新分离5株狂犬病病毒街毒株N和G基因的序列分析

目的分析我国新分离的5株狂犬病病毒(RV)街毒株基因序列及分子流行病学状况。方法采用RT-PCR法从疑似狂犬的犬脑组织内获得N和G基因cDNA的全序列并进行测序,将所得结果与已发表的国内外代表性毒株相应基因进行核苷酸和推导氨基酸序列比较。结果5株均含有完整N基因序列,3株含有完整G基因序列。与国内外发表的部分毒株比较,5株街毒N基因的核苷酸同源性在98.1%～99.9%之间,推导氨基酸同源性在99.5%～100%之间。将5株街毒与人用疫苗株3aG、PV株的N基因进行比较,核苷酸同源性在86.2%～86.7%之间,氨基酸同源性在95.1%～95.5%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在89.4%～89.6%之间,氨基酸同源性在98.2%～98.6%之间。3株街毒G基因的核苷酸同源性在98.5%～99.4%之间,推导氨基酸同源性在99.6%～100%之间。将3株街毒与人用疫苗株aG、PV和兽用疫苗株ERA的G基因进行比较,核苷酸同源性在82.8%～83.1%之间,氨基酸同源性在88.0%～90.1%之间;而与人用疫苗株CTN比较,核苷酸同源性在86.7%～87.1%之间,氨基酸同源性均为92.0%。结论新分离街毒株基因未发生较大变异,与CTN的同源性高于与aG株和PV株。     

高效液相色谱法测定肉制品中红色2G色素

目的 建立肉制品中红色2G色素的高效液相色谱法(HPLC),并用该方法对市售肉制品进行了测定.方法 样品经沉淀蛋白质,用乙醇氨水溶液提取色素,去除脂肪,聚酰胺粉净化,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PDA)检测.结果 HPLC法测定红色2G色素在1.00 ～ 20.00 μg/ml范围内有较好的线性关系,γ＞0.999,仪器最低检出量为1 ng,方法检出限为0.1 mg/kg,样品加标平均回收率范围:79.9％ ～84.4％,相对标准偏差:2.20％～6.45％(n=6).结论 该方法适用于肉制品中红色2G色素分析,具有较高的选择性和灵敏度,回收率和重现性良好,结果准确可靠.     

中国狂犬病病毒遗传多样性分析

目的分析中国狂犬病病毒(RV)的遗传多样性,为我国狂犬病的预防提供理论依据。方法采用RT-PCR技术扩增26株RVN基因,并进行测序,与GenBank登录的序列进行比对,构建进化树,分析RV的基因分型和分组情况以及时间和空间的动态进化。结果中国RV分为2个大的进化分支(8组),分支Ⅰ包括1～4组,分支Ⅱ包括5～8组,组内核苷酸同源性≥93.2%,氨基酸同源性≥94.3%;组间核苷酸差异性≥8.0%,氨基酸差异性≥1.7%;运用贝叶斯中的马尔科夫链的蒙特卡洛方法,估计中国RVN基因核苷酸的平均碱基替代率为1.4089×10-4取代/位点·年,共同祖先出现在公元968年。结论中国狂犬病病毒株均属于基因1型狂犬病病毒,存在跨地域、跨宿主传播;我国分支Ⅰ狂犬病病毒株与泰国、越南、菲律宾、印度尼西亚、马来西亚等东南亚国家分离的狂犬病病毒株起源相同;分支Ⅱ的毒株在全球分布。     

武汉市市售灌肠类肉制品中红色2G色素非法使用现状及分析

目的 对武汉市市场销售的灌肠类肉制品中红色2G色素非法使用现状进行监测,对其健康危害评估提供依据.方法 在全市范围内分层随机抽样,采集超市、集贸市场及肉制品专营店出售的灌肠类食品样品156件,采用高效液相色谱法检测,Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇和0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 ml/min,柱温35℃,检测波长530 nm,进样量10 μl.结果 23件样品检出红色2G色素,检出率为14.74％,含量范围0.20～5.21 mg/kg,集贸市场检出率高于其他经营场所(P＜0.05).结论 灌肠类肉制品中红色2G色素污染现象不容忽视,建议有关部门将其列为食品安全日常监测项目.     

同时测定肉制品中酸性橙Ⅱ等11种合成色素的方法研究

构建同步测定肉制品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、红色2G、亮蓝、酸性红、赤藓红、酸性橙Ⅱ等11种合成色素的高效液相色谱法(HPLC),对市售肉制品中色素进行监测。方法 采用固相萃取技术,用乙醇氨水水溶液提取样品中色素并经WAX小柱(150 mg,30 μm)净化,采用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PDA)检测。结果 HPLC法测定11种色素在1.00～20.0 μg/ml范围内有较好的线性关系,r均>0.999,方法检出限为0.02～0.06 mg/kg,样品加标平均回收率为81.1%～100.8%,RSD为1.3%～4.9%(n=6)。用本方法监测259份市售肉制品,不同色素的检出率为0%～22.0%。结论 方法具有较高的选择性和灵敏度,回收率和重现性良好,适用于肉制品中11种色素分析,具有推广应用价值。