Taqman探针荧光PCR法检测食品中的大肠埃希氏菌O145

针对大肠埃希氏菌O145的O抗原基因簇的wck D基因的特异性序列设计引物和Taqman探针,建立检测大肠埃希氏菌O145的荧光PCR方法,对其灵敏度、特异性进行验证,并将其用于食品样品的检测。结果表明,本研究中的方法可实现对大肠埃希氏菌O145的特异性扩增,其它27株非O145大肠埃希氏菌和20株非大肠埃希氏菌细菌的菌株均无扩增;检测的灵敏度可达165拷贝/反应;339份食品样品EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出大肠埃希氏菌O145阳性31份,阳性率为9.1%。实验结果表明,本研究成功建立了可用于食品中大肠埃希氏菌O145的Taqman探针荧光PCR方法,食品样品采用EC肉汤增菌24 h、热裂解法提取核酸,增菌后检测所需时间由至少3 d~7 d缩短为仅需2 h~3 h,食品检测全过程仅需约28 h,经证实本方法特异性强、操作简便,为食品中大肠埃希氏菌O145提供了一种的快速检测手段。     

食品中大肠埃希氏菌O121荧光PCR检测方法的研究

针对大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)O121的O抗原基因簇的vio A基因的特异性序列设计引物和探针,通过对荧光聚合酶链式反应(real-time PCR)扩增条件的优化,建立检测E.coli O121的血清型特异性荧光PCR方法。E.coli O121标准菌株呈现扩增曲线,其它22株非O121 E.coli和19株非E.coli细菌的菌株均无扩增,检测的灵敏度可达155拷贝/反应。339份食品样品用EC肉汤增菌后用本荧光PCR法进行检测,检出E.coli O121阳性9份,阳性率为2.7%,其中市场上采购获得的生猪肉和生牛肉阳性率达4.1%。上述试验结果表明,本方法特异性强、操作简便,食品中E.coli O121检测全过程可在1.5 d内完成,适用于食品中E.coli O121的快速检测。     

重组酶介导等温扩增法检测食品中铜绿假单胞菌

目的 建立重组酶介导等温扩增（Recombinase-aided amplification,RAA）法,快速、灵敏、特异检测食品中铜绿假单胞菌的分析方法。方法 针对铜绿假单胞菌lasB基因的特异性保守区域,设计RAA特异性引物和exo探针,筛选出最优组合;对提取的目标基因组DNA进行检测,确定方法的特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,比对不同检测方法对食品样品的检出限。结果 建立的铜绿假单胞菌lasB基因RAA检测方法特异性良好,仅对铜绿假单胞菌有扩增曲线,对其他致病菌无交叉反应;方法对纯菌液的灵敏度为1.7 pg/μL。人工污染实验表明,方法对肉类样品中铜绿假单胞菌的检出限与传统方法一致,达1.0×103 CFU/mL;RAA方法检测时间仅需20min。结论 本研究建立的铜绿假单胞菌实时荧光RAA检测方法特异性强、灵敏度高、反应时间短,可用于食品中铜绿假单胞菌的快速检测。     

LAMP实时浊度法快速检测食品中产志贺毒素大肠埃希氏菌

针对产志贺毒素大肠埃希氏菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)stx1和stx2基因的特异性序列分别设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,利用实时浊度仪建立食品中STEC的LAMP实时浊度法快速检测方法。LAMP反应在实时浊度仪63℃恒温下1 h可完成。对方法的特异性、灵敏度、稳定性进行了评价,并在实际样品检测中进行应用。经优化该方法的检测灵敏度可达150拷贝/反应,4株STEC菌株LAMP扩增结果与其基因型一致,其他21株非STEC菌株均未出现非特异性扩增。395份食品样品检出STEC阳性68份(阳性率为17.2%),所检食品类别中畜产品阳性率最高(达31.3%),禽产品、水产品和可生食蔬菜均有少量阳性样品检出,阳性样品中以stx2基因阳性型为主。结果表明,LAMP实时浊度法具有快速、灵敏、特异性强、操作简便的优势,适用于食品中STEC的快速筛查。     

真空包装低温熟制鸽子货架期预测模型的建立

为了研究低温熟鸽货架期模型,对真空包装低温熟制鸽子在不同温度条件下贮藏的品质变化进行了评价：贮藏在4℃,10℃,15℃,20℃,25℃样品的菌数总数、总挥发性盐基氮均随着贮藏天数增加有不同程度的增加,在10～25℃条件下,贮藏后期菌落总数变化趋势高于贮藏初期;与 4 ℃和10℃的样品相比,其它3组温度下的感官变化更加明显。此外,所有样品的总大肠菌群平板计数均小于10 CFU/g,且不同贮藏温度下没有差异。利用熟制鸽子菌落总数指标,通过Gompertz方程和平方根方程进行拟合,建立低温熟鸽货架期模型。该模型的预测的数值与实践测定值的相对误差在±10%以下。表明该模型是可靠的。