基于PCR技术的肉类成分溯源鉴定方法研究进展

近几年屡屡曝光的食品安全事故引起了社会的广泛关注,食品安全已经成为社会共同关注的问题,肉类掺假造假现象更是层出不穷,其中用低价鸡肉、鸭肉、猪肉等掺入、冒充牛羊肉成为主要的掺假方式。国内外进行肉类掺假鉴定主要以核酸作为靶标,核酸鉴定也是物种鉴别最常用、最核心的方法,以DNA检测为基础建立起来的DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR、荧光探针等技术也得到空前发展和广泛应用。我国针对动物源性成分检测也制定了相关国家标准和行业标准,但大多现行标准中基于DNA检测建立的PCR技术只能检测单一物种,滞后于技术的发展。目前,基于PCR发展起来的衍生技术凭借其高灵敏度、强特异性和高通量等优势在动物源性成分检测工作中显示出巨大潜力,也是肉类成分鉴定未来的重要方向。本文综述了PCR技术在肉类检测中的研究概况和现行标准的技术概况,以期为肉类成分鉴定研究提供信息。     

4组鱼类DNA条形码引物的筛选与优化

目的通过对DNA条形码氧化酶亚基I基因(cytochrome oxidase subunit I,COI)的4组常用引物进行比较筛选,选择适于舟山鱼类鉴定的最佳引物。方法以舟山主产大黄鱼、小黄鱼、带鱼和乌贼样品DNA为模板,对4组常用DNA条形码引物进行PCR体系优化。通过比较PCR产物量、特异性、灵敏度和测序成功率,综合分析筛选最佳引物组。结果 4组引物均能扩增大黄鱼、小黄鱼和带鱼的DNA,对于乌贼DNA的扩增具有明显差异。COI优化引物具有易于扩增、测序简单等优势,更适于作为海产品鉴定的DNA条形码引物。结论本研究为舟山海产品的市场监管和实验室大量样品检测提供了技术参考。     

鱼翅及其真伪鉴定技术研究进展

鱼翅是鲨鱼鳍软骨制品, 是我国传统的名贵海珍品。由于不同鱼翅的价格悬殊, 一些不法商贩通过以次充好、以假乱真和错误标识等手段谋取利益, 损害消费者权益。另一方面, 鲨鱼的捕捞加速了部分濒危鲨鱼物种数量的急剧减少, 甚至造成物种灭绝, 破坏了生态平衡。因此, 国内外开展了对鱼翅真伪及其鉴定技术研究, 对打击掺假制假行为和鲨鱼保护都具有重要的经济和社会意义。本文分析了鱼翅的营养价值、鱼翅贸易现状以及鱼翅掺假危害, 并着重综述国内外鱼翅真伪鉴定相关技术优缺点以及相应案例, 阐明当前以DNA鉴定技术为核心, 形态学鉴定和理化鉴定技术为辅的鱼翅真伪鉴定策略, 为鱼翅鉴定和鲨鱼种类鉴定的相关研究提供理论基础和技术参考。     

基于预测微生物学理论的南美白对虾仁货架期预测模型

目的建立并评估南美白对虾仁贮藏期的货架期数学预测模型。方法将南美白对虾仁分别贮藏在-18℃、4℃条件下,定期对特定腐败菌进行检测,利用修正的Compertz方程构建不同温度下微生物生长的动力学模型,结合Belehradek方程,讨论特定腐败菌生长的最大比生长率μ_(max)和延滞时间λ与温度的关系。结果修正的Compertz方程能较好地拟合不同温度下南美白对虾仁特定腐败菌生长的S型曲线,r~2均大于0.95。温度对特定腐败菌的最大菌数N_(max)的影响不大,平均值为7.57 log(CFU/g);延滞时间λ随温度的上升而降低;最大比生长率μ_(max)随温度的上升而增大,结合Belehradek方程发现在-20~10℃温度范围内最大比生长率μ_(max)与μ_(max)~(0.5)、(λ-1)~(0.5)之间均有良好的线性关系。确定了最小腐败水平(Ns)并建立了南美白对虾仁的货架期预测模型SL,模型各参数为N_(max)=7.57log(CFU/g),b_μ=0.0302,T_(minμ)=-25.8179,b_λ=0.0010,T_(minλ)=-523.2000。通过测定5℃贮藏温度下南美白对虾仁特定腐败菌的生长状态,验证货架期预测模型SL的准确性,预测值和实测值之间的相对误差为7.2%。结论该货架期预测模型能有效预测南美对白对虾仁在-20~10℃范围内任意温度下的货架期。     

免疫磁珠分离技术在食源性致病菌检测中的应用

免疫磁珠(immunomagnetic beads, IMB)是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的球形小粒子, 由载体微球和免疫配基结合而成。免疫磁珠分离技术(immunomagnetic beads separation techniques, IMBS)则是利用免疫磁珠上包被的特异性抗体与抗原发生亲和反应, 从复杂的样品中分离到目标抗原。再利用磁珠的磁响应性, 实现对目标抗原的富集。在食源性致病菌检测方面, 该技术通过与其他检测手段相结合而得到广泛应用, 具有灵敏度高、检测时间短、操作简单等优势。本文综述了免疫磁珠的结构特点、免疫磁珠分离技术的原理, 着重阐述了该技术在食源性致病菌检测方面的应用进展, 以期为免疫磁珠分离技术的广泛应用提供参考。     

舟山海域麻痹性贝类毒素污染情况及其2种检测方法比较

目的检测舟山东极与嵊泗枸杞2个海域养殖贻贝中的麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poison,PSP),比较小鼠生物测定法与酶联免疫分析法(ELISA)的测定结果。方法采用小鼠生物测定法与酶联免疫吸附法检测贝类中的麻痹性贝类毒素,并将2者的检测结果进行比较分析。结果 2种检测方法检测的麻痹性贝类毒素含量结果基本一致。5月份东极岛海域的厚壳贻贝中检出PSP((500±3.2)MU/100 g),超标率为5%;嵊泗枸杞海域贝类PSP含量较低,未超出安全食用标准。2个海域的紫贻贝PSP含量均未超出安全食用标准。结论小鼠生物法与ELISA方法的评价结果基本一致,其检测出的PSP结果可以为摄入PSP风险评估提供数据支撑。由于ELISA方法的检测成本较高,因此可采用小鼠生物法进行麻痹性贝类毒素风险监测。     

环介导等温扩增技术检测创伤弧菌方法的建立与应用

根据创伤弧菌vvhA基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法(LAMP)建立创伤弧菌快速检测方法。结果表明,建立的LAMP方法具有高度特异性,经对13株细菌进行扩增,创伤弧菌为LAMP阳性,其他菌株均为LAMP阴性。该方法对培养的创伤弧菌的检测下限为51CFU/mL,可在60min内完成扩增反应。用建立的LAMP方法对120份海产品进行检测,共检出37份LAMP阳性样本,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可节省大量时间,且对实验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。     

鱼明胶替代哺乳动物明胶的研究进展

明胶是胶原蛋白变性的产物,在食品、医药等行业具有很好的使用价值。市面上的明胶以哺乳动物明胶为主,然而,因动物源性病毒与宗教文化等问题而限制了其发展。鱼明胶不受以上因素的限制,与哺乳动物明胶有相似的功能特性,具有很好的开发利用价值。然而,鱼明胶的凝胶性和流变性弱于哺乳动物明胶,研究者采取多种方式修饰鱼明胶,以获得所需要的性能。本文阐述鱼明胶与哺乳动物明胶的性质差异,概述鱼明胶改性方法研究进展,为鱼明胶性质的改善提供参考。     

乌贼DNA条形码的筛选与验证

目的筛选适于鉴定乌贼的DNA条形码,建立鉴定舟山常见乌贼种类的DNA条形码技术体系。方法用聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)对现有5组DNA条形码引物组合进行了筛选,设计一对新的DNA条形码引物以供筛选备用。结果现有引物与部分乌贼的DNA模板存在错配而缺乏通用性,在部分乌贼DNA的扩增受阻。本实验设计的12S rRNA基因引物可以特异性扩增乌贼的DNA,提高了乌贼鉴定的准确度。结论本研究设计的12S rRNA基因引物可以作为现有乌贼DNA条形码鉴定的补充。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度(LAMP)检测方法的建立

建立单核细胞增生李斯特氏菌实时浊度LAMP检测方法。根据单核细胞增生李斯特氏菌hly A基因设计4条特异性引物,采用环介导等温扩增方法 (LAMP)建立单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法。建立的LAMP方法具有高度特异性,经对14株细菌进行扩增,单核细胞增生李斯特氏菌为LAMP阳性,其他菌株均为LAMP阴性。建立的LAMP方法对培养的单核细胞增生李斯特氏菌的检测下限为32 CFU/m L,可在60 min内完成扩增反应。用建立的LAMP方法对160份不同食品进行检测,共检出5份LAMP阳性样本,与传统培养方法结果一致。该方法与传统方法相比,可节省大量时间,且对试验仪器和操作人员的要求低,具有良好的实用性。