霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化研究

为分析霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化规律来确定霍山石斛的适宜采收期,本文利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、红外光谱、乌氏黏度计、分光光度法等方法分析霍山石斛多糖的理化性质,并通过体外细胞实验检测了霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性。结果表明,霍山石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成的两组分子量不同的组分构成,多糖含量和高分子量组分的分子量在全年呈现降-升-降-升的变化,多糖黏度、乙酰基含量和单糖摩尔比呈现降-升-降的变化,低分子量组分则在5~9月期间消失。霍山石斛多糖具有一定的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性,其免疫调节活性在9月至翌年4月优于5~8月,而多糖抑制食管癌细胞生长的作用在秋冬季好于春夏季。由霍山石斛多糖理化性质与生物活性变化之间的关系,可初步确定霍山石斛的最佳采收期为秋冬季。     

霍山石斛中不同多糖组分的保肝活性

采用热水浸提和DEAE-纤维素阴离子交换法从霍山石斛中分离出4 种多糖组分（DHP1、DHP2、DHP3和DHP4）,比较了4 种多糖组分对四氯化碳（CCl4）肝毒性的保护作用。结果表明：口服DHP1显著降低了CCl4诱导的小鼠血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活性的升高,削弱了肝组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的表达,同时恢复了肝组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性。因此,DHP1可能是霍山石斛中一种潜在的保肝多糖成分。     

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的：研究霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP）的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法：通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果：DHP在质量浓度为25、50、100 μg/mL和200 μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论：DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。     

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。     

超声波辅助提取霍山石斛多糖及其抗氧化活性研究

以霍山石斛为原料,利用超声波辅助法提取霍山石斛多糖,采用Box-Behnken设计和响应面分析对提取条件进行优化,同时比较了超声波辅助提取工艺和热水浸提工艺所得霍山石斛多糖的还原力和ABTS自由基清除率。结果表明,超声波辅助提取霍山石斛多糖的最优工艺条件为:液料比30:1,浸提温度81℃,浸提时间120 min,超声功率423 W,超声时间8 min,在此优化条件下多糖平均得率为19.96 mg/g,是传统热水浸提工艺的1.70倍。体外抗氧化结果显示,超声波辅助提取工艺所得霍山石斛多糖还原力和ABTS自由基清除率均优于热水浸提的多糖。该试验结果为后续霍山石斛多糖的提取和抗氧化活性研究提供了实验依据和技术支持。     

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。     

霍山石斛多糖的闪式提取工艺优化及降血糖作用研究

目的：为了优化霍山石斛多糖的闪式提取工艺,并对其降血糖作用进行研究。方法：采用单因素试验和响应面试验优化霍山石斛多糖的提取工艺,并通过空腹血糖、血清胰岛素、糖化血清蛋白水平研究其降血糖功能。结果：霍山石斛多糖的最优提取工艺为料液比1:28 (g:mL),提取电压132V,提取时间95s,提取次数4次,在此条件下霍山石斛多糖提取率为24.14±0.52%。通过动物试验发现,霍山石斛多糖能显著降低小鼠血糖值和糖化血清蛋白水平(P＜0.01),提高小鼠血清胰岛素含量(P＜0.01)。结论 该霍山石斛多糖具有较好的降血糖功效。     

超声波对密花石斛多糖理化性质及免疫调节活性的影响

本文从超声波处理前后密花石斛多糖的分子量分布、特性黏度、荧光辅助糖电泳、溶液构象及免疫调节活性的变化角度,探讨超声波对多糖理化性质及与生物活性的改变。结果表明:超声波处理不仅降低密花石斛多糖高分子量组分的分子量和特性黏度,使多糖的溶液空间构象由大的纺锤体状聚集体解聚分散成小的结构紧密的聚集体,而且可显著提高多糖促进脾细胞增殖的活性,提示超声处理可改变多糖的理化性质并影响其生物活性。     

霍山石斛多糖的制备、功能和产品开发的研究进展

霍山石斛是我国传统医药中的一种名贵中药材,具有悠久的药用历史和良好的药用价值,现已成为现代医疗、保健食品等领域的研究热点。石斛多糖为石斛功效发挥的主要物质基础,生物学活性丰富,产业化开发利用前景广阔。本文综述了霍山石斛多糖的提取纯化、理化性质、结构特征及功能作用等研究进展,并对霍山石斛类保健食品的开发现状和深度开发的前景进行分析和展望,以期为霍山石斛的综合开发利用提供科学依据。     

铁皮石斛多糖提取及抗氧化活性研究

从铁皮石斛中提取多糖。以铁皮石斛多糖提取得率为评价指标,在单因素试验的基础上通过正交试验优化提取条件,得到最佳提取条件:提取时间2h,料液比1∶80,提取温度80℃,提取次数3次。此条件下铁皮石斛多糖提取得率为19.01%±0.49%。通过测定铁皮石斛多糖对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)、超氧阴离子自由基(O~(2-))和羟基自由基(-OH)的清除能力及铁皮石斛多糖对三价铁的还原能力,对铁皮石斛多糖进行抗氧化活性研究。结果表明,铁皮石斛多糖对三种自由基均有较高的清除能力,且清除能力随多糖浓度的增加而增大,在多糖浓度为3mg/mL时,自由基清除率分别达到38.83%、56.25%、56.58%。同时铁皮石斛多糖具有较高的还原能力。铁皮石斛多糖具有较强的抗氧化活性。     

Determination of the molecular weight distribution of non-enzymatic browning products formed by roasting of glucose and glycine and studies on their effects on NADPH-cytochrome c-reductase and glutathione-S-transferase in Caco-2 cells.

After thermal treatment of a mixture of glucose and glycine for 2 h at 125 degrees C, about 60% of the starting material was converted into non-soluble, black pigments, whereas 40% of the mixture was still water-soluble. Dialysis of the latter fraction revealed 30.4% of low molecular weight compounds (LMWs; MW < 10,000 Da) and 10.0% high-molecular weight products (HMWs; MW > or = 10,000 Da). The water-soluble Maillard reaction products (MRPs) were separated by gel permeation chromatography and ultrafiltration, revealing that 60% of the water-soluble products of the total carbohydrate/amino acid mixture had MWs < 1,000 Da and consisted mainly of non-coloured reaction products. MRPs with MWs between 1,000 and 30,000 Da were found in comparatively low yields (about 1.3%). In contrast, about 31.1% of the MRPs exhibited MWs > 30,000 Da, amongst which 14.5% showed MWs > 100,000 Da, thus indicating an oligomerisation of LMWs to melanoidins under roasting conditions. To investigate the physiological effects of these MRPs, xenobiotic enzyme activities were analysed in intestinal Caco-2 cells. For Phase-I NADPH-cytochrome c-reductase, the activity in the presence of the LMW and HMW fraction was decreased by 13% and 22%, respectively. Phase-II glutathione-S-transferase activity decreased by 15% and 18%, respectively, after incubation with the LMW and the HMW fractions. Considering the different yields, 30% and 10%, respectively, of the LMW and the HMW fractions, the total amount of the LMW fraction present in the glucose-glycine mixture is more active in modulating these enzyme activities than that of the HMW fraction.     

啤酒泡沫中HMW和LMW组分蛋白质的研究

研究啤酒泡沫中HMW和LMW蛋白质组分.主要利用80%硫酸铵沉淀啤酒泡沫中大部分的蛋白质,再利用Sephadex G-75层析柱可以将啤酒泡沫蛋白质分为HMW和LMW蛋白组分;通过SDS-PAGE凝胶电泳可以明显看出HMW和LMW的蛋白分子量的范围;再利用HPLC分析HMW和LMW蛋白组分中的氨基酸.     

EFFECT OF CYTOSOL ON LIPID PEROXIDATION IN FLOUNDER SARCOPLASMIC RETICULUM

Studies were carried out to determine the effects of cytosol on sarcoplasmic reticulum lipid peroxidation. Upon addition of unfractionated cytosol to the lipid peroxidation system, inhibition was observed. Fractionation revealed that both the low molecular weight (LMW) cytosol (<10,000 MW) and high molecular weight (HMW) cytosol (>6,000–8,000 MW) fractions inhibited lipid peroxidation. It is suggested that either inorganic phosphate compounds or nucleotides may be responsible for the LMW cytosol's inhibitory characteristics. Addition of the HMW cytosol fraction to the system necessitated the presence of additional adenosine 5′-diphosphate (ADP) for optimal activity. ADP bound to the HMW cytosol fraction may be incapable of chelating the iron and preventing its precipitation as the ferric hydroxide.     

Application of ultrafiltration in the study of phenolic isolates and melanoidins from pale and black brewers' spent grain

Two types of brewers' spent grain (BSG), pale and black, were studied employing ultrafiltration (UF cut‐off, 10 kDa) to obtain high‐molecular‐weight (HMW) and low‐molecular‐weight (LMW) phenolic fractions from one pale (P2) and one black (B2) BSG extracts. Of the four UF fractions obtained, the HMW B2 fraction had highest level of polyphenols (5.73 ± 0.25 mg GAE g^?1 BSG dw) and protein (18.82 ± 0.41 mg protein g^?1 BSG dw). Metal‐chelating ability and antioxidative properties were also identified. Antioxidant activity evaluated using the DPPH and FRAP assays, indicated that activity in B2 extracts was associated mainly with the HMW fraction (3.10 ± 0.10 and 2.49 ± 0.09 TE g^?1 BSG dw, respectively), whereas in P2 samples, antioxidant activity was highest in LMW fractions (0.58 ± 0.01 and 0.92 ± 0.03 TE g^?1 BSG dw, respectively). The high antioxidant activity and metal‐chelating ability observed for black BSG extracts may be attributed to the presence of coloured melanoidinic structures.     

鲢鱼肽美拉德反应产物超滤组分的抗氧化活性研究

鲢鱼肽美拉德反应产物(MRPs)经5 k Da、1 k Da超滤膜分离、然后再经溶剂分级后,获得了不同组分,分析其抗氧化活性与理化特性。通过对不同组分的DPPH自由基清除活性、金属离子螯合活性和总抗氧化能力的测定可以看出,水溶性组分中的高分子量化合物比低分子量化合物具有较高抗氧化活性,而醇溶性组分中高分子量的抗氧化活性比低分子量的低。MRPs中水溶性组分F-3(5 k Da)对DPPH自由基清除活性、对金属离子的螯合活性和总抗氧化力最高;水溶性组分中F-3和F-2(1 k Da~5 k Da)的褐变程度较高,F-3的荧光强度最高;FI-IR分析发现,F-2和F-3在860.01 cm-1和948.61 cm-1处有强烈的吸收峰,这表明肽因美拉德反应发生了结构的变化。因此,鲢鱼肽MRPs中起主要抗氧化作用的为水溶性物质,且其中相对高分子量的有色水溶性产物抗氧化活性较强。