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目的分析2019年6月苏州市某幼儿园食物中毒的原因,了解病原菌的基因分型和耐药谱情况。方法通过问卷调查、电话访谈,查阅医院就诊记录、餐厅订餐记录等主动搜索病例,开展病例个案调查和现场卫生学调查,采集相关样品进行实验室检测。以分离培养,质谱快速鉴定,VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定仪生化鉴定进行鉴定分析,脉冲场电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)进行基因分型,药敏试验采用微量肉汤稀释法。结果共搜索到17位病例(包括确诊病例4人),临床表现为腹痛、腹泻等胃肠道不适症状,均无头痛、发热等其他不适症状。6月20日中餐为可疑餐次,此外无其他共同饮食史。现场共采集47份样本(包括菜品、环境样本和肛拭子),其中4份学生肛拭子检出类志贺邻单胞菌。PFGE分型结果显示其中3株菌100%同源,属于同一型别,另一株菌与其差异较大,属于不同型别。对14种抗生素的药敏分析显示,3株菌(同一型别)除对氨苄西林耐药外还对甲氧苄胺嘧啶/磺胺甲噁唑耐药,对其它抗生素均敏感。另1株菌对氨苄西林耐药,对其它抗生素均敏感。结论此次事件很可能是一起由类志贺邻单胞菌引起的食物中毒,并且可能来源于不同的传染源。 相似文献
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目的应用实时荧光定量PCR技术,结合3~5 h的前增菌处理,建立食品中大肠埃希菌的快速、灵敏、定量的检测方法。方法以大肠埃希菌(ATCC 25922)为参考菌株,对培养基和培养温度进行优化,选择最佳的前增菌培养条件。将不同浓度的参考菌株和样品分别接种前增菌液中培养3~5 h。采用Triton-X 100提取增菌后的DNA,实时荧光定量PCR扩增大肠埃希菌特异性片段。所得Ct与对应的原始(增菌前)参考菌株的浓度,建立标准曲线,计算样品中大肠埃希菌的数量。结果纯培养模式下,经过3、4和5 h的前增菌后,标准曲线具有很好的线性,r2分别为0.996、0.992和0.991,对应的检测限为136、14和1.4 cfu/100 ml;含杂菌培养模式下,NB和EC肉汤42.0℃增菌4 h后,建立的标准曲线r2分别为0.972和0.978。在不同食品中该方法的加标回收率为74.0%~174.0%。结论 3~5 h的前增菌实时荧光定量PCR方法可以快速、灵敏、定量地检测食品中活的大肠埃希菌。 相似文献
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建立一种灵敏、可靠、快速对水中大肠埃希菌富集和DNA提取的最佳方法组合,以便应用TaqMan探针实时荧光PCR技术进行定量检测。方法 膜过滤洗脱环节,采用3种不同的方法进行富集洗脱,通过平板计数法比较各方法富集洗脱效果;DNA提取环节,采用4种方法进行DNA提取。所得DNA进行实时荧光PCR扩增,定量检测DNA拷贝数,比较各方法的DNA提取效率;并采用最优的方法组合,对模拟水样进行膜过滤和DNA提取,考察全过程的回收率和灵敏度。结果 采用加表皮葡萄球菌过滤+漩涡混合器+玻璃棒刮擦洗脱方法(C法),洗脱效率能达到75%~93%;TritonX-100法和磁珠法的线性范围达到6个数量级稀释度(100~10-5),r2分别为0.998和0.999,然而,TritonX-100法更省时,更简便,经济性更好。采用该最优的方法组合,其全过程的回收率为79.7%~104.0%且灵敏度达到1cfu/ml。结论 C法+Triton-100法组合可以快速、准确、经济地对饮用水中大肠埃希菌进行富集和DNA提取。 相似文献
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