(His)6-tag位置和N/C-末端截短改变重组副溶血弧菌磷脂酶D的酶学特性

本研究探讨了(His)₆-tag位置和N/C-末端截短对重组副溶血弧菌磷脂酶D(VpPLD)酶学特性的影响。研究发现:(His)₆-tag位置对于VpPLD的活性有较大影响,其中(His)₆-tag位于N-末端时测得酶活力最高,而位于C-末端时最低,且活性差异不依赖于水解底物。此外,(His)₆-tag位于C-末端导致VpPLD的最适反应pH从7.0变为8.0;删除VpPLD成熟蛋白N-末端前34个氨基酸能显著增强VpPLD对1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-L-丝氨酸(DMPS)的水解活性,但对于其他磷脂的水解活性并没有明显改变;删除VpPLD成熟蛋白C-末端肽段(469~487)会显著降低其对磷脂底物的催化活性;与(His)₆-VpPLD-WT和(His)₆-VpPLD-Δ469-487相比,(His)₆-VpPLD-Δ451-487对1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱(DPPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰-(l'-rac-甘油)(DMPG)和1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺(DMPE)的选择性均显著降低,该结果表明C-末端肽段(451-469)对VpPLD的底物选择性发挥重要影响作用。以上结果表明,(His)₆-tag的位置以及N/C-末端肽段对于重组副溶血弧菌磷脂酶D的催化活性和底物选择性具有重要影响作用。     

卷烟条盒输送线堵塞报警装置设计及应用

为减少卷烟条盒输送线因堵塞造成的残次品数量和堵塞停机时间,设计了卷烟条盒输送线堵塞报警控制装置.在动力头区域安装堵塞检测装置,通过PLC和变频器切换接口,并安装LED大屏幕,来实现快速定位报警设置,当堵塞发生时可及时报警,并准确指示堵塞点.采用该装置后,每次堵塞发生时的残品烟数量由原来的平均300条降低到10条以下,排除故障平均时间由原来的30 min缩短到5 min以内,提高了工作效率,降低了产品残次率.     

化工厂外管廊设计浅析

针对化工厂外管廊设计中常存在的一些不规范之处,结合《工业金属管道设计规范》等有关标准,分析与探讨管架边缘与相邻设施的水平距离,管架的高度、层高、宽度及跨度,管道及电气仪表桥架的布置、应力管线的补偿等设计方面的问题,供业内参考。     

重组甘油单酯脂肪酶GMGL的高效表达及固定化

该研究以来源于海洋地衣芽孢杆菌的甘油单酯脂肪酶GMGL为研究对象,在5 L发酵罐中优化了重组大肠杆菌的发酵条件,确定了最佳诱导培养条件：诱导温度25 ℃,发酵培养基pH 7.0,发酵液菌体OD600达到20时添加IPTG至终浓度为1 mmol/L,葡萄糖流加方式为变速流加。诱导培养24 h,菌体湿重达到125.40 g/L,发酵液活力为1985 U/mL,较优化前（1185 U/mL）提高了67.50%。进一步对GMGL进行固定化研究,确定最佳固定化条件为：酶载量为100 mg/g,磷酸盐缓冲液离子强度为0.50 mol/L,pH为9,优化后固定化GMGL的活力为4770 U/g,较优化前（1650 U/g）提高了189.09%。利用扫描电镜（SEM）和傅里叶红外光谱（FT-IR）对固定化酶进行表征,证实GMGL成功负载在ECR8285上。上述结果表明将为高活力甘油单酯脂肪酶的高效制备提供了一定的研究依据。     

双孢蘑菇来源非特异性过氧合酶在 毕赤酵母中的表达及生化表征

本研究以来源于(Agaricus bisporus var. bisporus,Abvb)的非特异性过氧合酶AbvbUPO为目标蛋白,实现了其在毕赤酵母GS115中的异源分泌表达。Westernblot检测结果表明重组AbvbUPO分子量为35ku。酶生化表征研究发现,非特异性过氧合酶AbvbUPO的最适反应温度和pH分别为35℃和3.0。通过过氧化氢耐受性实验,发现2 mM以上的过氧化氢会导致AbvbUPO钝化。为保持AbvbUPO在反应过程中的活力,原位生成过氧化氢的AbvbUPO酶级联催化反应被应用于其催化能力的鉴定。以乙基苯为底物的AbvbUPO酶级联催化反应,经过4h的反应后,产物β-苯乙醇的得率可达14.40%。上述研究表明,AbvbUPO是一种不耐受高温和高浓度过氧化氢的中温酶,但在原位生成过氧化氢的级联反应中AbvbUPO可保持良好的催化性能。本研究为非特异性过氧合酶的异源表达和生物催化应用提供了一个良好的借鉴。     

高效液相色谱法用于发酵法生产木糖醇的中间质量控制

利用高效液相色谱法测定木糖发酵液中木糖、阿拉伯糖和木糖醇的含量。该法准确、简便、用时用样少,结果对于发酵法生产木糖醇的过程控制具有指导意义。     

用CDC法计算变轴力杆件的临界力

变轴力杆件是工程中广泛运用的一类持力构件，其稳定计算通常采用数值方法，但数值方法不能象解析方法可以对一类问题求通解。本文通过建立无量纲柱的新概念，并按CDC法导出变轴力压杆临界力的计算公式，得出一批对称荷载作用下的计算结果，并导出了在集中力、均布轴力、三角形分布轴力单独作用和联合作用下压杆临界力相关公式。该方法拓宽了DCD法的适用范围，使数值法具有解析法的优点。     

翘曲理论的计算机验证

对翘曲理论中计算薄壁构件空间变形应力和位移的“动态坐标法”进行了大量的计算机扫描验证,并与传统薄壁构件计算理论相比较,证明该方法是正确的,结果是可靠的。在此基础上,对该方法带来的计算效益和应用前景作了简要的述评。     

离子色谱法在饮用水溴酸盐分析中的应用

采用抑制电导离子色谱法(IC)检测饮用水中的痕量溴酸盐.对样品中高浓度的干扰组分氯离子进行了处理,避免其对测定的影响.溴酸盐浓度在5ng/mL～100ng/mL范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.9999,方法的定量限为2ng/mL(S/N=10),样品加标回收率大于91.6%.该方法经试验,成功地试用于各种饮用水中溴酸盐含量的测定.     

磷脂检测新技术

磷脂广泛存在于自然界,在医药、食品和化工等领域具有重要的作用,但长期以来由于缺乏快速有效的检测手段,使得磷脂的研究受到一定的限制,依靠传统的薄层色谱法、高效液相色谱法很难做到精确定性和定量复杂的磷脂混合物,本文介绍两种磷脂检测的新技术--31P核磁共振波谱法和电喷雾质谱法,对其应用方法和优缺点进行综述.