高灵敏度磁荧光免疫层析试纸模式构建及在呕吐毒素检测中的应用

构建基于磁荧光纳米材料的免疫层析试纸模式,弥补现在免疫层析技术的不足,为更灵敏的免疫学快速检测提供技术支撑。以呕吐毒素（deoxynivalenol,DON）为靶标,采用溶剂热法制备羧基修饰的超顺磁颗粒,碳二亚胺法将磁颗粒、绿色荧光蛋白及DON单克隆抗体进行偶联,一步法制备磁荧光抗体探针,以DON人工抗原（DON-BSA）为检测线建立磁荧光免疫层析试纸。同时用胶体金标记DON单克隆抗体,以DON-BSA为检测线建立胶体金免疫层析试纸;制备的磁荧光抗体探针具有很好的磁性、荧光特性及抗体反应性,基于该探针成功制备了DON磁荧光免疫层析试纸,该试纸回归方程为y=－0.562x＋0.921,R2=0.990,IC50为5.611 ng/mL,检出限为1.089 ng/mL;制备了DON胶体金免疫层析试纸,该试纸裸眼检测灵敏度为500 ng/mL;定量检测回归方程为y=－0.543x＋1.485,R2=0.991,IC50为65.16 ng/mL,检出限为11.94 ng/mL。DON磁荧光免疫层析试纸的灵敏度是胶体金免疫层析试纸的10.96 倍。本实验建立的磁荧光免疫层析试纸模式可以同时实现样品的富集及荧光信号检测,提高检测灵敏度,并成功用于DON的检测,为磁荧光纳米颗粒广泛应用于免疫层析领域提供参考。     

生猪屠宰环节沙门氏菌携带状况、耐药性及其耐药基因分析

目的 调查河南省生猪屠宰环节沙门氏菌污染情况, 并分析其耐药性及耐药基因。方法 本研究从河南省不同规模的生猪屠宰企业共采集825份样品, 通过常规检测方法和分子生物学技术对样品进行沙门氏菌分离鉴定, 然后通过药敏实验检测沙门氏菌分离株对17种抗菌药的敏感性; 对部分沙门氏菌分离株进行了12种耐药基因检测。结果 样品中共分离出沙门氏菌241株, 总分离率为29.21%; 所有受试沙门氏菌分离株均对阿米卡星敏感, 而对多西环素耐受性最强(耐药率为95.00%), 其次对其他抗菌药都表现出不同程度的耐受性; 上述分离株存在着严重的多重耐药问题, 其中耐3种及以上药物的菌株占比高达98.34%。耐药基因检测结果显示, 受试菌株均含有针对全部5大类受试药物的抗性基因, 但aac(3)-Ⅰa、gurA、tetB 3个耐药基因均未有检出。结论 河南省生猪屠宰企业存在严重的沙门氏菌污染情况, 且菌株存在严重的耐药性。     

加工方式对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响

本文研究了加工方式对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响。利用SDS-PAGE和双抗体夹心法ELISA研究热加工(热蒸、烘烤、微波、高温高压)、冷处理(液氮、速冻机速冻)和非热加工(静态超高压、辐照、脉冲强光、臭氧和超声波)对发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性的影响。结果表明:100 MPa超高压处理时,发酵面团中小麦醇溶蛋白抗原性显著增加(P0.05),增加了61.84%;热蒸、微波、高温高压、辐照(7 kGy和10 kGy)、臭氧熏蒸(60 min)、脉冲强光和超声波处理均能显著降低发酵面团中小麦醇溶蛋白的抗原性(P0.01),其中以微波处理和高温高压处理的脱敏效果最好(P0.01),分别降低了62.63%和61.47%;烘烤、速冻等处理发酵面团时,小麦醇溶蛋白的抗原性没有发生显著变化(P0.05)。这说明适当的加工方式可作为食物过敏安全控制的有效手段,可为脱敏食品的生产提供有效参考。     

健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中微生物组成的特征及差异研究

奶牛乳腺炎的发生与多种病原微生物密切相关,乳汁中菌群特征的分析对建立乳房炎防控体系和提高乳制品质量和安全具有重要意义。本研究通过16S r RNA基因的V3-V4区测序,分析河南省某奶牛场17头健康奶牛和10头乳房炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度。结果发现,微生物菌群在11个门、24个纲、37个目、82个科和184个属水平上的相对丰度存在显著差异。乳腺炎奶牛乳汁中微生物菌群结构的多样性和丰富度显著低于健康奶牛乳汁,在乳腺炎奶牛乳汁中厚壁菌门、变形菌门、放线菌门的相对丰度较高。乳腺感染后,变形菌门、软壁菌门的丰度显著降低;互养菌门的丰度显著升高。乳腺炎奶牛乳汁中的链球菌科、链球菌属的相对丰度增加,棒状杆菌科、罗尔斯通氏菌属、假单胞菌属的相对丰度下降。优势菌属中有4个嗜冷菌,健康奶牛和乳腺炎奶牛乳汁中的嗜冷菌总丰度分别为19.5%和42.0%。提示乳汁中微生物组成变化可能与奶牛乳腺炎的发生发展有密切联系,该研究为奶牛场乳房炎的防控及原料奶的质量控制提供了理论依据。     

不同粒径牛乳脂肪球的鞘脂浓度比较

采集泌乳期荷斯坦奶牛乳样,并采用重力法进行分层,对不同层牛乳的粒径参数进行测量,液相色谱串联质谱对大、小粒径脂肪球的鞘脂含量进行测定。结果表明,牛乳经重力分层后的粒径有显著变化,D_[3,2]在F1层为2.25μm,F4层为2.71μm,F7层为3.97μm（P<0.05）;D_[4,3]在F1层为2.37μm,F4层为3.09μm,F7层为4.16μm（P<0.05）,其他粒径参数Dv（10）、Dv（50）和Dv（90）也呈现从F1到F7层逐渐增大的趋势,比表面积（SSA）呈现逐渐减小的变化（P<0.05）。质谱分析F1和F7层牛乳中28种鞘磷脂（SM）、5种神经酰胺（Cer）、2种鞘氨醇（SPH）和12种糖鞘脂（HexCer）,与F1层相比,F7层有23种SM、4种Cer、1种HexCer和1种SPH含量显著增加（P<0.05）。这些数据表明乳脂肪球粒径的大小影响了鞘磷脂含量。     

不同灭菌方式对商品乳外泌体完整性的影响

选取了市面上常见的不同品牌的巴氏灭菌牛乳和超高温灭菌牛乳（n=3）,采用差速超速离心法提取牛奶中的外泌体,对提取的外泌体进行透射电镜观察（transmission electron microscopy, TEM）,粒径分析（nanosight analysis, NTA）以及WB分析外泌体膜表面标志性蛋白的表达情况。研究结果表明,不同的灭菌方式对商品乳外泌体的形态,粒径范围影响不大,但可使外泌体标志蛋白发生变性、聚集和糖基化。结果显示,工业加工方式破坏了乳中外泌体的完整性,对外泌体的生物活性也将产生影响,对成年人摄取商品乳对健康的潜在影响需进一步的研究。     

花生红衣原花青素纯化工艺及其对乳糜泻细胞模型的影响

目的：优化AB-8型大孔树脂对花生红衣原花青素的纯化工艺并对纯化物组分进行表征鉴定。采用乳糜泻模型评价其对细胞毒性的抑制作用。研究方法：选用AB-8型大孔树脂,通过静态、动态吸附-解吸试验对纯化条件进行优化,用紫外-可见光谱、傅里叶红外和高效液相色谱串联质谱（UPLC-QTOF-MS/MS）对纯化物鉴定。基于乳糜泻细胞模型评价纯化物对细胞毒性的抑制作用。结果表明：纯化条件：上样质量浓度1.2 mg/mL,上样液pH值3.0,上样流速1.0 mg/mL,上样量360 mL,吸附时间180 min,解吸液为120 mL的40%乙醇溶液,解吸时间40 min,解吸流速1.0 mg/mL,此时测得该纯化物纯度达95%。紫外-可见光谱分析表明该纯化物属于原花青素类;傅里叶红外分析表明纯化物是以原花青定为主要结构单元,与标准品特征吸收峰趋势相符;UPLC-QTOF-MS/MS分析表明Pspc纯化物以A型原花青素为主要成分;细胞试验结果表明该纯化物在一定程度上可明显抑制乳糜泻模型的毒性作用。研究结果可为花生红衣资源综合开发提供理论参考。     

河南省部分屠宰场生猪及宰后环节金黄色葡萄球菌污染情况及其耐药性分析

目的 了解河南省部分地区屠宰场待宰生猪以及屠宰过程中金黄色葡萄球菌的流行情况及其耐药性.方法 采集待宰生猪鼻拭子、麻电鼻拭子、断头鼻拭子、脱毛体表拭子、劈半体表拭子、冷库体表拭子、烫毛水样及空气样品等,根据GB 4789.10-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》进行金黄色葡萄球菌的常规分离鉴...     

荧光检测碱性磷酸酶活力方法的建立

以4-甲基伞形酮磷酸酯为底物,利用动力学模式,建立了一种检测碱性磷酸酶活力的荧光法.确定了荧光检测的最佳条件为:激发波长为365 nm,发射波长为449 nm,作用时间为第2～6 min,pH值为9,底物体积为100 μL,底物缓冲溶液浓度为0.1 mol·L-1.该法操作简便、快速.