SiLAD:一种蛋白质组学动态分析的新技术

随着蛋白质组学的产生和发展,对蛋白质组表达水平的差异和变化进行体内的和动态的分析已势所必然地成为蛋白质组学研究的发展趋势。但是传统差异蛋白质组学方法只能提供细胞或组织内各种蛋白累积总量的信息,而不是真正意义上的蛋白质差异表达分析。 SiLAD(~(35)S in vivo Labeling Analysis for Dynamic Proteomics)技术正是基于这种需求而在本实验室创立的。SiLAD技术由于其在差异检出的灵敏度和时间分辨率方面的明显优势,以及除提供蛋白质组表达动态以外,可以提供蛋白质代谢等相关动态变化的更多信息,所以可适用于对多种生物过程进行的动态蛋白质组学研究。本文对SiLAD技术的原理及特点进行简要综述。     

寇氏隐甲藻(Crypthecodinium cohnii)中的着丝粒蛋白及有关进化问题分析

用免疫电镜、免疫印迹 (Westernblot)和间接免疫荧光 (IIF)技术研究了原始真核生物寇氏隐甲藻 (Crypthecodiniumcohnii)的着丝粒蛋白 (centromereproteins ,Cenps)。结果显示 :(1)寇氏隐甲藻Cenps相对集中分布于细胞核中及核膜上 ,胞质中分布稀少 (P<0 .0 1) ;(2 )染色体区域Cenps的分布比核内其他区域更加丰富 (P <0 .0 1) ;(3)寇氏隐甲藻具有与高等真核生物相似的和不同的Cenps ,其中有真核生物的主要着丝粒结构蛋白CenpB的同源分子 ;(4 )CenpB在寇氏隐甲藻细胞中具有动态的分布变化。这说明 ,CenpB等Cenps可能在真核生物细胞中具有重要功能 ,在形成着丝粒/动粒 (kinetochore)的演化中发挥一定作用。     

生物质谱在蛋白质组学研究中的应用

本文简述了生物质谱的发展以及在蛋白质组学研究中的应用。     

弓形虫H11基因克隆表达及其临床应用研究

提取弓形虫速殖子总RNA,RT-PCR扩增H11基因片段并构建重组表达载体,诱导GST-H11融合蛋白大量表达,并经亲和层析柱纯化,通过免疫印迹和酶联免疫吸附两种方法检测弓形虫特异性兔抗血清和人阳性血清,结果显示GST-H11融合蛋白检测两者血清敏感性和特异性均较高,提示H11融合蛋白可望用作诊断性抗原应用于弓形虫患者临床检测。     

蛋白质芯片技术标准化平台的建立

近年来SELDI-TOF-MS被广泛应用于疾病标志物的筛选。并正在成为可能为进一步差异或动态蛋白质组研究提供可靠线索的重要工具。它具有快速、简单、敏感、样本用量极少等优点,尤其适合从大量样本中直接筛选差异蛋白。但由于SELDI技术本身具有较强的操作依赖性,因此建立一个标准化的检测程序是至关重要的。本文采用不同种类的蛋白芯片对血清样本存储时间、冻融次数、芯片和基质的类型,激光强度和平行性等指标进行检测和分析,建立一套能提供最多差异指标的规范化标准程序。上述结果为建立和完善SEL-DI蛋白芯片技术的检测规程奠定理论基础,并提供有重要价值的实验数据。     

亚细胞器分离纯化技术的发展

本文就亚细胞器分离纯化的传统方式———密度梯度离心 ,以及新方法———亲和纯化 ,特别是免疫磁珠纯化技术进行概述和评价 ,并进一步表明两种提取方法相结合 ,更有利于同时满足产量、纯度两方面的要求。     

超高压电镜用于研究细胞骨架

细胞骨架与细胞器关系的研究一向受到技术上的限制。因为超薄切片法不能很好地反映立体关系,而去垢剂整体提取的方法虽能保持良好的骨架,却使各种细胞器丧失殆尽。超高压电镜(HVEM)具有较强的穿透力,并可同时显示细胞骨架纤维及其它细胞结构,是较为理想的观察手段。本文选用了具有突出扁平形态的印度黄麂(Indian Muntjac)转化细胞(细胞平均厚度约0.5—1μ,核部位也仅2μ左右),更加充分发挥了超高压电镜的长处,可直接观察完整的细胞。我们在日产JEOL-JEM1000电镜上,以1000千伏工作电压对麂细胞进行了观察。麂细胞骨架极为发达,在超高压电镜下致密的纤维网架充满整个视野,以致其它各种细胞结构都不同程度地被骨