的金标抗体,最后带有辣根过氧化物酶的二抗(IgG-HRP)通过与抗体反应结合到电极表面。当目标物AFB1存在时,与抗原竞争结合金标抗体,HRP催化过氧化氢(H2O2>)将溶液中对苯二酚(HQ)氧化成苯醌(BQ)的电流信号会下降,间接检测AFB1。结果 该免疫传感器在抗原包被量和金标抗体用量为3 μL且金标抗体与AFB1孵育80 min条件下具有最佳性能。该法线性范围为0.02 ng/mL~80 ng/mL,检出限为0.027 ng/mL。将该传感器应用于米糠油中进行加标回收实验,回收率在88.7%～108.0%。结论 该传感器具有良好的特异性、重现性和稳定性,可用于植物油中AFB1的快速检测。     

基于壳聚糖-纳米金修饰的酪蛋白免疫传感器的研制

在玻碳电极表面修饰壳聚糖和纳米金,以纳米金对抗体等生物分子的良好亲和性,固定抗-αs-酪蛋白(anti-αs-酪蛋白)抗体制得酪蛋白免疫传感器。通过循环伏安法考察电极表面的电化学特性,并对该免疫传感器的性能进行研究。该免疫传感器对以磷酸盐缓冲液溶解的αs-酪蛋白进行检测。响应电流与酪蛋白抗原质量浓度的对数在1～10000ng/mL的范围内线性相关。该免疫传感器制作简单,成本较低,操作方便,可应用于牛奶质量和非乳蛋白掺杂使假的检测。     

电沉积纳米金修饰4-SPCE电流型VP免疫传感器的研制

为改善免疫传感器的生物相容性和反应信号强度,采用恒电位沉积法将HAuCl4直接还原成纳米金,并修饰于四通道丝网印刷碳电极(4-SPCE)表面.以质量浓度为0.05 g/L和HAuCl4和电沉积时间30 s作为电沉积纳米金修饰4-SPCE的制备条件.利用静电吸附作用将辣根过氧化物酶标记副溶血性弧菌抗体(HRP-anti-VP)固定,制备副溶血性弧菌酶免疫电极.通过循环伏安法表征免疫电极和监测酶促反应,根据免疫反应前、后还原峰电流下降的比例(DP)来实现对VP的检测.在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下,免疫电极线性检测范围为104-109cfu/mL,其线性回归方程为:DP=7.7lgC-12.63,线性相关系数为0.9973(n=6),检测限为8.1×104 cfu/mL(S/N3).该免疫电极具有较好的特异性、重现性(RSD<6%)、稳定性(1周后电流响应为初始值的90%)和准确性(与GB/T 4789.7-2003符合率93.3%).所研制的免疫传感器用于快速筛检VP效果良好.     

基于交流电动作用的免疫传感器快速高灵敏检测花生油中的黄曲霉毒素B_1

该文建立了花生油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)快速准确的检测方法。利用交流电动作用对AFB_1进行加速和富集,然后在敏感元件微芯片上与固定的抗AFB_1单克隆抗体发生免疫反应从而导致电容规律性变化,构建AFB_1免疫传感器。结果表明,该方法可在30 s内完成加样、孵育和检测,实现对食用花生油中AFB_1的高灵敏度定量分析。该方法针对测试液中AFB_1浓度的线性范围为10~(-6)～10~(-2)μg/m L(R~2=0. 993 6);相对标准偏差(n=5)为6. 63%～15. 60%,最低检出限为2. 01×10-7μg/m L(3σ/S),定量限为2. 35×10~(-7)μg/m L(10σ/S),平均加标回收率为85. 20%～97. 70%,对AFB_2、AFM_1、AFG_1、OTA、DON、ZEN等可能共存毒素具有抗干扰性。     

时间分辨免疫荧光法测定食物中花生过敏原成分

目的:建立双抗体夹心时间分辨荧光免疫法[Time-resolved Fluoroimmunoassay(TRFIA)]测定食物中花生过敏原蛋白成分,为进出口食品中花生过敏原成分检测和由花生导致的食物过敏性疾病的预防提供技术基础。方法:提取花生蛋白,免疫小鼠制备抗花生总蛋白的多克隆抗体,用该抗体包被酶标板,并用生物素标记该多抗作为捕捉抗体,Eu3+标记的链酶亲和素和以β-二酮体为主的增强液等试剂,建立双抗夹心TRFIA方法,检测该方法的灵敏度,同时用于13种食品中花生过敏原蛋白成分检测。结果:初步地研制出双抗体夹心TRFIA法检测食品中花生过敏原蛋白成分,具有特异性,和其最低检出限为0.1ng/mL,标准曲线在0.1～160ng/mL范围内线性良好;11种食品检测结果与食物过敏原标签标注内容相符,而2种标示不详的食品检测结果均呈现阳性。